全自动生化分析仪检测AAT、AAG的性能评价和准确性研究

目的评价贝克曼AU5800全自动生化分析仪检测重庆某公司α1-抗胰蛋白酶(α-1-antitrypsin,a-1-AT,AAT)、α1-酸性糖蛋白(α1-acid glycoprotein,α1-GP,AAG)试剂的分析性能,及其是否符合厂家声明并满足临床需求。方法参考医学检验执行的国家卫生行业标准《临床检验定量测定项目精密度与准确度性能验证》(WS/T492-2016)、《临床化学定量检验程序验证指南》以及CLSI EP5A定量测量方法的精密度性能评价,以AAT、AAG水平测定作为指标,分析并验证贝克曼AU5800全自动生化分析仪的性能,对测量结果的正确度、精密度、线性范围、可报告范围、参考区间等性能进行验证,并将其验证结果与厂商声明的性能和中华人民共和国卫生行业标准进行比较。结果正确度验证:AAT、AAG各3份厂家赋值的样本结果偏倚均<10%。精密度验证:AAT两个水平的批内精密度分别为2.59%,1.72%,两个水平的批间精密度分别为3.03%、3.14%。AAG两个水平的批内精密度分别为4.82%,5.78%,两个水平的批间精密度分别为5.24%、5.37%,均小于行业评价标准,批内精密度8.00%,批间精密度15.00%。线性范围验证:AAT浓度在20~379mg/dl间为线性区间,AAG浓度在20~240mg/dl间为线性区间。AAT可报告范围上限为798.66mg/dl,AAG可报告范围上限为1125.2mg/dl,且厂家提供的生物参考区间可以接受。结论AAT、AAG试剂在贝克曼AU5800全自动生化分析仪上检测的正确度、精密度、线性范围、可报告范围、参考区间等性能均符合要求,主要分析性能达到了厂商声明的性能和有关的质量要求,可满足临床需要。

17-AAG对MCF-7细胞增殖的抑制作用及对STAT3和VEGF表达的影响

目的观察17-AAG对人乳腺癌MCF-7细胞株STAT3、VEGFmRNA及蛋白表达水平的影响。方法体外培养MCF-7细胞，分别给予不同剂量及不同作用时间的17-AAG，采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测细胞增殖能力；RT-PCR和Westernblot法检测各组细胞STAT3和VEGFmRNA及蛋白的表达水平。结果0．165～10．000mg／L17-AAG作用24h、48h对MCF-7细胞有显著的抑制作用，且有明显的时间、剂量依赖性；1．0、2．0、3．0、5．0mg／L17．AAG作用48h后，各组细胞STAT3和VEGFmRNA及蛋白表达水平均下调，且具有浓度依赖性。结论17一AAG对人乳腺癌MCF．7细胞的增殖具有明显的抑制作用，并能抑制STAT3和VEGFmRNA及蛋白的表达，且具有剂量依赖性。

热休克蛋白抑制剂17-AAG通过下调Wnt/β-catenin信号通路抑制多发性骨髓瘤细胞的增殖

目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-AAG抑制多发性骨髓瘤细胞增殖的主要作用机制。方法:应用200、400、600、800 nmol/L热休克蛋白抑制剂17-AAG培养多发性骨髓瘤U266细胞24、48和72 h,分别用MTT法,Western blot和流式细胞术检测17-AAG不同浓度对多发性骨髓瘤细胞增殖率、β-catenin蛋白和C-MYC蛋白的相对表达量及细胞周期的影响。结果:17-AAG不同浓度对骨髓瘤细胞具有抑制作用且呈剂量依赖性(r=0.518,P<0.05)和时间依赖性(r=0.473,P<0.05)。未添加17-AAG的培养液对骨髓瘤细胞株的增殖无时间依赖性抑制作用(P>0.05)。在17-AAG不同浓度下培养多发性骨髓瘤细胞株72 h的结果显示,17-AAG浓度越高,β-catenin蛋白和C-MYC蛋白水平越低(P<0.05)。在相同培养时间下,17-AAG浓度越高,则G_1细胞比例越高(P<0.05)。在相同浓度17-AAG下,培养时间越长,则G_1细胞比例越高(P<0.05)。结论:HSP90抑制剂17-AAG能够抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,其主要作用机制与Wnt/β-catenin信号通路下调和HSP90蛋白表达抑制有关。

