X-连锁肾上腺脑白质营养不良ABCD1基因突变分析

目的对5例X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-ALD)患儿及其中2例的母亲进行ABCD1基因突变分析。方法聚合酶链反应(PCR)扩增5例X-ALD患儿ABCD1基因的10个外显子及其侧翼序列,直接进行测序。将测序结果与正常ABCD1基因序列比对,确定突变位点和突变形式。同时测定30例健康儿童ABCD1基因序列以明确突变位点是否为基因多态性。结果伴ABCD1基因突变3例,1例为外显子6上518位氨基酸的点突变,为Arg518Gly(CGG→GGG);2例为外显子1上8个碱基缺失(134del8)。同时在外显子7上发现4个位点的基因多态性,分别为Gly551X(GGC→GGT)、Arg554His(CGT→CAT)、Gln567Arg(CAA→CGA)和Val582Ile(GTC→ATC)。2例患儿的母亲均未检测到突变。结论3例X-ALD患儿证实存在ABCD1基因突变,其中外显子1的8个碱基的缺失(134del8)为新发现的突变;新发现中国人外显子7的4个位点基因多态性,分别为Gly551X、Arg554His、Gln567Arg和Val582Ile。

白背飞虱SfABCD1对杀虫剂胁迫的响应表达

【目的】ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transporter,ABC transporter)是一个庞大的膜转运蛋白超家族,在昆虫生长发育和抗药性方面具有重要作用。本研究旨在通过克隆白背飞虱Sogatella furcifera ABCD1基因,并测定其在杀虫剂胁迫下的表达模式,为后续的功能研究提供理论依据。【方法】采用RT-PCR技术克隆白背飞虱ABCD1基因cDNA序列并进行生物信息学分析;通过RT-qPCR技术测定其在白背飞虱不同发育时期(1-5龄若虫和羽化后第1-4天雌雄成虫)、5龄若虫和成虫的不同组织(头部、体壁、脂肪体、肠道、足、翅、精巢和卵巢)中及不同浓度(LC_(10),LC_(25),LC_(50)和LC_(90))噻虫嗪、噻嗪酮和阿维菌素胁迫下3龄若虫中的表达量。【结果】获得一个白背飞虱ABC转运蛋白基因,命名为SfABCD1(GenBank登录号:MW701394),其开放阅读框长2220 bp,编码739个氨基酸,预测分子量为82.08 kD,理论等电点为9.32;SfABCD1与灰飞虱Laodelphax striatellus和褐飞虱Nilaparvata lugens的ABCD1亲缘关系较近。RT-qPCR结果表明,SfABCD1在5龄若虫中表达量最高,且在5龄若虫和成虫各组织中均有表达,在5龄若虫肠道和头部中表达量最高。3龄若虫受杀虫剂胁迫48 h后,与清水处理的对照组相比,噻嗪酮(LC_(10),LC_(50)和LC_(90)),噻虫嗪(LC_(10),LC_(25)和LC_(50))和阿维菌素(LC_(50)和LC_(90))处理组中的SfABCD1表达量均显著上调;LC_(10),LC_(25),LC_(50)和LC_(90)4个浓度的3种杀虫剂处理不同时间后,SfABCD1的表达量在杀虫剂胁迫48 h时与对照差异最大,胁迫96 h时表达差异下降,处理120 h后该基因的表达水平接近对照组。【结论】白背飞虱可通过上调SfABCD1表达量来应对噻嗪酮和噻虫嗪的胁迫,SfABCD1表达量随噻虫嗪浓度的升高而降低;另外,白背飞虱也通过调节该基因的转录水平来响应高浓度阿维菌素的毒害。

