儿茶素单体对心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用及机制研究

目的:观察没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法:建立体外培养大鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤模型,倒置显微镜下观察加入各儿茶素单体(50,20,8μg·mL-1)后,各组缺氧再给氧前后细胞形态学和搏动频率变化;以MTT法检测各组细胞的存活率;测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;测定心肌细胞膜ATP酶;分别给予蛋白激酶(PKC)阻断剂十字孢碱staurosporine(stau,10nmol·L-1)和Gi/o蛋白失活剂pertussis toxin(PTX,200μg·mL-1),以探讨其作用机制。结果:GCG,EGCG均能够增加心肌细胞存活率,增加SOD和ATP酶活性,降低心肌细胞LDH的释放,降低培养液中MDA的含量,给予PKC阻断剂和Gi/o蛋白失活剂后,与单纯GCG组、EGCG组比较,心肌细胞搏动频率和存活率降低,同时LDH,MDA释放量增加,SOD活性下降。结论:GCG和EGCG具有抗体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧再给氧损伤的作用,其机制可能与其清除自由基、抑制心肌细胞Ca2+超载以及心肌细胞蛋白激酶C和G蛋白的介导有关。

阿魏酸钠对老年大鼠学习记忆能力改善作用及机制

阿尔采末病（AD）是一种慢性原发、进行性脑变性病,病因复杂,发病机制尚不清楚,但有研究表明,AD患者认知功能下降与突触素（SYP）的丢失存在相关性。另有研究表明,神经生长因子（NGF）可促进海马内突触的重建来提高SYP的表达从而改善AD大鼠的学习记忆能力[1]。

不同负荷运动对大鼠Th1/Th2平衡及脾淋巴细胞PKC活性的影响

目的:探讨运动中淋巴细胞PKC活性对大鼠Th1/Th2平衡的影响。方法:随机将48只大鼠分成不同运动负荷组及对照组,完成相应负荷运动后采集外周血和脾脏,采用ELISA法测试血清IFN-γI、L-4含量,分离并裂解脾脏淋巴细胞获得上清液,采用BCA法定蛋白浓度,通过ELISA分析P-PKC的含量。结果:一次中等负荷运动对Thl/Th2平衡影响不大,一次负重力竭运动后即刻会使IFN-γ和IL-4均下调,超负荷运动10天则使IFN-γ在8h的恢复期内得不到恢复,使Thl/Th2平衡向Th2方向漂移。脾脏淋巴细胞PKC的活性在一次中等负荷运动过程中、后变化不明显,一次负重力竭运动使其活性下降,8h后即可恢复,但经过10天的超负荷运动后恢复8h的PKC活性仍处于较低水平。结论:中等负荷运动对Thl/Th2平衡和PKC活性影响不大1,0天超负荷运动可以使Thl/Th2平衡向Th2方向漂移,可能是脾淋巴细胞PKC活性下降所致。

蛋白酪氨酸激酶活性在人肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 探讨蛋白酪氨酸激酶 (PTKs)活性在人肾小管上皮细胞 (HKC)转分化中的作用。方法 将传代的HKC细胞分为 :(1)无血清对照组 (C) ;(2 )酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)组 (A) ;(3) genistein组 (G) ,加入 80ng/ml重组人aFGF条件下 ,分别加入不同浓度的 genistein ;培养 72h。应用免疫组化检测HKC细胞表达α SMA(α smoothmuscleactin ,α SMA)的变化 ;对转分化过程中PTKs的活性用流式细胞仪加以分析。结果 aFGF(A)组加入 80ng/mlaFGF后a 平滑肌动蛋白 (a SMA)表达增强 ,细胞a SMA阳性率 (6 0 .6 0± 2 .70 ) %较对照组 (C) (3.35± 1.4 5 ) %有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。当G4,5组介入genistein浓度 4 8、96 μg/ml时 ,细胞α SMA阳性率为 (3.90± 2 .0 9) % ,(3.98± 1.75 ) % ,较aFGF组 (A)明显降低 (P <0 .0 1)。PTKs的活性随加入aFGF的浓度增加而增高 ,当aFGF的浓度为 2 0、4 0、80ng/ml时 ,分别比对照组 (C)PTKs的活性增加 16 %、17%、2 4 .6 % ,当介入genistein剂量为 6、12、2 4、4 8μg/ml时 ,分别比aFGF组 (A)PTKs的活性下降 4 5 .6 %、5 3.5 %、6 6 %、81.9% ,干预因素作用下HKC细胞PTKs活性与genistein剂量呈负相关 (r =- 0 .987,P <0 .0 5 )。

