银杏内酯对胚基底前脑NOS、AChE阳性神经元发育的影响

目的 探讨银杏内酯对胚基底前脑NOS和AChE阳性神经元发育的影响。方法 实验分成银杏组、NGF组、BDNF组和单纯对照组 ,取孕 17dSD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 96孔培养板和 2块 2 4孔培养板中 ,分别加入含银杏内酯、NGF、BDNF及不含上述成份的DMEM培养液 ,于体外培养 18d后 ,96孔培养板行MTT比色分析测定光吸收值 (OD值 ) ,以检测培养的神经元活力。2块 2 4孔培养板分别行NADPH d和AChE组化染色 ,显微镜下计数各组每孔中的NOS和AChE阳性神经元数 ,并用CMM 30 1图像分析系统对两种神经元的细胞面积和细胞周长进行处理 ,数据用方差分析和SNK检验进行统计学处理。结果 银杏组MTT比色分析的OD值和NOS、AChE阳性神经元数、细胞面积、细胞周长等指标均明显地好于单纯对照组 ,达到或仅稍差于NGF组或BDNF组的指标。

大鼠杏仁体基底外侧核GABA和ACh能中间神经元的突触

目的 :揭示杏仁体基底外侧核 (BL)中的γ 氨基丁酸 (GABA)能和乙酰胆碱能 (ACh) 2种中间神经元树突上的突触联系。方法 :用抗GABA和抗胆碱乙酰转移酶 (ChAT)抗体对BL做光镜和电镜免疫组化染色。结果 :光镜下 ,GABA免疫反应阳性神经元多为圆形多极神经元 ;ChAT免疫阳性神经元多为双极神经元。两者数量比约为 ( 7～ 9)∶1。电镜下 ,支配GABA免疫阳性神经元的突触 5 2 .7%为非对称性 (兴奋性 ) ,47.3 %为对称性 (抑制性 ) ,而ChAT免疫阳性神经元则分别为 44.9%和 5 5 .1 %。结论 :在情绪性学习记忆的处理过程中 ,杏仁体GABA能中间神经元起主要的功能作用 ,可能为抑制作用 ;

中华绒螯蟹中肠和后肠内AchE和NOS神经元的观察以及Ach、NO含量和Na^+,K^+-ATP活性的分析

对中华绒螯蟹中肠和后肠肠壁分别进行分层铺片,应用乙酰胆碱酯酶(Ach E)和NADPH-黄递酶组织化学染色方法分别观察中肠和后肠中Ach E和一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元的分布和形态,并对其相应递质乙酰胆碱(Ach)和一氧化氮(NO)的含量和Na+,K+-ATP酶活性进行测定。结果显示:1对所获得铺片进行形态学观察发现,中肠肌层较后肠薄,肌纤维较细,肌纤维间隔明显;肠道黏膜下层细胞分布密集,后肠黏膜下层细胞分布较中肠更为密集。2Ach E和NOS阳性神经元广泛分布于中肠和后肠的黏膜下层,而肌层和基膜未见分布,两种神经元在后肠黏膜下层的分布均较中肠密集。Ach E阳性产物为棕色沉淀,阳性神经元大小为3~10μm,中肠中Ach E形态多样,多为圆形、卵圆形或梭形;后肠胞体阳性神经元呈圆形或者椭圆形,无明显胞突。NOS阳性产物为蓝色沉淀,阳性胞体的大小不等,呈不同形态,少量细胞有胞突伸向邻近细胞,中肠阳性神经元多呈条状或点状分散分布,而后肠阳性神经元常呈块状分布。3中肠Ach和NO含量分别为(1.28±0.41)和(1.84±0.25)μg/mg prot,显著低于后肠Ach(1.62±0.27)μg/mg prot和NO(2.10±0.25)μg/mg prot,而Na+,K+-ATP活性在中肠为(1.12±0.17)μmol Pi/(mg prot·h),显著高于后肠的(0.62±0.18)μmol Pi/(mg prot·h)。研究表明,中华绒螯蟹肠道黏膜下层是Ach E和NOS阳性神经元分布的部位,两种神经元递质含量和Na+,K+-ATP酶活性在中肠和后肠间存在显著差异。