肾上腺脊髓神经病一例诊断和治疗

目的报道1例以双下肢无力、走路不稳为主要表现的肾上腺脊髓神经病(adrenomyeloneuropathy,AMN)患者的诊断和洛伦佐油治疗半年的随访经历,并结合文献讨论AMN诊断及治疗。方法纳入应急总医院2022年9月明确诊断的1例AMN患者,分析患者外周静脉血促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)、血皮质醇、血清极长链脂肪酸(very long chain fatty acids,VLCFAs)水平、头颅MRI及AMN相关基因,并观察患者服用洛伦佐油(Lorenzo's Oil)20 mL/d治疗半年后病情变化情况。结果患者治疗前实验室检查结果提示肾上腺皮质功能减退(ACTH水平明显升高,血皮质醇水平明显减低),二十四烷酸(C24:0)、二十六烷酸(C26:0)水平以及C24:0/C22:0、C26:0/C22:0比值等VLCFAs指标增高,脑MRI提示双侧内囊锥体束高信号、大脑脚锥体束稍高信号,高通量全外显子基因测序显示ATP结合超家族D亚组膜1(ATP binding cassette subfamily D member 1,ABCD1)基因(NM-000033)外显子7发生c.1768C>T半合子变异,导致第590位氨基酸由丝氨酸变异为亮氨酸,为错义突变。使用洛伦佐油20 mL/d治疗半年后,临床症状部分好转,复查ACTH、血皮质醇水平等激素指标有所下降,C26:0水平及C24:0/C22:0及C26:0/C22:0比值等VLCFAs指标也均有明显下降。结论以双下肢无力,走路不稳为主要表现的患者,应考虑AMN可能,完善血清极长链脂肪酸和ABCD1基因检测以明确诊断,早诊早治。

肾上腺脑白质营养不良分子诊断中假基因干扰的排除

在基因组DNA水平 ,应用基因突变分析的方法对肾上腺脑白质营养不良进行分子诊断十分重要 .由于人体内存在多个肾上腺脑白质营养不良假基因的拷贝 ,应用PCR RFLP和PCR产物直接测序等常规方法难以检测一部分的基因突变 .为了排除基因组DNA中假基因的干扰 ,利用扩增阻滞突变系统 ,成功地分析了一个肾上腺脑白质营养不良 (R6 17G突变 )家系成员的基因型 .结果表明 ,扩增阻滞突变系统是排除假基因干扰的有效方法之一 .

DHPLC在X-连锁肾上腺脑白质营养不良分子诊断中的应用(附12例报告)

目的探讨DHPLC在X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-ALD)分子诊断中的应用。方法提取12个X-ALD家系及成员的外周血基因组DNA,分15个片段扩增ABCD1基因的10个外显子,应用DHPLC技术对其进行突变筛查,并对出现异常洗脱峰的PCR产物进行DNA序列测定,证实突变位点的存在。结果12个X-ALD家系存在12种不同的ABCD1基因突变,包括8个错义突变、2个移码突变和2个无义突变,即P534R、G343V、R259W、A141T、R401Q、K276E、Y174C、A314P、fs E471、fs A247、S108X和Q177X。结论DHPLC筛查结合DNA序列测定能快速有效检测出ABCD1基因突变。不同的X-ALD家系有不同的ABCD1基因突变位点,突变类型和表型之间无特殊相关关系。

罕见的肾上腺脑白质营养不良家系的临床特点及基因突变

目的分析1个肾上腺脑白质营养不良(ALD)家系患者的临床特点,并检测致病基因ABCD1的突变类型。方法纳入一个4代受累、4例发病的汉族ALD家系。根据临床表现、头颅核磁共振显像及血清极长链脂肪酸浓度检测,明确ALD诊断。用聚合酶链反应及其产物直接测序法检测ABCD1突变。结果患者均为男性,表现为原发性肾上腺皮质功能减退和神经系统功能异常,大脑白质广泛脱髓鞘改变,血清极长链脂肪酸浓度明显升高。患者ABCD1基因第8外显子存在c.1850 G>T半合子突变,而女性携带者基因型为杂合子。结论原发性肾上腺皮质功能减退和神经系统功能异常是ALD的典型临床表现,ABCD1的c.1850 G>T错义突变是我国该疾病致病基因新的突变类型。