热休克蛋白90抑制剂17-AAG对K562/ADR耐药细胞株生长和凋亡的影响

目的研究热休克蛋白90抑制剂17-AAG对耐药白血病细胞生长的影响及其诱导的细胞凋亡作用,为白血病的治疗提供新的研究思路。方法采用MTT法检测17-AAG对细胞增殖抑制的剂量-时间-效应关系;激光共聚焦DA-PI染色法观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡、周期及P-糖蛋白(P-gp)的变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的变化。结果 17-AAG能够明显抑制K562/ADR细胞的生长,大量细胞的核内DNA发生断裂,细胞核边缘化,加药组细胞凋亡率与对照组相比明显增高;加药后细胞被阻滞在G1期,procaspase-3和cleaved Caspase-3表达升高。结论 17-AAG可以通过诱导耐药细胞株K562/ADR的凋亡而抑制细胞生长。P-gp和Caspase-3的表达与凋亡事件的发生具有一定的相关性。

Hsp90选择性抑制剂17-AAG诱导白血病细胞株凋亡的基因谱研究

目的:探讨热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂17-AAG对急性白血病细胞株HL-60和NB4细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。方法:应用CCK-8比色法观察17-AAG对HL-60和NB4细胞的生长抑制作用;用Annexin V/PI标记流式细胞术分析细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的表达水平及其活化状态,采用实时定量PCR法检测17-AAG处理后NB4细胞的凋亡相关基因的mRNA变化。结果:17-AAG呈剂量依赖性抑制白血病细胞的生长。Annexin V测定、细胞周期分析和Caspase-3、PARP1的活化均表明17-AAG诱导白血病细胞的凋亡。实时荧光定量PCR分析发现,17-AAG处理后实验组和对照组相比有56个基因显著上调,23个基因显著下调。结论:17-AAG可诱导白血病细胞的凋亡,抑制细胞增殖。17-AAG处理白血病细胞后凋亡相关基因发生明显变化,激活凋亡信号通路可诱导细胞发生凋亡。

HSP90抑制剂17-AAG对胃癌SGC-7901细胞生长周期和凋亡的影响

目的研究一种特异性的热休克蛋白90抑制剂17-丙烯胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(17-AAG)对人胃癌细胞SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响,分析其可能的作用机制。方法应用MTT比色法检测不同浓度的17-AAG对胃癌SGC-7901细胞的生长抑制率;荧光显微镜下观察PI染色的SGC-7901细胞凋亡形态学变化;采用流式细胞术检测SGC-7901细胞的细胞周期变化及凋亡率变化;通过免疫组化检测胃癌SGC-7901细胞中Fas蛋白的表达。结果 MTT法显示17-AAG能明显抑制胃癌SGC-7901细胞的生长增殖,呈时间、剂量依赖性;流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG处理48 h后使SGC-7901细胞发生G2/M期阻滞,并有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用;细胞免疫组化结果显示,SGC-7901细胞胞浆内有Fas表达,随着药物浓度的加大,阳性表达率也逐渐增加。结论 17-AAG通过改变细胞周期、诱导其凋亡来抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,上调SGC-7901细胞中Fas蛋白的表达是诱导凋亡的作用机制之一。

17-AAG协同顺铂抑制肺腺癌A549细胞的增殖

目的:观察热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-AAG与顺铂(cisplatin,DDP)联用对肺腺癌细胞株A549增殖抑制的协同效应。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度17-AAG、顺铂及两药联用对肺癌细胞株A549的生长抑制作用,并应用中效原理评价两药联用效应。结果:顺铂和17-AAG均对A549细胞的生长有较好的抑制作用,并呈现一定的剂量依赖性,顺铂作用48h时,其IC50值为69.627μmol/L;17-AAG的IC50值为0.455μmol/L。顺铂联合17-AAG显示更强的抑制作用,特别是在低剂量下协同作用更明显。结论:17-AAG联合顺铂对肺癌细胞的增殖具有协同抑制效应。

17-AAG联合紫杉醇对Eca-109食管癌细胞增殖的抑制作用

目的研究17-AAG联合紫杉醇(PTX)对食管癌细胞Eca-109增殖和凋亡的影响。方法予以PTX和17-AAG单独或联合使用作用于Eca-109细胞株,采用MTT法检测其细胞增殖的变化,应用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡的变化。结果与对照组相比,单独使用17-AAG、PTX均能够抑制Eca-109细胞的增殖;0.5μmol/L PTX联合0.625μmol/L 17-AAG可抑制Eca-109的生长,且联合效应明显强于各自单药组(P<0.01);流式细胞仪检测结果显示:17-AAG将Eca-109细胞阻滞于G2/M期,PTX将Eca-109细胞阻滞于S期。17-AAG与PTX联合用药使Eca-109细胞阻滞于G2/M期和S。17-AAG组、PTX组及联合组作用Eca-109细胞株24 h后其凋亡率分别为4.52%、10.91%、29.88%,显著高于对照组(1.32%);联合用药后,可形成明显凋亡峰,明显高于单药组。结论 PTX和17-AAG均可抑制食管癌细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,两者联合可增强上述作用。

