ABCE1基因的siRNA转染对肺癌NCI-H446细胞E-cadherin、β-catenin表达的影响

目的探讨ABCE1基因的siRNA转染对肺癌NCI-H446细胞E-cadherin、β-catenin表达的影响。方法将ABCE1基因的SiRNA表达质粒Si-1、Si-N转染入肺癌NCI-H446细胞,分别为Si-1组、Si-N组。另设正常对照组。用蛋白质印迹和半定量RT-PCR法检测转染后不同时点三组细胞的ABCE1蛋白、mRNA。用免疫组化ABC法检测E-cadherin、β-catenin。结果Si-1组转染96 h后ABCE1 mRNA仅为正常对照组的24.35%,ABCE1蛋白仅为正常对照组的40.82%。Si-1组细胞E-cadherin、β-catenin表达明显高于正常对照组和Si-N组。结论ABCE1基因的siRNA转染能上调肺癌NCI-H446细胞黏附因子E-cadherin、β-catenin的表达。

ABCE1基因siRNA表达质粒的构建及在95-D肺腺癌细胞中的表达

目的构建针对人ABCE1基因siRNA表达质粒,为进一步研究该基因功能奠定基础。方法合成含靶向ABCE1基因siRNA转录模板的茎环结构,与两端分别有BamHⅠ、HindⅢ酶切位点的RNAi-ReadypSIREN-DNR-DsRed-Express质粒连接,大肠杆菌中扩增,测序鉴定,转染到95-D肺腺癌细胞中,观察其表达。结果转化大肠杆菌涂布平板长出阳性菌落,重组质粒电泳初步说明质粒构建成功,测序结果表明RNAi-ReadypSIREN-DNR-DsRed-Express的酶切位点BamHⅠ、HindⅢ之间有71bp的插入片段,其序列与所设计、合成的ABCE1的siRNA转录模板序列一致,该质粒转染到95-D细胞中表达为红色荧光蛋白。结论 siRNA转录模板完整正确地插入RNAi-Ready pSIREN-DNR-DsRed-Express质粒中。

ABCE1基因稳定过表达肺腺癌细胞株的建立

目的构建能够携带绿色荧光蛋白ABCE1基因的表达载体p EGFP-C1-ABCE1,转染肺腺癌细胞株LTEP-a-2,筛选并建立过表达ABCE1基因的细胞株。方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增ABCE1全长m RNA,通过酶切、连接ABCE1及表达载体p EGFP-C1,构建重组质粒p EGFP-C1-ABCE1。采用脂质体转染将重组质粒转染至LTEP-a-2细胞,并以G418筛选阳性克隆,建立起能稳定过表达ABCE1基因的细胞株。结果成功构建重组质粒载体p EGFP-C1-ABCE1,并通过酶切及基因测序验证。将重组质粒成功转染入LTEP-a-2细胞,通过G418筛选后(600μg/m L),获得的细胞株能够稳定持续地表达绿色荧光,其ABCE1基因表达明显高于野生型肺腺癌细胞。结论成功构建了ABCE1表达载体p EGFP-C1-ABCE1,建立稳定过表达ABCE1基因的肺腺癌细胞株LTEP-a-2,为进一步研究ABCE1在肺腺癌中的功能及机制打下了基础。

ABCE1基因通过RNase L途径抑制人大细胞肺癌H460细胞凋亡

目的研究ABCE1基因表达对人大细胞肺癌H460细胞增殖、凋亡的影响并初步探讨其机制。方法体外培养H460细胞,分为A组(转染ABCE1-siRNA-1组)、B组(转染ABCE1-siRNA-2组)、C组(转染空质粒组)以及D组(空白对照组)。将构建好的ABCE1的siRNA(小干扰RNA)载体转染入培养的细胞中,荧光显微镜下观察转染效率,Western Blot法检测ABCE1蛋白以及RNase L蛋白的表达,RT-PCR法检测ABCE1 mRNA的表达,MTT法分析细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果将构建好的载体成功转入了H460细胞,转染后A、B组的细胞活性降低,ABCE1的表达受到阻断(P<0.01),RNase L蛋白含量明显增加(P<0.01),细胞的增殖能力明显降低并逐渐凋亡(P<0.01)。结论 ABCE1基因可促使人大细胞肺癌H460细胞增殖并抑制细胞凋亡,其机制是阻断了2-5A/RNase L细胞通路。

幽门螺杆菌在胃癌组织中的感染情况及其与ABCE1基因的相关性研究

目的探讨幽门螺杆菌(helicobacter pylori,Hp)在胃癌组织中的感染情况及其与ABCE1基因的相关性。方法检测44例胃癌和38例癌旁正常胃组织标本Hp感染情况;采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印记(Western blot)技术检测Hp阳性、阴性胃组织中ABCE1 mRNA、ABCE1蛋白表达情况。结果胃癌组织中Hp感染率显著高于癌旁正常胃组织(P<0.05);低分化胃癌组织Hp感染率显著高于中-高分化胃癌组织(P<0.05);Hp阳性胃组织中ABCE1 mRNA及ABCE1蛋白表达均显著高于Hp阴性胃组织(P<0.01);低分化胃癌组织ABCE1 mRNA及ABCE1蛋白表达均显著高于中-高分化胃癌组织(P<0.05)。结论胃癌的发生、发展与Hp感染及ABCE1基因表达有关,临床可通过Hp和ABCE1基因检测筛查早期胃癌,及时治疗,以降低病死率、改善患者生存质量。

ABCE1基因沉默对人膀胱癌T24细胞增殖和迁移能力的影响

目的:本实验通过沉默ABCE1基因在人膀胱癌T24细胞中的表达,探讨ABCE1基因对细胞的生长、细胞周期及迁移等方面的作用。方法:设计及合成ABCE1的siRNA序列,LipofectamineTM2000转染T24细胞。采用RT-PCR和Western blot法检测基因沉默后ABCE1 mRNA和蛋白的表达情况,采用流式细胞术检测T24细胞周期。并通过CCK-8增殖实验、划痕愈合实验和细胞侵袭实验评价沉默ABCE1基因对T24细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响。结果:沉默ABCE1基因48 h后,T24细胞ABCE1 mRNA及蛋白表达明显降低,差异有统计学意义。T24的细胞周期被阻滞于G0/G1期,且S期的细胞数减少,差异有统计学意义。与对照组和空白组相比,CCK-8增殖实验显示,实验组T24细胞的增殖受到明显抑制。划痕愈合实验显示,实验组迁移能力显著下降,差异有统计学意义。Transwell小室法示,实验组T24细胞的侵袭能力显著下降,差异有统计学意义。结论:特异性干扰ABCE1基因表达可抑制人膀胱癌T24细胞的迁移能力,并抑制肿瘤细胞增殖,因此,ABCE1的siRNA序列可能成为治疗膀胱癌的有效靶点。