鸡胚海马AChE阳性神经元的分布及发育

用乙酰胆碱酯酶组织化学法观察了14、16、18、20d胚龄的鸡海马中乙酰胆碱酯酶阳性神经元的分布和发育。实验表明，海马前区、隔海马区、海马背内侧区、海马背外侧区、背海马、旁海马区中，从16d胚龄开始出现乙酰胆碱酯酶阳性神经元，这些阳性神经元随胚龄增加发生迁移，形态由圆形到多形，胞体由小变大，密度也发生变化。乙酰胆碱酯酶阳性反应神经元可分为强阳性、中等阳性及弱阳性三种。随胚龄增加，海马大部分区域阳性反应由弱到强，16、18d胚龄反应最强，20d胚龄反应减弱。本文对此变化的意义进行了探讨，认为乙酰胆碱酯酶在鸡胚海马发育的一定阶段具有神经营养因子的作用。

大鼠海马中83KD蛋白诱导神经干细胞向AChE阳性神经元定向分化的作用

目的:探讨海马组织中83KD蛋白诱导神经干细胞向ACHE阳性神经元定向分化的作用。方法:将切割海马伞后14天海马和正常海马组织匀浆进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,根据染色脱色结果取83KD差异蛋白条带进行电洗脱,将收集到的蛋白质加入到鼠胚神经干细胞球培养液中,并设阴性对照组。12天后,用AChE组织化学染色检测神经干细胞分化为AChE阳性神经元的情况。结果:83KD切割组中AChE阳性神经元较多,胞体较大且分化较好,突起较粗且长;83KD正常组中AChE阳性神经元数量较少,胞体较小,突起也较短;空白对照组仅看到少量的AChE阳性神经元,胞体很小,突起短而少。结论:海马中83KD蛋白具有诱导神经干细胞向AChE阳性神经元定向分化的作用。

BDNF ,NT-3对体外培养的胚鼠脊髓AChE和NADPH-d阳性神经元生长发育的影响

利用AChE和NADPH d酶组织化学染色法研究了脑源性神经营养因子 (brain derivedneurotrophicfac tor ,BDNF)和神经营养因子 3(neurotrophin 3,NT 3)对离体培养的胚胎大鼠脊髓胆碱能神经元和一氧化氮能神经元生长发育的影响。结果显示 :BDNF处理组和NT 3处理组AChE阳性神经元数和NADPH d阳性神经元数均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。BDNF组AChE阳性神经元和NADPH d阳性神经元胞体平均直径、每细胞突起数和最长突起长度均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。NT 3组NADPH d阳性神经元的生长发育与对照组无明显差异 ,仅AChE阳性神经元的每细胞突起数和最长突起长度显著高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,对胞体发育无影响。结果提示 :BDNF ,NT 3促进脊髓神经元的存活和生长发育 ,二者的作用具有选择性和特异性。

新型胆碱酯酶抑制剂(NAI)对AD大鼠海马结构和红细胞膜AChE的抑制作用

目的探讨新型胆碱酯酶抑制剂(NAI)对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马结构神经元胞浆和血液红细胞膜的抑制作用,为AD病的临床治疗提供新的基础研究资料。方法选用48只W istar雄性大鼠,随机分为4组(n=12):NAI组、石衫碱甲(Hup)组、AD组、空白(B lank)组。将前3组大鼠切断穹窿-海马伞制作AD动物模型。2周后静脉给予NAI和Hup,采用分光光度计对各组大鼠海马结构神经元胞浆和红细胞膜分别进行AChE酶活性测定。结果AD海马结构神经元胞浆和红细胞膜的AChE活性均较B lank组明显增高(P<0.01);NAI组上述两个部位的AChE活性较AD组显著降低(P<0.01),Hup组与AD组比较其活性也降低(P<0.05)。并且NAI组上述两个部位的AChE活性均较Hup组降低(P<0.05)。结论NAI和Hup对AD大鼠海马结构神经元胞浆和血液红细胞膜AChE均具有较强的抑制作用,NAI抑制作用强于Hup。