实时荧光PCR检测17-AAG对人RPE细胞Akt等基因表达的调控

目的:建立检测17-AAG对人RPE细胞不同处理条件下mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察17-AAG对人RPE细胞中Akt,Raf,Hsp90,Hsp70基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株。当加入处理因素17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据Akt,Raf,Hsp90,Hsp70的基因序列,设计Akt1,Raf1,Hsp90,Hsp70的引物,利用ABI 7300PCR仪和SYBR Green,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析。结果:熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证明了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,17-AAG可以下调Akt及Raf基因的表达,上调Hsp90及Hsp70基因表达。结论:应用SYBR Green实时荧光PCR可以特异、准确地分析RPE细胞相关增殖基因表达差异,为系统研究17-AAG治疗PVR的复杂调控机制创造有力条件。

17-AAG通过STAT3通路调控胃癌细胞VEGF基因及蛋白表达作用探讨

目的:观察17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素(17-allylamino-17-desmethoxy-geldanamycin,17-AAG)对人胃癌MKN-45细胞信号转导和转录活化蛋白3(signal transducer and activator of transcriptions 3,STAT3)、血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)mRNA及蛋白表达水平的影响,并探寻STAT3通路所发挥的作用。方法:体外培养人胃癌MKN-45细胞,分别给予不同剂量及不同作用时间17-AAG进行作用,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力;RT-PCR法和Western Blotting法检测各组细胞STAT3和VEGF mRNA和蛋白的表达水平。结果:0.165～10 mg/L的17-AAG作用24、48 h后对MKN-45细胞有显著的抑制作用,且有明显的时间、剂量依赖性;1.0、2.0、3.0、5.0 mg/L的17-AAG作用48 h后,各组细胞STAT3和VEGF mRNA和蛋白表达均下调,且具有浓度依赖性;3.0 mg/L 17-AAG作用12、24、48h后,各组细胞STAT3和VEGF mRNA和蛋白表达均下调,且具有时间依赖性。结论:17-AAG对人胃癌MKN-45细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能抑制STAT3和VEGF mRNA和蛋白的表达,17-AAG可能通过对STAT3通路的负性调控作用而抑制VEGF表达。

17-AAG对人肝癌HepG2细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的观察17-AAG对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的17-AAG对肝癌HepG2细胞增殖的影响;荧光显微镜观察碘化丙啶(PI)染色的细胞凋亡形态;流式细胞仪检测分析细胞周期分布和凋亡率的变化;免疫组化法检测肝癌HepG2细胞中重组人血管内皮生长因子相关蛋白(VEGF-C蛋白)表达水平变化。结果不同浓度的17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制肝癌HepG2细胞的生长增殖(P<0.05);流式细胞仪分析显示,17-AAG作用HepG2细胞48 h后G2/M期细胞比例上升,G1/G0期细胞比例下降;0.63、1.25、2.5、5.0μmol/L 17-AAG作用HepG2细胞48 h后的凋亡率分别为(3.23±1.43)%、(9.71±2.20)%、(14.15±2.34)%、(23.65±2.58)%;随着药物浓度的加大,VEGF-C蛋白表达逐渐减少。结论 17-AAG对肝癌HepG2细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用,并能抑制VEGF-C蛋白的表达。

17-AAG联合顺铂对人胃癌SGC-7901细胞株增殖和凋亡作用的影响

目的探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-AAG联合顺铂对人胃癌细胞SGC-7901的抑制效应.方法体外培养SGC-7901,采用四氮唑盐比色法测定不同浓度、不同时间17-AAG、顺铂单药和联合处理后SGC-7901的生长抑制情况;采用流式细胞术检测不同浓度17-AAG和顺铂单药、联合处理后对SGC-7901细胞的细胞周期变化及凋亡率变化.结果 2种药物单用均对SGC-7901细胞有明显的生长抑制作用,2种药物联合后呈协同作用,呈时间、剂量依赖性.流式细胞仪细胞周期分析显示,17-AAG和顺铂单药处理24 h后,17-AAG阻滞SGC-7901细胞于G2/M期,顺铂阻滞SGC-7901细胞于S期.并都具有诱导SGC-7901细胞凋亡的作用,其联合用药可显著增加SGC-7901的凋亡率.结论 17-AAG和顺铂均可明显抑制SGC-7901的增值、诱导细胞凋亡,联合用药有一定的协同效应,呈剂量依赖关系.