AtSIAK在植物抗盐胁迫响应中的功能研究

AtSIAK基因在拟南芥中编码ABC1类蛋白激酶,RT-PCR检测AtSIAK基因在拟南芥的根、茎、叶、花、角果等组织中均有表达,与利用AtSIAK基因的启动子驱动GUS报告基因的研究结果一致.AtSIAK基因受不同胁迫(MV和NaCl)和激素ABA、SA处理均有明显的上调表达,其中在NaCl处理下最明显.不同浓度NaCl处理使35S::AtSIAK过表达植株比野生型(Columbia)和siak1突变体的种子萌发率和子叶变绿率高,表明AtSIAK基因参与抗盐胁迫的响应.

抗Gleevec(STI-571)耐受的Bcr-Abl蛋白酪氨酸激酶抑制剂研究进展

综述了抗G leevec(ST I-571)耐受的B cr-A b l蛋白酪氨酸激酶抑制剂的研究进展,主要介绍了PD 166326,BM S-354825,AM N 107和ON 012380四种酪氨酸激酶抑制剂.

血管紧张素Ⅱ对心肌成纤维细胞蛋白激酶Cε和蛋白激酶Cα表达及转位的影响

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠心肌成纤维细胞(MFs)蛋白激酶Cε(PKCε)和蛋白激酶Cα(PKCα)的表达及转位的影响,并探讨这两种PKC亚型在心室重构中的作用。方法:以第2～4代MFs分实验组(加AngⅡ10-6mol/L)和对照组(不加AngⅡ)通过间接免疫荧光法观察PKC亚型ε和α在细胞内的分布和定位,Image-pro-plus4.0版专业图像处理软件对荧光强度进行半定量统计。结果:荧光显微镜下观察到对照组和实验组PKC亚型ε都存在于膜、胞浆和核-细胞骨架,实验组强度明显增强,尤以核-细胞骨架为甚;对照组PKC亚型α主要存在于核-细胞骨架,而实验组α亚型存在于膜、胞浆和核-细胞骨架,强度都明显增加,尤以核-细胞骨架为甚;且PKC亚型ε和α荧光强度半定量比较实验组均显著高于对照组(P<0.001)。结论:AngⅡ对PKC亚型ε和α在MFs的表达和转位有显著影响,提示PKC亚型ε、α可能在MFs信号转导过程中起重要作用。

CRH促进大鼠腹腔巨噬细胞IL-6分泌及其受体途径

目的探讨促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)对大鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素-6(IL-6)分泌的影响及其受体途径。方法将原代培养的大鼠腹腔巨噬细胞分为对照组、CRH组、CRH受体(CRHR)1选择性阻断剂CP-154526+CRH组(简称CP+CRH组)、CRHR1/2非选择性阻断剂α-helical CRH9-41+CRH组(简称HL+CRH组)以及蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89+CRH组(简称H89+CRH组)5组。对照组仅加入新鲜RPMI1640培养液2 mL培养;CRH处理组加入1×10^(-9) mol/L CRH培养液2 mL;后3组分别加入含CP-154526(5×10^(-4) mol/L)、α-helical CRH9-41(1×10^(-6) mol/L)以及H89(1×10^(-6) mol/L)培养基预孵育2 h,然后加入CRH使培养液CRH终浓度为1×10^(-9) mol/L。各组分别于CRH刺激后0.5、1、2、4、8 h收集培养皿中上清液,应用ELISA法检测IL-6水平。结果对照组巨噬细胞分泌IL-6维持在低水平。CRH组巨噬细胞分泌IL-6在2 h时增加,达(7.7±0.741)μg/g prot,高于同一时点的对照组(P<0.05),4 h时达高峰[(16.60±3.94)μg/gprot],接近同时相点对照组的3倍(P<0.01)。CP+CRH组巨噬细胞IL-6分泌量在2、4 h时下降非常显著,与同时点CRH组比较分别下降约88%、92%(P<0.01),低于同时点对照组(P<0.01)。H89+CRH组中巨噬细胞分泌IL-6在2、4 h显著下降(P<0.01),其抑制效应约66%～79%。结论 CRH可通过CRHR1激活巨噬细胞促进IL6分泌,与细胞内PKA信号密切相关。CRH在激活巨噬细胞的过程中可能起到允许和易化作用。

