ABO血型变异的分子基础研究

目的 对临床ABO血型变异标本进行ABO亚型、类孟买血型与基因型关联性研究,以探讨这2种血型产生的可能分子背景,为ABO血型的准确鉴定与预判提供精确的基因检测靶点和理论依据。方法 对2022年2—12月瑞金医院2.42万名血型鉴定患者,以及期间来自外院送检10例ABO疑难标本(疑似ABO亚型3例,疑似类孟买血型7例)进行血清学分析,对血清学鉴定为ABO亚型、类孟买血型的行DNA直接测序或克隆后测序分析ABO、FUT1、FUT2基因序列。结果 在共计2.42万血型鉴定患者中检出7例ABO亚型;外院送检的10例疑难标本检出2例ABO亚型、1例正常A型、7例类孟买血型。我们共鉴定出:1)9例ABO亚型,表型及其对应基因型分别为:1例A_(el)(AEL.02/O.01.02)、1例A_(el)B(AEL.05/B.01)、3例B_(3)(2例B3.03/O.01.01、1例B3.03/O.01.02)、1例B(A)(BA.02/O.01.01)、1例AB_(weak)(A1.02/BW.07)、1例B_(weak)(BW.31/O.01.02)、1例A_(2)B_(weak)(A2.05/BW.31);2)7例类孟买血型,表型及其对应基因型分别为:1例AB_(m)^(h)(FUT1^(*)01N.13/FUT1^(*)01N.13)、4例A_(m)^(h)(3例FUT1^(*)01N.06/FUT1^(*)01N.13、1例FUT1^(*)01N.13/FUT1^(*)01N.13)、2例B_(m)^(h)(FUT1^(*)01N.06/FUT1^(*)01N.06、FUT1^(*)01N.06/FUT1^(*)01N.13),7例类孟买的FUT2基因型均为FUT2^(*)01/FUT2^(*)01。结论 ABO血型变异标本需联合血清学与分子生物学方法进行鉴定,方能提高对血型变异标本的鉴定准确率,从而为临床安全输血、器官移植、胎母免疫性溶血病的预测与防治提供参考。

2个新的ABO血型等位基因的发现和序列分析

目的 探讨4例ABO血型正反定型不符标本的遗传背景。方法 采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行亚型鉴定;采用PCR方法扩增ABO基因的7个外显子;采用测序方法对7个外显子进行直接测序。结果 血型血清学试验证实4例标本为ABO亚型,分别为:Bx(1例);ABx(1例);Ax(2例)。基因直接测序发现Bx和ABx在ABO~*B.01基础上1~6外显子未发生改变,仅在B等位基因第7外显子发生了449位核苷酸A>G的突变;2例Ax在ABO~*A1.01基础上1~6外显子未发生改变,仅在A等位基因第7外显子发生了467位核苷酸C>T的突变和798位插入了一个碱基T,以上的基因位点改变均导致了ABO血型的血清学表型变化,表现为ABO亚型。结论 研究揭示了4例ABO亚型的分子遗传背景。发现2个新的ABO血型等位基因,即:c.449A>G单基因位点突变,c.467C>T的突变和c.798insT单碱基插入。

ABO血型变异与B糖基转移酶关系研究

目的研究ABO血型B亚型系统Bw亚型与B糖基转移酶的关系。方法运用血型血清学鉴定方法鉴定1个家庭2例ABO血型的Bw亚型,运用聚合酶链式反应的方法扩增糖基转移酶1~7号外显子,送到试剂公司测序。结果直接测序发现2例ABO血型的Bw亚型,其中B糖基转移酶基因第721位C>T的转变,导致糖基转移酶多肽链Arg241Trp的转变。结论糖基转移酶基因第721位的C>T的突变引起糖基转移酶活性的消失或者减弱,导致Bw亚型。

