自由基对细胞膜和Ach受体效应的损伤及枸杞多糖的防护作用

本研究将爪蟾卵母细胞暴露于黄嘌呤氧化酶－次黄嘌呤（ＸＯ－ＨＰＸ）反应系统，观察自由基对细胞膜及其乙酰胆碱（Ａｃｈ）受体的损伤，结果表明，在自由基的作用下膜被动电学参数发生显著变化，其效果与ＸＯ－ＨＰＸ的浓度和作用时间成正比，ＸＯ－ＨＰＸ作用２ｈ不影响膜功能，大于４ｈ各项膜功能指标明显下降，Ａｃｈ极化反应减弱，上升时间延长，去极化幅度下降，下降１／２时间缩短；超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）可消除自由基对上述膜参数的影响。枸杞多糖可以使损伤膜的被动电学参数改善，但对Ａｃｈ去极化反应无恢复作用。结果提示，ＸＯ－ＨＰＸ反应系统是通过产生超氧阴离子自由基造成细胞膜和Ａｃｈ受体的损伤，枸杞多糖可对抗自由基对质膜的作用，但对Ｍ样受体无效。

糖皮质激素对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞ACh诱发电流的快速抑制作用

本研究采用全细胞膜片箝技术，以大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞（PC12）为标本，观察了糖皮质激素（GC）对乙酰胆碱诱发电流（IACh）的快速作用，并初步探讨了其可能机制。结果如下：药理学鉴定表明，PC12细胞上IACh是通过烟碱受体（nAChR）引起的。箝制电压（Vh）为-80mV时，ACh（30μmol/L）诱发一内向电流；与ACh同时给予皮质酮（B，10－5mol/L）时，B对IACh的抑制作用较弱；用B（10－5mol/L）对细胞进行预处理，可提高B对IACh峰值的抑制率，这一作用可逆并呈浓度依赖性；在相同浓度下，不同的GC对IACh的抑制效力B＞地塞米松（Dex）＞氢化可的松（F）。牛血清白蛋白耦联的皮质酮（B-BSA）亦可快速抑制IACh.以上提示：GC对PC12细胞上IACh有快速抑制作用，其机制可能是由非基因组机制介导的；不同GC对IACh的抑制作用不同。

非神经性AChRs对脾淋巴细胞增殖的调节作用及药理学特征

目的:观察淋巴细胞非神经性AChRs对脾淋巴细胞增殖的调节作用。方法:利用MTT比色法检测AChRs激动剂氨甲酰胆碱对刀豆蛋白A诱导的离体小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。结果:氨甲酰胆碱在不同的浓度呈现不同的作用,在10-11～10-9mol·L-1和10-5～10-4mol·L-1时显著促进淋巴细胞的增殖,阿托品(10-7mol·L-1)可以阻断该效应。而氨甲酰胆碱(10-7～10-6mol·L-1)可显著抑制淋巴细胞的增殖,美加明(10-7mol·L-1)可以阻断其作用。提示氨甲酰胆碱在10-11～10-9mol·L-1和10-5～10-4mol·L-1可通过激活mAChRs促进淋巴细胞的增殖,而在10-7～10-6mol·L-1通过激活nAChRs抑制淋巴细胞的增殖。结论:氨甲酰胆碱通过激活非神经性mAChRs和nAChRs对淋巴细胞增殖反应产生促进增殖和抑制增殖的双向调节作用。

远志皂苷对β-淀粉样肽和鹅膏蕈氨酸引起胆碱能系统功能降低的影响

目的 观察远志皂苷对拟痴呆模型大鼠胆碱能系统功能的作用。方法 在大鼠脑内右侧基底核内联合注射 β 淀粉样肽 1～ 40片段 (β AP1～ 40 )和鹅膏蕈氨酸建立大鼠拟痴呆模型 ,用避暗法测定模型动物的学习记忆能力 ,用放射配体结合分析法测定胆碱乙酰转移酶活性和M受体密度 ,用改良Ellman法测定脑组织乙酰胆碱酯酶活性。结果 给模型大鼠连续ig远志皂苷 6 0d后 ,远志皂苷能明显提高拟痴呆大鼠的学习记忆能力 ,显著升高脑内M受体密度和增强胆碱乙酰转移酶活性 ,能有效地抑制脑胆碱酯酶活性。结论 远志皂苷对老年性痴呆的胆碱能系统功能减退有一定的改善和治疗作用。