肾上腺素致心肌细胞肥大的机制

目的 :探讨肾上腺素致心肌细胞肥大中的机制。方法 :在培养新生大鼠心肌细胞上 ,通过测量心肌细胞表面积和 [3H]-Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大。结果 :肾上腺素能明显增加心肌细胞表面积和 [3H]-Leu的掺入量 ,α受体阻滞剂 (酚妥拉明 )、β受体阻滞剂 (心得安 )、百日咳毒素 (PTX)和蛋白激酶C(PKC)抑制剂 (calphostinC)均可抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和 [3H]-Leu的掺入量增加。结论 :肾上腺素诱导的心肌细胞肥大与肾上腺能受体 (α受体和 β受体 )激动有关 ,并通过G蛋白和PKC介导。

慢性乙型肝炎产妇胎盘组织丝裂原激活蛋白激酶表达与乙型肝炎病毒宫内传播的研究

目的通过观察孕妇胎盘组织的丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）表达与乙型肝炎病毒（HBV）持续感染的关系，探讨细胞内信号变化与HBV宫内传播分子机制。方法研究对象为2010年1月至2011年11月在我院自然分娩或剖宫产的慢性乙型肝炎产妇52例，分为HBeAg阳性组（22例）和HBeAg阴性组（25例），5例肝功能正常、HBV和丙型肝炎病毒（HCV）血清标志物均为阴性的产妇为正常对照组。均于分娩后迅速无菌收集胎盘组织，应用定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测胎盘组织中MAPKmRNA水平，并分别定量检测其血清HBV—DNA和HBeAg水平。结果HBeAg阳性组HBV—DNA水平高于HBeAg阴性组，组间差异有统计学意义[（0．6±0．5）×10^6拷贝／L比（4．6±2．1）×10^6拷贝／L，P〈0．01]。正常对照组、HBeAg阴性组和阳性组的MAPK基因表达分别为0．98、0．70、0．56，3组之间分别两两比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论胎盘组织中MAPK的表达与其持续感染HBV有一定关系。

化学诱发大鼠肝癌的亚细胞组分中两类丝氨酸蛋白激酶的动态变化

用二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发大鼠肝癌，隔周测定肝脏胞液、膜性和胞核中的蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）的活力。发现胞液ＰＫＡ在诱癌过程中活力改变不大，胞液ＰＫＣ则逐步增高，在第１３周和２０周形成两个活力高峰。膜性ＰＫＡ和ＰＫＣ都呈双相变化，即在癌前期（１０－１４周）增加，癌形成期（１７－２０周）反而降至正常以下，胞核ＰＫＡ和ＰＫＣ也都在癌前期升至高峰，而癌形成期则低于癌前期，但仍高于正常（ＰＫＡ）或接近正常（ＰＫＣ）。因只有膜性ＰＫＣ在大鼠老化时降低，故这些变化不是鼠龄变化的结果，而是ＤＥＮ诱癌所引起，其变化机理可能与下降调节、细胞内转位或两型同工酶相反的升降变化有关。