无锡地区无偿献血者ABO亚型血型血清学及分子生物学特征研究

目的调查并分析无锡地区无偿献血者ABO亚型血型血清学及分子生物学特征。方法2016年5月~2019年6月,有19例无偿献血者标本经血型血清学初步判定为ABO亚型。14/19例标本进行分子生物学检测,其中11例同时采用PCRSSP(序列特异性引物聚合酶链反应)方法及DNA测序方法进行ABO基因检测,另3例仅采用了DNA测序方法检测。结果120118名无偿献血者中,用血型血清学方法检出ABO亚型的频率约为1.6/万,且B亚型数量多于A亚型;分子生物学检测获得Ael 02、A201、Bw27、Bel 03、Bw22、B 310、A217、CisAB 01、B(A)02九种ABO突变等位基因;3例标本在第1-7号外显子未见异常,发现1例新等位基因(GenBank:MT281528)。结论用血型血清学、PCR-SSP和DNA基因测序三种方法结合更能准确地鉴定ABO亚型。

261例G6PD缺乏症患儿基因突变型与血型关系的探讨

目的:初步探讨ABO血型与葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenas,G6PD)缺乏症基因突变型的交互作用及分析。方法:从G6PD缺乏症患者中,运用二代测序技术筛选出G1388A、G1376T、A95G点突变的患者;血清学方法检测血型。应用SPSS 21.0软件对结果进行比较分析。结果:355例缺乏症患者中检出261例基因突变,突变检出率为73.5%;且基因突变型在ABO血型的血型分布上有显著差异(P<0.05),具有相关性。结论:ABO血型与G6PD缺乏症基因突变型之间存在交互关系。

一个类孟买家系的分子遗传学分析

目的探讨一个类孟买家系的分子遗传学机制。方法采用血清学方法鉴定先证者及其父母的红细胞H抗原。采用高保真PCR扩增先证者及其父母的α1,2岩藻糖基转移酶(FUT1)基因编码区序列。PCR产物经TA克隆后进行测序、比对分析FUT1基因编码区序列。结果凝胶电泳分析证实成功扩增FUT1基因编码区序列;克隆后测序、比对分析发现先证者检出1种已知突变(h1nt547-552△AG),为h1/h1纯合子;先证者父母为H/h1杂合子。结论 FUT1基因突变以常染色体隐性遗传方式导致先证者类孟买血型的形成。

B糖基转移酶p.R168W突变导致B_(el)亚型的分子机制研究

目的对B糖基转移酶R168W突变导致B_(el)亚型的分子机制进行研究。方法免疫血清学、ABO基因型SSP-PCR检测及直接测序患者及其家系成员ABO基因第6、第7外显子测序。构建3D分子模型,并就GTB蛋白突变对结构影响进行预测。结果经吸收放散试验在患者红细胞上检出弱B抗原,血清中未检测到抗-A、检出抗-B;患者女儿血清学结果呈正常B型。SSP-PCR结果证实患者及其女儿ABO血型基因型为O1/B和B/B型。对ABO基因第6、第7外显子测序,患者及其女儿带有c.502C>T突变,即B_(el)03等位基因,导致氨基酸置换R168W。分子模建与分析提示突变可能降低了蛋白结构的稳定性,影响了B转移酶的总体活性。结论 ABO基因c.502C>T突变通过减低GTB的稳定性导致患者出现B_(el)表型。

Bx02等位基因的鉴定及其编码GTB酶3D建模

目的对2例ABO正反定型不一致的血液标本进行鉴定并探索其分子机制。方法采用血清学标准方法对2例ABO正反定型不一致的标本进行ABO血型鉴定,采用PCR-SSP技术进行ABO基因分型,并对ABO基因外显子6和7进行直接测序和克隆测序。应用Pymol软件模拟3D结构模型并预测GTB蛋白突变对结构影响。同时采集先证者父亲的血液标本进行检测。结果先证者红细胞检测有B抗原,血清中有抗-B。PCR-SSP基因分型结果为O1/B。直接测序显示第6外显子261delG/G、297A/G,第7外显子526C/G、646A/T、657C/T、681A/G、703A/G、771C/T、796A/C、803C/G、829A/G、905A/G、930A/G和1096A/G杂合,基因型为Bx02/O02。克隆测序结果与ABO*B.01等位基因相比较,905位存在A>G突变。3D结构模拟提示Asp302Gly可能造成GTB酶活性或功能改变。结论鉴定了2例Bx02等位基因,血清学和基因分型的方法联合检测对于准确鉴定ABO血型有重要意义。