体外17-AAG对人RPE细胞VEGF及其受体的影响

目的:体外观察17-AAG对人RPE细胞中VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2基因表达的调控。方法:体外培养人RPE细胞株加入17-AAG并作用不同浓度及时间梯度后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据VEGFA,VEGFB,VEGFR1,VEGFR2的基因序列,设计相应的引物,进行RT-PCR,琼脂糖凝胶电泳用于分析引物的特异性,再利用ABI7300PCR仪和SYBRGreen,建立实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct进行基因表达的相对定量分析。结果:17-AAG可以下调VEGFA,VEGFB和VEGFR1基因的表达,而VEGFR2只有再高浓度17-AAG作用时才下调。结论:17-AAG可抑制RPE细胞VEGF及其受体基因。

17-AAG聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备及抗肿瘤活性研究

目的制备一种新型17-丙烯氨基-17-去甲氧基格尔德霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin poly-butylcyanoacrylate nanoparticles,17-AAG-PBCA-NPs)。方法采用界面聚合法制备17-AAG-PBCA-NPs;采用正交实验筛选最优处方;采用纳米粒度仪、透射电镜、扫描电镜对17-AAG-PBCA-NPs进行表征和鉴定;采用动态透析法测定体外释放药物情况;采用四甲基偶氮唑盐〔3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT〕考察17-AAG-PBCA-NPs对5种人肿瘤细胞株增生的抑制作用;以荷S180小鼠为模型,考察17-AAG-PBCA-NPs的抗肿瘤活性。结果界面聚合法制备的17-AAG-PBCA-NPs包封率大于90%,粒径为(180.5±12.0)nm,Zata电位为(-28.38±0.81)m V,表面形态规则均匀;17-AAGPBCA-NPs呈时间依赖性地抑制肿瘤细胞株增生,动物实验表明,17-AAG-PBCA-NPs抗肿瘤活性比17-AAG强,毒性比17-AAG低。结论采用界面聚合法可制备得到17-AAG-PBCA-NPs,制备方法简单、重现性好、包封率高,并显示了较好的抗肿瘤活性。

17-AAG对不同肿瘤细胞系增殖影响作用

目的:观察17-烯丙胺-17-脱甲氧格尔德霉素(17-allylamino-17-desmethoxygeldanamycin,17-AAG)对胃癌MKN-45细胞株、乳腺癌MCF-7细胞株、肝癌HepG-2细胞株和肺癌A549细胞株增殖能力的影响。方法:体外培养四种肿瘤细胞株,分别给予10.0、5.00、2.50、1.25、0.62、0.31、0.160μg/mL的不同剂量的17-AAG进行作用,并分别在24h、48h之后用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞增殖能力的变化。结果:10.0、5.00、2.50、1.25、0.62、0.31、0.160μg/mL作用24h、48h后发现17-AAG在体外细胞试验中浓度1-10μg/mL时对人癌细胞有显著的抑制作用,且有明显的时间,剂量依赖性。结论:17-AAG能够抑制多种肿瘤细胞增殖的能力。

血清PAB、AAG、AAT的检测在肝脏疾病中的意义

目的探讨前白蛋白（PAB）、a1；-酸性糖蛋白（AAG）、a1-抗胰蛋白酶（AAT）在肝脏疾病中的临床意义。方法以散射比浊法测定132例各种类型肝脏疾病病人血清中的PAB、AAG.AAT值。结果PAB在急性肝炎（AH）、慢性肝炎（CH）、肝硬化（LC）.重症肝炎（FVH）、肝癌（HCC）中的测定结果分别为：14．77．8,12．25．4,8．63.8,5．84．3，9．24.2(mg／dl)，明显低于对照组（P＜0．01）AAG在AH、CH.LC.FVH、HCC测定值分别为80．226．2，42.020．0，41．023．2,25．813．6，102．048．0(ml／d10)，其中AH组和HCC组明显高于对照组（P＜0．01），FVH组明显低于对照组（P＜0．01）；AAT在AH、CH、LC、FVH、HCC测定值分别为18339，17843，15162,15252,22672(ml/dl)，其中HCC组明显高于对照组（P＜0．01）。结论PAN是反应早期肝脏功能损害的灵敏指标。PAB、AAG、AAT的检测对肝脏疾病的临床诊断有价值。

微生物来源的Hsp90抑制剂——抗癌格尔德霉素衍生物17-AAG的研究进展

本文主要对微生物来源的Hsp90抑制剂研发情况以及格尔德霉素的衍生物17-AAG(17-丙烯胺-17-去甲氧基,tanespimycin)的分子作用机制、药代动力学、毒性和治疗范围等全方位的重点介绍。并对17-AAG近年来有关研究进展进行了概述。