不同方法使用东莨菪碱脱毒效果的比较

目的 :观察东莨菪碱 (scopolamine,Spm )和氯丙嗪 (chlopromazine,Clo)对吗啡戒断反应的影响。 方法 :采用吗啡依赖大鼠模型 ,不同剂量单次、多次皮下注射 (sc)东莨菪碱及合并使用氯丙嗪处理动物后 ,腹腔注射 (ip)纳洛酮 5 mg/ kg诱发戒断反应 ,观察戒断症状。 结果 :单次 sc东莨菪碱 1.0 mg/ kg及多次 sc东莨菪碱 0 .5 mg/ kg可明显抑制吗啡依赖大鼠的躯体戒断反应 ,合并注射氯丙嗪 2 0 .0 mg/ kg时的效果更好。结论 :东莨菪碱通过 Ach受体可以抑制吗啡戒断反应 ,氯丙嗪则可能通过作用于蓝斑等中枢部位α2 受体与东莨菪碱起到协同作用。

黄芩苷等中药单体对人皮脂腺细胞内雄性激素受体mRNA表达的影响

目的研究盐酸小檗碱、黄芩苷、苦参碱中药单体对SZ95人皮脂腺细胞内雄性激素受体(AR)mRNA表达的影响,探讨中药治疗痤疮的机制。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应技术检测不同浓度的盐酸小檗碱、黄芩苷、苦参碱及13-顺维A酸作用SZ95皮脂腺细胞24h后,细胞内ARmRNA的表达。结果1×10-5、1×10-6mol/L13-顺维A酸和1×10-4mol/L黄芩苷使SZ95人皮脂腺细胞中ARmRNA的表达下降(P<0.05)。结论13-顺维A酸和黄芩苷等药物可能通过抑制AR的表达而具有拮抗雄性激素对皮脂腺细胞活性的作用,这将有助于了解这些药物治疗痤疮的机制。

M_2和M_3型胆碱能受体在脾气虚大鼠小肠运动中的作用

目的:研究M2、M3型胆碱能受体表达与脾气虚小肠运动的关系。方法:20只SD大鼠按随机数字表法分为对照组和脾气虚模型组(模型组)各10只,模型组大鼠复制饮食不节加劳疲型脾气虚模型;小肠运动采用小肠推进率评价;ELISA法检测小肠组织Ach和c AMP含量,免疫组化法观察M2、M3型受体表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠的小肠推进率显著下降,Ach含量无变化,M2受体表达明显上升,M3受体表达和c AMP水平显著下降。结论:脾气虚小肠运动减弱与M2、M3型受体表达异常有关。

皮质酮快速抑制PC12细胞乙酰胆碱诱发电流影响及机制探讨

目的和方法：本研究采用全细胞膜片箝技术，观察皮质酮（Ｂ）对ＰＣ１２细胞上乙酰胆碱诱发电流（ＩＡＣｈ）的快速作用并初步探讨其可能机制。结果：ＰＣ１２细胞上ＩＡＣｈ是通过烟碱受体（ｎＡＣｈＲ）引起的。箝制电压为－８０ｍＶ时，ＡＣｈ（３０μｍｏｌ／Ｌ）诱发一内向电流；细胞外灌流同时给予ＡＣｈ和Ｂ（１０－５ｍｏｌ／Ｌ）时，Ｂ对ＩＡＣｈ的抑制作用较弱；用Ｂ（１０－５ｍｏｌ／Ｌ）对细胞进行预处理，可提高Ｂ对ＩＡＣｈ峰值的抑制率，作用呈可逆性、浓度依赖性和非电压依赖性；细胞外用ＲＮＡ合成抑制剂放线菌素Ｄ（４×１０－５～４×１０－３ｍｏｌ／Ｌ）或蛋白合成抑制剂放线菌酮（１０－４～１０－３ｍｏｌ／Ｌ）孵育细胞１～２ｈ阻断基因机制，但均不影响Ｂ对ＩＡＣｈ的快速抑制作用。结论：Ｂ对ＰＣ１２细胞上ＩＡＣｈ有快速抑制作用，此作用可能是由非基因组机制介导的。