7个肾上腺脑白质营养不良家系的基因突变分析

目的对7个肾上腺脑白质营养不良家系进行基因突变分析。方法应用RTPCR技术,对7位患者的ABCD1基因编码区分4个片段进行扩增并对PCR产物直接测序。应用PCR限制性酶切或DNA测序等方法分析相应的基因组DNA,进一步确证ABCD1基因的突变位点。结果在7位患者的ABCD1基因上存在6个不同的碱基置换(709CA、807GA、1161CT、2065CT、2113TC和2235CT)、1个碱基缺失(1801delAG)和1个碱基插入(1126insGCCATCG),分别造成5个错义突变(A141T、R259W、P560L、L576P和R617C)、2个移码突变(fsI246和fsE471)和1个无义突变(S108X)。结论在中国人肾上腺脑白质营养不良患者中发现4个新的ABCD1基因突变,即S108X、fsI246、R259W和L576P突变。不同家系具有不同的突变位点,且突变类型和表型之间无特殊的相关性。

X-连锁肾上腺脑白质营养不良分子诊断中排除假基因干扰的一个新方法

目的:探讨X-连锁肾上腺脑白质营养不良分子诊断中排除假基因干扰的新方法。方法:应用长链RT-PCR技术扩增3个X-连锁肾上腺脑白质营养不良患者的ABCD1基因编码区全长,再分4个片段进行二次PCR,并对PCR产物直接测序;应用巢式PCR对ABCD1基因相应区域进行扩增,其中第一轮PCR产物覆盖ABCD1基因从外显子6至3′非编码区的一个大片段,并对PCR产物进行测序,分析患者的基因组DNA,进一步确证其ABCD1基因突变。结果:在3个X-ALD患者的ABCD1基因上,存在3个不同的碱基改变(2235C>T,2065C>T和2190A>T),分别造成2个错义突变(R617C和P560L)和1个无义突变(K602X)。结论:应用巢式PCR能快速、有效地排除X-ALD分子诊断中ABCD1假基因的干扰。

4个肾上腺脑白质营养不良家系的基因诊断

目的对4个肾上腺脑白质营养不良家系进行基因突变分析。方法应用RT-PCR技术,对4个患者的AB-CD1基因编码区,分4个片段进行扩增并对PCR产物直接测序。应用变性高效液相色谱技术、PCR-限制性酶切等方法分析相应的基因组DNA,进一步确证ABCD1的突变位点。结果在3名肾上腺脑白质营养不良患者的ABCD1基因上,存在2个不同的碱基置换(807G>A和2113T>C)和1个碱基插入(1126insGCCATCG),分别造成2个错义突变(A141T和L576P)和1个移码突变(fsI246);在患儿1母亲的一个ABCD1等位基因上存在1801-1802位碱基缺失,造成移码突变(fsE471),另一个等位基因未发现突变。结论在中国人ALD患者中发现2个新的ABCD1基因突变(fsI246、L576P)。不同家系具有不同的突变位点,且突变类型和表型之间无特殊的相关性。

儿童X-连锁肾上腺脑白质营养不良39例临床特征分析

目的探讨儿童X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-ALD)的临床特征。方法回顾分析39例确诊X-ALD患儿的临床资料。结果39例男性患儿,其中儿童脑型27例,主要首发症状为智力减退、视力障碍和步态异常;单纯肾上腺型12例,10例表现为皮肤色素沉着,另2例无明显临床表现。39例患儿血浆C26:0水平均异常升高。外周血ABCD1基因检测发现3种未见报道的新发变异,分别为c.578C>G(p.Prp 193Arg)、c.1615A>C(p.Met 539Leu^(*))和c.2_5dupTGCC(p.Pro 2=fs^(*))。基因变异为碱基替换的患儿Loes评分更高,且碱基替换组与缺失/重复组的Loes评分存在统计学差异。儿童脑型的预后较单纯肾上腺病型差。结论儿童X-ALD首发症状不典型,碱基变异类型可预测X-ALD病情进展,3种新发变异有待进一步验证。