PDGF/ROCK通路在AcSDKP抑制大鼠矽肺纤维化形成中的作用

目的:探讨血小板源性生长因子/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(PDGF/ROCK)通路在肺纤维化发病机制中的作用以及N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)能否通过对PDGF/ROCK的调节而发挥抗矽肺纤维化作用。方法:采用非暴露式气管二氧化硅混悬液灌注法制备大鼠矽肺模型。60只SPF级健康成年Wistar大鼠随机分为模型对照4周组、模型对照8周组、矽肺模型4周组、矽肺模型8周组、AcSDKP治疗组和AcSDKP预防治疗组,每组10只。免疫组织化学染色法检测各组大鼠肺组织中phospho-PDGFR-β的表达与分布,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PDGFR-β、phosphoPDGR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果:与相应模型对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织中α-SMA、PDGFR-β、phospho-PDGFR-β、ROCK以及Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);形态学检测可见较多的phospho-PDGFR-β阳性表达细胞分布在矽结节与间质纤维化区域。与矽肺模型4周组和模型8周组比较,AcSDKP治疗组和预防治疗组大鼠肺组织中α-SMA、PDGF-β、phospho-PDGFR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);免疫组织化学染色,phospho-PDGFR-β蛋白表达明显减少。结论:PDGF介导的ROCK信号转导通路可能通过促进大鼠肌成纤维细胞转化而促进矽肺大鼠肺组织中的胶原合成,进而促进矽肺纤维化的形成。AcSDKP可能通过PDGF/ROCK通路抑制矽肺大鼠肺内肌成纤维细胞的分化,减少其胶原的合成与分泌,进而发挥抗矽肺纤维化的作用。

PDGF/ROCK通路介导的肌成纤维细胞分化在大鼠矽肺形成中的作用

目的:探讨PDGF/Rock通路介导的肌成纤维细胞分化在大鼠矽肺纤维化形成中的作用。方法:采用非暴露式气管二氧化硅混悬液灌注法制备大鼠矽肺模型,SPF级健康成年Wistar大鼠40只随机分为四组:模型对照4周组、模型对照8周组、矽肺模型4周组、矽肺模型8周组,每组10只。Western blot检测肺组织内α-SMA、phosphoPDGF-β、ROCK、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果:大鼠矽肺模型制备成功。与相应对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内α-SMA、phospho-PDGFR-β、Rock以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均明显增加,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PDGF介导的ROCK信号转导通路可能通过促进大鼠肌成纤维细胞转化而促进矽肺大鼠肺组织内的胶原合成,进而促进矽肺纤维化的形成。

Ac-SDKP对ROCK通路介导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的调节作用

目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（Ac-SDKP）是否能够通过对转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的ROCK通路的调节,抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化.方法 胰酶消化法原代培养肺成纤维细胞,取4代肺成纤维细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组、Y-27632干预组和Ac-SDKP干预组.激光共聚焦扫描显微镜观察ROCK、SRF以及d-SMA在细胞内的定位与分布情况;蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测ROCK、SFR、α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白在肺成纤维细胞的表达;实时定量荧光聚合酶链反应法（Real time PCR）检测ROCK、SFR、α-SMA mRNA的表达.结果 与对照组相比较,给予TGF-β1诱导刺激后,激光共聚焦扫描显微镜显示胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝,诱导刺激6、12、24 h后,ROCK、SRF、α-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增强,差异均有统计学意义（P＜0.05）.与TGF-β1诱导分化组比较,给予Y-27632干预后,在相应时间点ROCK、SRF、d-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.给予Ac-SDKP干预后,在相应时间点ROCK、SRF、α-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达也较TGF-β1诱导分化组明显降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 Ac-SDKP能够通过对TGF-β1介导的ROCK信号转导通路的调控,阻抑大鼠成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化和抑制胶原蛋白的合成,可能是Ac-SDKP发挥其抗（矽）肺纤维化的作用机制之一.