治疗阿尔茨海默病药物的研究进展

阿尔茨海默病(AD)为中枢神经退化性疾病,是危害人类健康的一大综合征,治疗AD药物是近年来研究的一大热点。综述了近5年来治疗AD药物的研究进展,根据作用机制的不同对临床应用的抗AD和有促智活性的药物进行分类详述,主要分为乙酰胆碱酯酶抑制剂等改善胆碱功能的药物、M1受体激动剂、抗氧化药物、消炎镇痛药物、抑制Aβ蛋白形成的药物、神经生长因子、钙调节剂、晚期糖基化终产物(AGE)抑制剂以及中药复方等几类。

党参益智作用研究

用小鼠跳台法和大鼠操作式条件反应——固定比率操作观察了党参20％乙醇提取物对学习记忆的影响,结果表明党参可拮抗东莨菪碱造成的小鼠记忆获得不良,改善亚硝酸钠造成的小鼠记忆巩固障碍及40％乙醇造成的小鼠记忆再现缺损,部分对抗东莨菪碱对大鼠固定比率操作的抑制。党参进一步分离的正丁醇部分可以重现上述作用。党参正丁醇部分对M胆碱能受体无亲和力,但可使中枢M胆碱受体密度显著增高。但它既不能对抗东莨菪碱所致小鼠大脑皮层及海马Ach含量的降低,其本身也不能提高皮层和海马的Ach含量。以上结果提示党参对学习记忆确有改善作用,胆碱能通路可能是其发生作用的一个重要方面。

敌敌畏对大鼠脑组织N-甲基-D-天门冬氨酸受体活性的影响

目的 研究敌敌畏 (DDVP)染毒后大鼠脑组织中N 甲基 D 天门冬氨酸 (NMDA)受体的变化规律 ,探讨其在有机磷农药中毒中的作用。方法 5 5只雄性SD大鼠分为 11组 ,每组 5只 ,一组为生理盐水 (NS)组 ,高剂量组( 2 5mg/kg)和低剂量组 ( 15mg/kg)各 5组 ,染毒组分别以敌敌畏腹腔注射 ,染毒后 4h、 8h、 16h、 2 4h、 48h处死 ,测定大鼠全血和脑组织的乙酰胆碱酯酶 (AChE)活性以及脑组织中NMDA受体的活性。结果 DDVP染毒后大鼠全血和脑组织的AChE活性显著下降 ,且脑组织AChE活性下降更多 ,抑制率大于 80 % ,恢复更迟缓。脑组织中NMDA受体的最大结合容量 (Bmax)在 4h便明显下降 ,于 2 4h达到最低 ,然后逐渐升高 ,受体的平衡解离常数 (Kd)在 4h时明显上升 ,于 2 4h达到最高 ,然后逐渐下降。结论 DDVP染毒对大鼠脑组织AChE活性抑制严重 ,说明中枢神经系统对DDVP的毒作用敏感。同时DDVP染毒对大鼠脑组织中NMDA受体产生下降调节 ,表现为受体数量减少、亲和力降低。推测这是机体的一种自身调节机制 。

解毒益智胶囊的益智效应及对中枢胆碱能神经功能的影响

目的观察解毒益智胶囊的益智效应及对中枢胆碱能神经功能的影响,为治疗轻度认知障碍提供实验依据。方法建立东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍模型。按体重随机分为正常对照组、模型对照组、安理申对照组及解毒益智胶囊高、中、低、极低剂量组。采用避暗法、跳台法和Morris水迷宫法观察解毒益智胶囊的益智效应;采用乙酰胆碱酯酶(AchE)试剂盒检测全脑AchE活性;采用实时荧光定量PCR技术,以18S rRNA为内参基因,用SYBR GreenⅠ染料法检测海马M1受体和胆碱乙酰转移酶(ChAT)基因相对表达,双标准曲线法进行计算和数据分析。结果解毒益智胶囊能显著延长东莨菪碱致模型小鼠学习记忆障碍模型避暗实验和跳台实验逃避潜伏期,减少错误次数,显著缩短Morris水迷宫实验平均逃避潜伏期,改善空间搜索策略;能显著提高学习记忆障碍小鼠模型全脑AchE的活性;显著增强海马M1受体和ChAT基因表达,解毒益智胶囊高、中、低、极低剂量组M1受体基因分别较模型组表达增高了14.9、7.3、8.2、1.8倍,而ChAT基因则分别较模型对照组提高了6.6、26.5、1.2、6.1倍。结论解毒益智胶囊具有良好的益智作用。