一例以皮肤色素沉着为唯一临床表现的X-连锁肾上腺脑白质营养不良的诊疗和基因检测分析

X-连锁肾上腺脑白质营养不良(X-linked adrenoleukodystrophy,X-ALD)是一种编码过氧化物酶体跨膜蛋白三磷酸腺苷结合盒亚家族D成员1(adenosine 5′-triphosphate binding cassette subfamily D member 1,ABCD1)基因突变的遗传病,其具有多种临床表现,从首发症状到致死性炎性脱髓鞘的进展过程极其快速。因此,识别早期临床症状,早诊断、早治疗能有效阻止该疾病进展。本研究报道1例少见的以“皮肤色素沉着3年”为唯一临床表型的X-ALD患者的实验室检查及影像学特点,并采用高通量测序为患者及其父母进行ABCD1基因测序。实验室检查结果提示患者肾上腺皮质功能减退,血清极长链脂肪酸浓度增高;肾上腺及脑MRI显示未见明显异常信号影。患者基因检测结果显示ABCD1基因外显子1发生c.521A>C半合子突变,其母亲为同位点杂合突变,故诊断为“X-连锁肾上腺脑白质营养不良”。随访过程中,患者肾上腺皮质功能不全症状没有改善,颅脑MRI显示右侧放射冠、左侧顶叶脑白质见少许点状高flair信号影,提示可能出现脑损伤。仅有皮肤表现而无神经系统异常的X-ALD患者极易被忽视,早期诊断并给予早期干预是延缓该疾病进展的重要途径。因此,建议所有的男性儿童患者以皮肤色素沉着为唯一临床表现,继而诊断肾上腺皮质功能减退时,都应该进行基因检测,及早鉴别X-ALD。

儿童脑型X-连锁肾上腺脑白质营养不良的临床特点及基因突变特征

目的探讨儿童脑型X-连锁肾上腺脑白质营养不良的临床特点及基因突变特征。方法回顾性分析2015年1月至2020年6月就诊于郑州大学第一附属医院的11例脑型X-连锁肾上腺脑白质营养不良患儿的病历资料,包括临床特征、实验室检查、影像学特征及基因检测结果。结果11例脑型X-连锁肾上腺脑白质营养不良患儿均为男性,起病中位年龄6岁,临床表现主要为进行性视力下降、听力、智力、运动能力减退及皮肤黏膜色素沉着增加,查体可见神经系统阳性体征。3例患儿有肾上腺皮质功能不全。6例行血清极长链脂肪酸(VLCFA)测定发现二十六烷酸(C26∶O)、二十四烷酸(C24∶O)/二十二烷酸(C22∶O)、C26∶O/C22∶O升高。11例行头颅MRI检查均可见双侧对称性似蝶翼状脑白质病变,主要累及双侧顶叶、枕叶、侧脑室后角旁、胼胝体压部、大脑脚、丘脑及脑桥等部位。10例行基因检测均发现ABCD1基因致病性变异。发病后患儿神经系统症状持续加重,多数于数年后死亡。结论对脑型X-连锁肾上腺脑白质营养不良患儿,根据临床表现、特征性头颅影像学表现及VLCFA水平可以进行诊断,基因检测可明确诊断。一旦发病可在数周内迅速恶化,多在2~4 a发展至植物状态或死亡。发现了2个ABCD1基因新突变位点,丰富了ABCD1基因突变谱。

肾上腺脑白质营养不良蛋白慢病毒载体的构建和表达

目的构建并表达野生型及突变型肾上腺脑白质营养不良蛋白(adrenoleukodystrophy protein,ALDP)的慢病毒载体,探讨ABCD1基因突变对ALDP结构和功能的影响。方法选择ABCD1基因的H283R和P534R两个突变,首先采用生物信息学方法,进行突变致病性及突变体结构稳定性预测;再利用分子克隆技术,将ABCD1基因克隆到pLEX-MCS慢病毒载体,构建野生型慢病毒载体:pLEX-ABCD1,定点诱变构建2个突变型重组载体:pLEX-ABCD1-H283R和pLEXABCD1-P534R,并与其他包装载体共转染293T细胞包装病毒。收集病毒并感染宿主细胞,RT-PCR检测慢病毒感染细胞中野生型与突变型ABCD1 mRNA表达,免疫荧光及蛋白质免疫印迹法分析野生型与突变型ALDP亚细胞定位及表达。结果生物信息学预测显示H283R和P534R为ALD致病性突变;RT-PCR结果显示慢病毒感染细胞中野生型与突变型ABCD1 mRNA均过表达;免疫荧光及蛋白质免疫印迹结果表明,H283R和P534R突变可能导致ALDP突变体表达量下降,但未观察到ALDP定位改变。结论成功构建ABCD1基因慢病毒表达载体,并评估了H283R和P534R突变对ALDP表达及亚细胞定位的影响,为深入研究ALD发病机制提供了实验依据。