慢性氟中毒大鼠脑组织中c-Jun氨基末端激酶表达水平观察

目的 观察慢性氟中毒大鼠脑组织中c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号转导激酶表达变化,进一步揭示慢性氟中毒神经损伤的分子机制.方法 SD大鼠随机分为3组：对照组、低氟组、高氟组,每组24只,饮用水含氟量分别为＜0.5和5.0、50.0 mg/L,实验期为6个月.用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟及血氟,用Western blotting和免疫组织化学方法检测脑组织中JNK信号转导激酶的表达和分布,并分析血氟与活化的JNK激酶的相关关系.结果低氟组和高氟组大鼠尿氟[（2.56±0.91）、（5.73±3.14）mg/L]和血氟[（0.36±0.14）、（0.50±0.18）mg/L]均较对照组[（0.92±0.30）、（0.12±0.07）mg/L]升高（P均＜0.05）.高氟组（1.74±0.69）脑组织phospho-JNK表达高于对照组（1.00±0.37）和低氟组（1.20±0.28,P均＜0.05）;total-JNK蛋白表达水平3组间比较,差异无统计学意义（F=0.046,P＞0.05）.phospho-JNK、total-JNK阳性表达神经元主要集中在皮质、海马和背侧丘脑,其中高氟组大鼠phospho-JNK在顶叶皮质（119.3±14.1）、枕叶皮质（112.7±5.4）、海马CA3区（100.6±8.9）、背侧丘脑（117.8±10.4）及橄榄核（112.6±5.9）中阳性表达较对照组（104.1±8.9、106.6±9.6、106.6±9.7、108.9±6.4、100.3±8.4）和低氟组（96.7±17.1、102.5±8.3、106.4±6.5、110.2±9.3、102.4±4.7、102.5±9.8）明显增高（P均＜0.05）,而total-JNK在各组大鼠脑组织中阳性表达分布未见明显改变（P均＞0.05）.相关分析结果发现,随大鼠血氟升高,脑组织中phospho-JNK表达呈增高趋势,二者存在正相关关系（r=0.677）.结论慢性氟中毒导致脑组织中磷酸化JNK表达改变,并与机体中氟蓄积量存在相关关系,这些改变可能与慢性氟中毒导致的神经损伤有关系.

基于“心受气于脾”探讨心痛泰调控p38 MAPK/AP-1对动脉粥样硬化兔的中医证候和VSMC胶原纤维的影响

目的:基于"心受气于脾"探讨心痛泰调控p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/转录激活因子-1(AP-1)对动脉粥样硬化兔的中医证候积分和血管平滑肌细胞(VSMC)胶原纤维的影响。方法:120只清洁级兔随机分为假手术组,痰瘀互结模型组,心痛泰低剂量组、中剂量组、高剂量组和瑞舒伐他汀组。采用高脂喂养+球囊损伤法,造成痰瘀互结病证结合动脉粥样硬化兔模型,造模后予以相应药物灌胃8周(心痛泰低、中、高剂量组和瑞舒伐他汀组的给药量分别为2.3,4.6,9.2 g·kg^(-1)和0.55 mg·kg^(-1))。给药周期结束时取腹主动脉,苏木素-伊红(HE)染色观察易损斑块的情况;免疫组化法(IHC)测定基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1);马松(Masson)染色观察平滑肌细胞胶原纤维分解情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定主动脉组织p38 MAPK,AP-1蛋白的表达;采用中医证候评分表评价痰瘀互结证中医证候积分。结果:与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组MMP-9含量显著降低,TIMP-1含量显著升高,p38 MAPK蛋白的表达,AP-1的核转位显著降低(P<0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中、高剂量组,瑞舒伐他汀组MMP-9明显降低,TIMP-1明显升高,p38 MAPK蛋白的表达,AP-1的核转位明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,心痛泰各剂量组、瑞舒伐他汀组的中医证候积分均明显改善(P<0.05,P<0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中、高剂量组,瑞舒伐他汀组的中医证候积分均显著改善(P<0.01)。Masson染色显示,模型组平滑肌纤维排列紊乱,胶原分解增多,纤维帽变薄,斑块易损性增加;与模型组比较,心痛泰各组和瑞舒伐他汀组平滑肌细胞排列较为整齐,胶原纤维分解减少,斑块稳定性增加。结论:心痛泰可下调p38 MAPK,MMP-9的表达,提高TIMP-1的水平,减少AP-1核转位,减少平滑肌细胞胶原纤维的分解,改善痰瘀互结证的中医证候评分。心痛泰可能通过调控p38 MAPK/AP-1信号通路及下游的细胞因子,稳定易损斑块,改善动脉粥样硬化之痰瘀互结证。