雄激素受体基因CAG多态性与囊肿型痤疮的相关性研究

目的探讨雄激素受体基因CAG多态性与湖南汉族囊肿型痤疮的相关性。方法对寻常型和囊肿型痤疮患者及正常人的雄激素受体基因阳性PCR产物进行测序,测序结果应用Web Angis分析。结果寻常型痤疮患者的雄激素受体基因CAG微卫星片段长度的平均值为22.89±1.94,囊肿型痤疮患者为19.12±1.81,正常人为23.15±2.2;囊肿型组与寻常型组比较有显著性差异(t=8.41,P<0.05),与正常人组比较有显著性差异(t=8.23,P<0.05);而寻常型组与正常人组比较无显著性差异(t=0.528,P>0.05)。以(CAG)n重复片段<22为标准进行统计分析,囊肿型组与寻常型组比较有显著性差异(χ2=45.17,P<0.05),与正常人组比较有显著性差异(χ2=48.52,P<0.05);而寻常型组与正常人组比较无显著性差异(χ2=0.06,P>0.05)。结论雄激素受体基因CAG多态性与湖南汉族囊肿型痤疮之间有相关性。当(CAG)n重复片段<22时,患囊肿型痤疮的风险增大。

黄白痤疮膏对金黄地鼠白细胞雄激素受体及皮脂腺斑组织结构的影响

目的:探讨黄白痤疮膏外用治疗寻常痤疮的作用机理。方法:选用成年雄性金黄地鼠侧腹皮脂腺斑作为动物模型,随机分3组分别采用黄白痤疮膏、5%安体舒通乳剂、蒸馏水外擦皮脂腺斑20天,观察皮脂腺斑组织结构及皮脂腺斑的大小变化;应用放射配体结合分析法测定实验地鼠白细胞雄激素受体(AR)含量,放射免疫法检测地鼠血清中睾酮的水平。结果:黄白痤疮膏与安体舒通均能明显缩小金黄地鼠皮脂腺斑,与对照组比较有显著性差异(P(0.01);黄白痤疮膏能明显的改变皮脂腺斑的显微结构,与对照组比较有显著性差异(P(0.05);黄白痤疮膏与安体舒通均具有降低金黄地鼠外周血白细胞AR,与对照组比较有显著性差异(P(0.05)。结论:黄白痤疮膏能抑制皮脂腺细胞的增生和分泌功能,改变皮脂腺斑显微结构,使皮脂腺斑缩小,降低金黄地鼠外周血白细胞AR,对痤疮有良好的防治作用。

在非洲爪蟾卵母细胞上表达大鼠肌肉乙酰胆碱受体的方法学研究

目的 :建立适合于研究肌肉松驰药作用的乙酰胆碱受体的实验模型。方法 :采用磁珠技术从大鼠肌肉中提取多聚腺嘌呤mRNA ,注入去膜的非洲爪蟾卵母细胞 ,表达为有功能的离子通道 ,并与未去膜和去膜未注射的卵母细胞比较 ,利用电压钳方法记录电压依赖性的离子通道电流 ,观察并分析三组电流特性。结果 :三组卵母细胞的静息膜电位和钳制到 - 6 0mV时的补偿电流之间无显著的统计学意义 ,通过去除卵母细胞的卵泡膜可以去除内源性受体的干扰 ,在注射大鼠肌肉mRNA的卵母细胞膜上记录到典型的N2 型ACh受体的电流。结论 :本实验建立的模型可作为在细胞和蛋白水平研究肌松药的方法。