一例肾上腺脑白质营养不良症的临床特点及ABCD1基因新突变分析

目的探讨肾上腺脑白质营养不良症(ALD)患者的临床特点和遗传学病因。方法以1例进行性双下肢无力为首发症状的ALD患者为研究对象(先证者),收集该先证者及其家系成员的临床资料,以高通量测序法对先证者及其3个女儿进行ATP-结合盒D亚组膜1(ABCDl)基因测序和突变分析。结果先证者发病年龄晚,病程长,早期表现为双下肢无力、夜间肌肉痉挛,进行性发展为痉挛性四肢瘫痪、失语、痴呆、吞咽困难、二便失禁。血清极长链脂肪酸浓度增高,糖皮质激素的亚临床分泌异常。头颅影像学检查提示双侧侧脑室周围脑白质区密度对称性减低,脑白质变性。先证者的ABCDl基因检测到c.1367G>A,p.R456H的新半合子变异。其3个女儿存在同位点的核苷酸杂合变异。结论本研究探讨了ALD的临床特点,为该类患者的诊疗提供更多的临床依据。同时发现ABCD1基因的一处新变异,丰富了ALD致病基因的遗传变异数据库。

青年男性,记忆力减退10个月余--成年脑型肾上腺脑白质营养不良

本文报告了1例病程进展迅速的成人脑型肾上腺脑白质营养不良(adrenoleukodystrophy,ALD),患者表现为快速进展的记忆力下降,无其他阳性症状及体征,头颅磁共振见白质多发异常信号。因脑脊液白蛋白轻度升高,抗谷氨酸受体(NMDAR型)抗体阳性被误诊为“自身免疫性脑炎”。2个月后复查磁共振见白质病灶范围增大,且部分强化。通过基因检测发现ABCD1基因c.1817C>T半合子变异被诊断为ALD,口服氢化可的松治疗,患者认知功能持续恶化,渐出现视力、听力损害,吞咽困难,二便失禁,发病后的26个月去世。通过对该病例的报道,提高医师对成人脑型ALD的认识,当男性患者出现快速进展的记忆力下降伴有白质脱髓鞘改变时,无论有无肾上腺皮质功能的异常,均应早期进行确诊性ABCD1基因检测。

X-连锁的肾上腺脑白质营养不良患者ABCD1基因突变分析

目的 分析我国 X-连锁的肾上腺脑白质营养不良 (X- linked adrenoleukodystrophy,X- AL D)患者 ABCD1基因突变。方法 提取 2 5例 AL D患者外周血基因组 DNA,用 PCR扩增和 DNA直接测序的方法 ,分析 AL D患者 ABCD1基因突变。结果 2 5例患者中发现 18例有 17种不同的 ABCD1基因突变 ,突变存在于除 4、9和 10以外的每一个外显子 ,错义突变为最常见的类型。10例患者有 10种不同的错义突变 ,其中4种错义突变是国际首次报道 ;3例患者有 3种不同的无义突变 ;1例患者有碱基缺失导致移码突变 ;1例患者有剪切部位的碱基缺失 ;2例患者同时具有两个相同的同义突变。结论 我国 AL D患者大部分存在ABCD1基因突变 ,无突变热点。不同个体常有不同的突变点 ,检测到的突变率约为 70 %。突变类型和表型之间无特殊的相关关系。

中国肾上腺脑白质营养不良患者中一个新的ABCD1基因突变的鉴定

目的鉴定并分析1个新的肾上腺脑白质营养不良家系的基因突变类型和位点。方法采用长链RT-PCR技术,从外周血提取总RNA并合成cDNA,以cDNA为模板,分4个片段扩增致病基因编码区,将纯化后的PCR产物直接测序,找出基因突变的位点。同时应用限制性酶切分析的方法,分析发病家系所有成员的基因组DNA,以证实所发现的突变。结果患者肾上腺脑白质营养不良基因外显子2上的第343位密码子发生了GGC→GTC改变,使原来编码的甘氨酸被缬氨酸(G343V)取代;患者母亲为G343V突变携带者,患者哥哥的基因型和患者完全相同,其父亲为正常基因型。结论在中国人肾上腺脑白质营养不良患者中发现一个新的ABCD1基因突变,即G343V突变。