ABO血型基因启动子区域碱基变异导致B抗原表达减弱的分析

目的探讨4例ABO血型抗原表达减弱样本的分子生物学机制。方法采用微柱凝集法及盐水试管法进行ABO血型血清学检测,对ABO基因第1~7外显子及其上游启动子区域PCR产物直接测序进行ABO血型基因分型。结果4例样本(3例为患儿,1例为患儿的母亲)的红细胞与B抗体反应均出现混合视野(mf)现象,3例患儿表型为ABweak、例2母亲为Bweak。基因测序显示3例样本在ABO基因启动子区域发生-35至-18位的碱基缺失,通过家系分析,提示该变异发生在B等位基因;1例样本ABO基因在启动子区域发生-119位C>T新变异。结论启动子区域序列发生变异可导致ABO血型抗原的表达减弱。

α1,3半乳糖基转移酶新等位基因278C>T的鉴定

目的研究中国汉族人群ABO血型系统中Bw变异型的分子遗传背景,发现并鉴定一个新的ABO等位基因。方法血型血清学方法鉴定1例ABO血型疑难样本,应用聚合酶链反应、逆转录-聚合酶链反应和DNA序列分析等方法对先证者ABO基因转录调控序列和全编码序列进行突变筛选和检测。结果血清学和家系调查鉴定该样本为Bw表型,对gDNA和cDNA研究发现该样本存在第6外显子278C/T杂合,单倍体分析发现一种新的Bw等位基因,该等位基因与B101相比,差异仅在第6外显子的278C>T错义突变,导致多肽链P93L替换,该突变点位于以前报道的Bw等位基因功能域之外。结论在中国人群中发现一种新的导致Bw变异型的ABO等位基因。

一种ABx变异型相关的B糖基转移酶基因新突变研究

目的研究1例ABO血型系统ABx变异型的分子遗传背景。方法用血型血清学技术鉴定1例AB0血型疑难样本的红细胞表型和唾液血型分泌物质，并用聚合酶链反应分别扩增先证者ABO基因全编码区共7个外显子及侧翼内含子序列，扩增产物经双酶切纯化后直接进行双向测序分析。进一步对存在突变位点的第6～7外显子扩增产物经进行TA克隆和单倍体序列分析。结果先证者红细胞ABO抗原表达为A强B弱，结合其它血清学特征，鉴定其血型为罕见的ABx变异型。ABO基因全编码区测序发现9处核苷酸杂合位点，分别为第6外显子的297A／G杂合，第7外显子的467C／T、526C／G、657C／T、703G／A、796C／A、803G／C、808T／A、930G／A杂合。单倍体序列分析发现，其中一个等位基因为常见的A102，另一个等位基因除808T〉A突变外，其它变异位点与B101等位基因一致。808T〉A突变可导致B糖基转移酶第270位苯丙氨酸转变为异亮氨酸。结论B糖基转移酶基因808T〉A突变可能引起酶活性减弱，并进而导致产生Bx变异型。

α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶p.M142I突变导致Ax亚型的分子机制研究

目的 :以一个血型A_x亚型家系为研究对象,探讨我国人群血型中产生A_x亚型的潜在分子机制。方法:采用血清学方法鉴定该家系成员的ABO血型,测定血浆α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶活性,行DNA直接测序和克隆后测序分析ABO基因序列,并构建3D分子模型,就发现的突变对α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶稳定性改变(ΔΔG)的影响进行预测。结果 :血清学鉴定和DNA测序分析显示,先证者的血型为A_xB亚型,其2个女儿分别为A型和AB型,其ABO基因型分别为AW.38/B.01、A1.02B.01、A1.02/AW.38。先证者和其A型女儿的第7外显子均存在c.426G>C杂合突变,导致α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶的氨基酸发生p.M142I改变。分子模建分析提示,该基因突变改变了蛋白局部氨基酸间氢键的数目,从而导致氨基酸间作用力发生改变,而动力学改变,ΔΔG值升高表明其蛋白稳定性降低。结论:α-1,3-N-乙酰半乳糖胺基转移酶p.M142I突变可能通过降低了酶的稳定性导致A_x表现型,而其深入机制有待体外实验进一步研究。