活血解毒方对糖尿病大鼠神经中AC-cAMP-PKA途径的影响

目的:观察腺苷酸环化酶(AC)-环磷腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)途径在糖尿病大鼠周围神经中的变化及活血解毒方对其的影响。方法:雄性SD大鼠分为正常组、模型组、甲钴胺组、活血解毒方高低剂量组。链脲佐菌素(streptozocin,STZ)腹腔注射65mg/kg造模,放免法检测坐骨神经内cAMP水平,免疫组化法检测坐骨神经中AC、PKA的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠坐骨神经内AC、cAMP水平降低;与模型组比较,活血解毒方高、低剂量组大鼠坐骨神经内AC表达升高,高剂量组cAMP含量升高。结论:AC-cAMP在糖尿病大鼠周围神经中表达水平下降,活血解毒方可能通过调控AC-cAMP途径防治糖尿病神经病变。

Ac-SDKP对ROCK通路介导矽肺大鼠肌成纤维细胞分化抑制作用

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路介导的肌成纤维细胞分化的抑制作用。方法无特定病原体级建康成年雄性Wistar大鼠120只随机分为对照组(支气管灌注1 ml灭菌生理氯化钠溶液)、矽肺模型组[支气管灌注质量浓度为50 g/L二氧化硅(SiO2)1 ml]、Ac-SDKP前处理组(支气管灌注质量浓度为50 g/L SiO21 ml,灌注前给予Ac-SDKP),分别于染尘后1、2、4、8周处死(每亚组10只)。采用免疫组织化学法检测肺组织内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布与表达,免疫印迹法检测肺组织内转化生长因子-β1(TGF-β1)、ROCK、血清反应因子(SRF)、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果与对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增加(P<0.05),并具有一定时间依赖性。与矽肺模型组比较,Ac-SDKP前处理4、8周组,大鼠肺组织内TGF-β1、ROCK、SRF、α-SMA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均降低(P<0.05)。结论 Ac-SDKP能够通过对TGF-β1介导的ROCK信号转导通路的调控,阻抑矽肺大鼠肌成纤维细胞的分化。

血管紧张素Ⅱ对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及其信号转导机制的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对新生大鼠心肌成纤维细胞(MFs)增殖及蛋白激酶Cε(PKCε)和蛋白激酶Cα(PKCα)的表达及转位的影响,了解AngⅡ的促增殖和信号转导机制。方法以差速贴壁法原代分离提纯培养SD乳鼠MFs为实验模型,免疫组织化学法鉴定后传代培养,第2-4代MFs分为实验组(加AngⅡ10-6mol/L)和对照组(不加AngⅡ)培养;四氮唑盐(MTT)比色法检测MFs增殖;通过间接免疫荧光法观察实验组和对照组PKC亚型ε和α在细胞内的分布和定位,Image-Pro-Plus4.0版专业图像处理软件对荧光强度进行半定量统计。结果1.实验组MFs数量较对照组显著增加(P<0.001);2.实验组和对照组荧光显微镜下初步观察:对照组PKC亚型ε存在于细胞膜、胞质和核-细胞骨架3个部分,但均较弱;实验组PKC亚型ε在细胞膜、胞质和核-细胞骨架3个部分强度明显增强,尤以核-细胞骨架为甚;对照组PKC亚型α主要存在于核-细胞骨架;实验组PKC亚型α在细胞膜、胞质和核-细胞骨架3个部分强度均明显增加,尤以核-细胞骨架为甚;且PKC亚型ε和α荧光强度半定量比较,实验组均显著高于对照组(Pa<0.001)。结论AngⅡ有促进MFs增殖的作用,PKC亚型ε、α可能在MFs信号转导过程中起重要作用。

Ghrelin对体外大鼠血管内皮细胞eNOS活性的影响及机制研究

目的探讨Ghrelin对内皮型一氧化氮合成酶（eNOS）活性的影响和作用机制。方法分离培养大鼠主动脉血管内皮细胞并分为对照组（c组）和Ghrelin组。Ghrelin组加入终浓度为10、50、100和200nmol／LGhrelin孵育3h收集标本。采用Westernblot法测定内皮细胞eNOS和PKC蛋白表达水平。结果与对照组相比，Ghrelin组eNOS磷酸化水平呈剂量依赖性增加（P〈0．05），PKC磷酸化水平呈剂量依赖性降低（P〈0．05）。结论Ghrelin可提高内皮细胞eNOS的活性，其机制可能与PKC通路的失活有关。