NGF诱导大鼠胚脑皮层和隔区神经干细胞向神经元和AChE阳性神经元分化的作用

目的:探讨大鼠胚脑皮层和隔区神经干细胞在NGF的诱导下分化为神经元和AChE阳性神经元的情况。方法:应用无血清培养技术,分别从SD大鼠胚脑皮层和隔区分离克隆神经干细胞,然后在含或不含NGF的培养液中分化14d。用MAP-2免疫荧光和AChE组化技术检测神经干细胞分化为神经元和AChE阳性神经元的情况。并对MAP-2阳性神经元的分化率、AChE阳性神经元数及其它们的细胞面积和周长进行图像处理;用STATA7.0统计软件进行方差分析和两两比较。结果:隔区和皮层NGF组MAP-2阳性神经元分化率高于隔区和皮层对照组;其细胞面积除隔区NGF组与皮层NGF组之外,其它各组间差异均有统计学意义;而其周长各组之间差异均有统计学意义。AChE阳性神经元的数量及细胞面积和周长,隔区NGF组最佳,皮层NGF组次之,隔区对照组再次之,皮层对照组较差。三项指标各组间差异有统计学意义。结论:NGF可诱导大鼠胚脑皮层和隔区神经干细胞向神经元分化;隔区神经干细胞较皮层神经干细胞更易于向AChE阳性神经元分化;这种区域特异性可在NGF诱导下发生改变。

银杏内酯对大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育的影响

目的:探讨银杏内酯对大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育的影响及可能的作用机制。方法:实验分银杏组、神经生长因子(NGF)组、脑原神经营养因子(BDNF)组和单纯对照组。取孕17天SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于96孔培养板和2块24孔培养板中,分别加入含银杏内酯、NGF、BDNF及不含上述成分的DMEM培养液。于体外培养18天后,96孔培养板行MTT比色分析测定光密度值(A值),以检测培养的神经元活力。2块24孔培养板分别行NADPH-d和AchE组织化学染色,显微镜下计数各组每孔中一氧化氢合酶(NOS)、AchE阳性神经元数目,并用CMM-301图像分析系统对两种神经元的细胞面积和细胞周长进行处理,数据用方差分析、SNK检验作统计学处理。结果:银杏组MTT比色分析的A值和NOS、AchE阳性神经元数目、细胞面积、细胞周长等指标均优于单纯对照组,达到或仅稍差于NGF组或BDNF组的指标。结论:银杏内酯在促进大鼠胚基底前脑NOS、AchE阳性神经元发育方面具有类似NGF或BDNF的作用。

非神经性AChRs对脾淋巴细胞增殖的调节作用及药理学特征

目的:观察淋巴细胞非神经性AChRs对脾淋巴细胞增殖的调节作用。方法:利用MTT比色法检测AChRs激动剂氨甲酰胆碱对刀豆蛋白A诱导的离体小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。结果:氨甲酰胆碱在不同的浓度呈现不同的作用,在10-11～10-9mol·L-1和10-5～10-4mol·L-1时显著促进淋巴细胞的增殖,阿托品(10-7mol·L-1)可以阻断该效应。而氨甲酰胆碱(10-7～10-6mol·L-1)可显著抑制淋巴细胞的增殖,美加明(10-7mol·L-1)可以阻断其作用。提示氨甲酰胆碱在10-11～10-9mol·L-1和10-5～10-4mol·L-1可通过激活mAChRs促进淋巴细胞的增殖,而在10-7～10-6mol·L-1通过激活nAChRs抑制淋巴细胞的增殖。结论:氨甲酰胆碱通过激活非神经性mAChRs和nAChRs对淋巴细胞增殖反应产生促进增殖和抑制增殖的双向调节作用。