ABCD1基因新突变通过影响自噬导致肾上腺脊髓神经病

目的报道国内ABCD1基因c.332T>G(p.V111G)新发位点突变家系,探讨其临床特征和分子机制。方法对2017年5月就诊于郑州大学第一附属医院的1例中年起病患者的临床资料、实验室检查及影像学检查结果进行总结分析,作出临床诊断。通过高通量测序检测该患者的基因突变,并通过Sanger测序验证该患者家族成员中是否存在相同突变。通过蛋白结构预测及致病性分析探讨该突变的致病性。构建肾上腺脑白质营养不良蛋白-绿色荧光蛋白(ALDP-GFP)及ALDP-GFP(V111G)质粒并转染人胚肾293细胞,通过免疫荧光及蛋白免疫印迹分析方法探究该突变的分子机制(在河南省人民医院完成)。结果先证者为39岁男性,确诊为X-连锁肾上腺脑白质营养不良的肾上腺脊髓神经病型,携带ABCD1基因新的杂合错义突变c.332T>G(p.V111G),其母亲和2个女儿均为携带者。蛋白结构预测及致病性分析结果提示该突变具有致病性。在HEK293细胞系中过表达ALDP-GFP(V111G)可导致ALDP的表达量显著降低并伴有从过氧化物酶体膜向细胞质的异常定位改变,及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和beclin-1的显著下调。结论 c.332T>G(p.V111G)是ABCD1基因的一个新的致病性突变,通过影响自噬导致肾上腺脊髓神经病型的发生。

肾上腺脑白质营养不良家系ABCD1基因突变研究

目的分析肾上腺脑白质营养不良(adrenoleukodystrophy,ALD)家系的先证者及ALD携带者所孕育胎儿的ABCD1基因突变。方法首先从RNA途径,应用RT-PCR技术,对2010年10月至2012年3月福建医科大学福总临床医学院5个家系先证者或其母亲的ABCD1基因编码区进行序列测定查找突变,再通过基因组DNA途径进行突变验证。产前诊断采用STR位点分析方法排除母体基因组DNA污染后,应用DNA测序或PCR-限制性酶切方法对5个胎儿的羊水基因组DNA进行突变分析。结果在5个家系的先证者或先证者母亲分别发现5个不同位点的ABCD1基因突变,依次为c.796G>A,c.521A>G,c.1523C>T,c.1534G>A,c.1252C>T。产前诊断结果显示:5个胎儿均为男性,胎儿1、2、3、4存在与先证者相同的突变,胎儿5未检测到与先证者5相同的突变。结论 ABCD1基因突变分析是ALD分子诊断及产前分子诊断准确、可靠的方法。

以Addison病为首发表现的肾上腺脑白质营养不良症一例及ABCD1基因新突变分析

目的报道1例少见的以肾上腺皮质功能减退(Addison病)为首发表现的肾上腺脑白质营养不良症的临床、影像学及基因突变特点。方法详细收集先证者及家系成员的临床资料,采用高通量测序法对先证者及母亲进行ATP-结合盒D亚组膜1(ABCDl)基因测序。结果患者早期表现为全身皮肤色素沉着伴乏力,发热时引发卒中样发作,主要表现为突发性意识丧失及二便失禁,进行性发展为言语不清、行走不稳及视力下降。血清极长链脂肪酸浓度增高。头颅MRI显示双侧胼胝体压部对称性分布的异常信号。患者的ABCDl基因检测到c.874_876del GAG的新半合子变异,其母亲存在同位点的核苷酸杂合变异。结论肾上腺脑白质营养不良的诊断需要结合临床表现、影像学检查及血清极长链脂肪酸水平测定,ABCD1基因突变分析是明确诊断最可靠的方法。