弓形虫淋巴结炎组织中ACh、ChAT及CGRP的表达

目的 探讨弓形虫淋巴结炎组织中乙酰胆碱（ACh）、胆碱乙酰转移酶（ChAT）与降钙素基因相关肽（CGRP）表达的意义。方法 分别应用间接原位PCR法及免疫组化PicTureTM二步法检测淋巴结炎组织中的弓形虫及ACh、ChAT和CGRP。将弓形虫检测结果分为阳性及阴性组，两组的ACh、ChAT、CGRP的检测结果用统计学方法进行对照分析。结果 71例淋巴结炎组织中41例弓形虫阳性。ACh、ChAT在弓形虫阳性组中表达强度增强，与阴性组表达强度经统计学处理差异非常显著（P〈0．005）。CGRP在两组中表达强度相似，经统计学处理无明显差异（P〉0．05）。三种阳性标志物在两组淋巴结炎中的分布大致相似，主要分布在淋巴细胞，淋巴滤泡生发中心巨噬细胞，浆细胞及单核细胞，多呈颗粒状位于胞质，也可见于胞膜或／及核。结论 弓形虫淋巴结炎ACh、ChAT、CGRP的变化是弓形虫感染的结果，还是由于先有免疫抑制，后有弓形虫感染尚难定论，但提示弓形虫可能影响非神经性乙酰胆碱系统与神经内分泌免疫网络，二者可互为因果，对弓形虫病的病程演变有一定影响。

夏天无注射液对小鼠脑缺血和神经元保护作用的实验研究

目的观察夏天无注射液对小鼠脑缺血和神经元损伤的保护作用,并探讨其作用机制。方法采用小鼠断头张口喘气模型初步筛选ICDP对动物脑缺血的影响,分光光度法测定脑组织乙酰胆碱酯酶(AchE)和蛋白含量;原代培养乳鼠神经元制备低糖缺氧模型,MTT染色测定神经元细胞活力,流式细胞仪观察神经元凋亡。结果静脉注射ICDP2mg/kg、5mg/kg组后可明显延长小鼠张口喘气时间,且ICDP5mg/kg组断头张口喘气模型小鼠脑组织内AchE活性明显降低。低糖缺氧6h后,ICDP(含生物碱5ng/ml～500ng/ml)明显增加神经元的存活率,并可抑制神经元凋亡。结论ICDP对脑缺血损伤有保护作用,可降低脑组织内AchE活性,保护神经元、抗神经元凋亡可能是其抗脑缺血损伤的机制之一。

BDNF、NGF对体外培养的胚胆碱能神经元生长发育的影响

本文用AChE组化方法，研究了BDNF、NGF对培养的胚鼠基底前脑胆碱能神经元的作用及BDNF和NGF的协同作用。结果表明BDNF和NGF都具有增加AChE阳性神经元数量的作用，二者的不同在于BDNF作用出现的时间较早、强度较小；而NGF作用出现的时间较迟但强度较大。并发现BDNF对体外培养的胚胆碱能神经元胞体早期的生长发育作用比较明显，而NGF的作用则不甚显著。BDNF对胚胆碱能神经元发出突起和突起的延伸作用较NGF强。BDNF和NGF的联合作用较单独使用BDNF或NGF为好。本文的结果提示在体外培养中两种营养因子联合应用较只用一种因子有益。

乙酰胆碱对培养大鼠皮层神经元兴奋性及抑制性突触电流的相反作用

在分散培养的新生大鼠皮层神经元标本上，用全细胞电压箝技术分析了自发兴奋性及抑制性突触后电流（ＥＰＳＣ／ＩＰＳＣ）的性质并观察了乙酰胆碱（ＡＣｈ）对它们的影响。ＥＰＳＣ与ＩＰＳＣ可分别被。ｎｏｎ－ＮＭＤＡ谷氨酸受体拮抗剂ＤＮＱＸ及ＧＡＢＡ＿Ａ受体拮抗剂ｂｉｃｕｃｕｌｌｉｎｅ所取消，说明它们分别由这两种受体所介导。ＡＣｈ在低浓度１μｍｏｌ／Ｌ时减低ＩＰＳＣ发生频率，但不改变其幅度分布；高浓度ＡＣｈ（１０一１００μｍｏｌ／Ｌ）增加ＥＰＳＣ的频率，也不改变其幅度分布。ＡＣｈ的效应可为Ｍ受体拮抗剂阿托品所取消，但它对外源性谷氨酸及γ氨基丁酸引起的全细胞电流无显著影响。以上结果表明，皮层神经元可通过维持不同ＡＣｈ水平来实现对其兴奋性及突触传递效率的精细调节。这一作用可能是通过作用于Ｍ受体，影响突触前递质释放来实现的。

大鼠苍白球乙酰胆碱酯酶阳性神经元的衰老变化——形态计量学研究

本研究结合组织化学和形态计量学方法,观察幼龄(3月龄)和老龄(24月龄)雄性大鼠苍白球内乙酰胆碱酯酶阳性(AChE-P)神经元的衰老变化。老龄苍白球AChE-P神经元的数量,比幼龄组减少约11.8％;幼龄阳性神经元的突起总长度是老龄组的1.4倍;但在老龄组中,约有8.6％阳性神经元的突起总长度,大于幼龄的平均突起总长度(232.1μm);老龄苍白球AChE-P神经元的灰度值,明显高于幼龄组,但约有6.8％老龄阳性神经元的灰度值低于幼龄的平均灰度值(117.8);老龄苍白球AChE-P神经元的截面积,比幼龄增大约9.2％。形态学观察发现,大部分老龄AChE-P神经元呈退行性改变,但有一部分老龄AChE-P神经元胞体增大,染色加深,突起茂密,分支增多。上述结果表明,苍白球内AChE活性的增龄性下降及其神经元的退行性改变,并不是在所有的AChE-P神经元中同步发生。从而提示,在衰老过程中,苍白球AChE-P神经元可能存在着一种与衰老机制密切相关的代偿机制。

乙酰胆碱酯酶阳性神经元在鼠脑的分布和形态特征

本文用乙酰胆碱酯酶(AChE)再生技术,研究AChE阳性神经元在鼠脑的分布和形态特征。按其染色程度,可见强度、中度和轻度三种染色细胞。强染色细胞多数是较大的多极细胞,主要分布于纹状体、基底前脑、下丘脑、黑质、红核、蓝斑,腹侧被盖区、臂旁核、桥被盖核和脑神经运动核。本文将AChE染色结果和胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫组织化学资料进行了比较,对AChE和胆碱能神经元的关系,以及AChE阳性神经元的性质和意义,进行了讨论。

胆碱能神经元在闪光刺激增强大鼠初级视皮层可塑性中的作用

目的研究胆碱能神经元及递质在大鼠初级视皮层可塑性中的作用。方法36只(36眼)成年SD大鼠随机分为3组:对照组、激动剂组、阻断剂组,每组各12只(12眼)。各组大鼠麻醉、固定后在初级视皮层(V1区)植入记录电极和玻璃微电极、在额叶植入参考电极,术后第7、8、9天于固定时间行紫光闪光刺激1 h,第10天行微量注射M受体激动剂卡巴胆碱和M受体阻断剂东莨菪碱,注射后在相同闪光刺激条件下给予一串高频刺激,记录各组高频刺激前后V1区的视觉诱发电位,分析各组视觉诱发电位的幅值和峰时值的变化。检测不同组别大鼠在强直性闪光刺激后初级视皮层中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、胆碱酯酶(AchE)活性,Western blot检测不同组别大鼠初级视皮层ChAT含量。结果对照组和激动剂组在接受强直性闪光刺激后视觉诱发电位幅值较之前有显著性升高(均为P<0.01),且峰时值变短(均为P<0.01),阻断剂组幅值和峰时值在刺激前后差异无统计学意义(均为P>0.05)。在强直性闪光刺激后,与对照组相比,激动剂组幅值升高(P<0.01)、峰时值变短(P<0.01),阻断剂组幅值降低(P<0.01)、峰时值变长(P<0.01)。对不同组别大鼠进行强直性闪光刺激后发现,与对照组相比,激动剂组的ChAT活性明显升高(P<0.05)、AchE活性降低(P<0.05);而阻断剂组的ChAT活性明显降低(P<0.05),AchE活性升高(P<0.05);阻断剂组与激动剂组ChAT、AchE活性差异显著(均为P<0.05)。ChAT蛋白的表达经Western blot分析发现,与对照组比较,激动剂组有显著性升高(P<0.05),阻断剂组有显著性降低(P<0.05),阻断剂与激动剂组差异显著(P<0.05)。结论强直性闪光刺激能使大鼠闪光视觉诱发电位呈现LTP样反应,胆碱能神经元及递质系统参与了闪光刺激致大鼠初级视皮层的可塑性变化。

二硫化碳对神经细胞混悬液及突触膜ATP酶和胆碱酯酶活性影响

本研究目的在于寻求神经性毒物体外的测试方法，并对ＣＳ２的毒作用机制进行探讨。选用神经细胞混悬液及超速密度梯度离心分离的突触膜为模型，观察ＣＳ２不同染毒浓度对Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶及胆碱酯酶活性的影响。结果表明，ＣＳ２对Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶有明显的抑制作用，而对胆碱酯酶活性无影响。推测Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶在ＣＳ２的毒作用机制中起一定作用，突触膜可作为研究预测神经性毒物的毒性潜力。

毛果芸香碱对大鼠蓝斑核痛反应神经元电活动的影响

目的本实验观察大鼠侧脑室内加入外源性乙酰胆碱(ACh)后,蓝斑核(Locusceruleus,LC)痛反应神经元的电变化,以及M受体激动剂毛果芸香碱(Pilocarpine)的激动效应,进一步研究ACh和LC在痛觉调制中的作用及其相互关系。方法以电脉冲刺激右侧坐骨神经作为伤害性痛刺激,用玻璃微电极细胞外记录痛反应神经元放电的变化。结果1)侧脑室注入ACh能够使正常大鼠LC中痛兴奋神经元(PEN)痛诱发放电频率增加、潜伏期缩短,痛抑制神经元(PIN)痛诱发放电频率减少,诱发放电完全抑制时程延长,而后逐渐恢复;2)侧脑室注入毛果芸香碱能够产生与ACh相似的效应。结论外源性ACh可使正常大鼠LC中痛反应神经元对伤害性刺激的反应增强,表现为致痛效应;M受体激动剂毛果芸香碱可使正常大鼠LC中痛反应神经元对伤害性刺激的反应增强,与ACh产生相似的效应;揭示了ACh的这种致痛作用主要是通过M受体介导的。

胆囊壁的神经分布及其临床意义

用乙酰胆碱脂酶(AChE)组化法和镀银法,在光、电镜下观察了10条犬和5例人标本胆囊壁的神经分布.胆碱能神经的分布在胆囊肝面和游离面的颈、体、底六区无明显区别.胆囊壁内有丰富的神经终末分布,可分为环型、膨大型和游离型三型.电镜下 AChE 反应产物见于核膜、细胞膜、轴突膜、树突膜、游离核糖体和粗面内质网上.并结合临床有关问题进行了分析讨论.