睾丸肾上腺素能受体和胆碱能受体的分布及神经递质对睾丸间质细胞增殖的影响

试验旨在研究不同发育时期小鼠睾丸肾上腺素能受体(β1AR、β2AR、β3AR、α1A、α1B和α1D)和胆碱能受体(M1、M2、M3、M4和M5)mRNA的表达,以及神经递质去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)和乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)对发育期小鼠睾丸间质细胞增殖的影响。RT-PCR结果表明,β1AR和β2AR mRNA在睾丸发育的3个时期都表达,β3AR、α1A和α1BmRNA在小鼠发育早期的睾丸表达,在成年期睾丸不表达,α1DmRNA在睾丸发育的早期不表达,成年期表达;胆碱能受体M1R、M2R、M3R和M5RmRNA在睾丸发育的3个时期都表达,而M4RmRNA主要在成年期表达。另外通过NE和Ach处理体外培养的发育期睾丸间质细胞,发现Ach处理组BrdU阳性细胞的数量明显增加(P<0.01)。结果表明,肾上腺素能受体和胆碱能受体在小鼠睾丸的整个发育时期都表达,Ach可促进发育期小鼠睾丸间质细胞的增殖。

胆碱能神经元在闪光刺激增强大鼠初级视皮层可塑性中的作用

目的研究胆碱能神经元及递质在大鼠初级视皮层可塑性中的作用。方法36只(36眼)成年SD大鼠随机分为3组:对照组、激动剂组、阻断剂组,每组各12只(12眼)。各组大鼠麻醉、固定后在初级视皮层(V1区)植入记录电极和玻璃微电极、在额叶植入参考电极,术后第7、8、9天于固定时间行紫光闪光刺激1 h,第10天行微量注射M受体激动剂卡巴胆碱和M受体阻断剂东莨菪碱,注射后在相同闪光刺激条件下给予一串高频刺激,记录各组高频刺激前后V1区的视觉诱发电位,分析各组视觉诱发电位的幅值和峰时值的变化。检测不同组别大鼠在强直性闪光刺激后初级视皮层中胆碱乙酰转移酶(ChAT)、胆碱酯酶(AchE)活性,Western blot检测不同组别大鼠初级视皮层ChAT含量。结果对照组和激动剂组在接受强直性闪光刺激后视觉诱发电位幅值较之前有显著性升高(均为P<0.01),且峰时值变短(均为P<0.01),阻断剂组幅值和峰时值在刺激前后差异无统计学意义(均为P>0.05)。在强直性闪光刺激后,与对照组相比,激动剂组幅值升高(P<0.01)、峰时值变短(P<0.01),阻断剂组幅值降低(P<0.01)、峰时值变长(P<0.01)。对不同组别大鼠进行强直性闪光刺激后发现,与对照组相比,激动剂组的ChAT活性明显升高(P<0.05)、AchE活性降低(P<0.05);而阻断剂组的ChAT活性明显降低(P<0.05),AchE活性升高(P<0.05);阻断剂组与激动剂组ChAT、AchE活性差异显著(均为P<0.05)。ChAT蛋白的表达经Western blot分析发现,与对照组比较,激动剂组有显著性升高(P<0.05),阻断剂组有显著性降低(P<0.05),阻断剂与激动剂组差异显著(P<0.05)。结论强直性闪光刺激能使大鼠闪光视觉诱发电位呈现LTP样反应,胆碱能神经元及递质系统参与了闪光刺激致大鼠初级视皮层的可塑性变化。

乙酰胆碱受体的免疫化学特性

乙酰胆碱(Acetylcholine,Ach)受体主要存在于神经肌肉接头的突触后膜上,是植物性神经末梢释放的递质作用的受体.本文对乙酰胆碱受体的免疫化学特性做以阐述.

豚鼠胃平滑肌上不同亲和力的毒蕈碱受体

采用离体功能实验,测定豚鼠胃底、体、窦部纵、环平滑肌由乙酰胆碱和阿托品引起的PD_2及PA_2。胃底、体部纵、环肌间的PD_2和PA_2差异非常显著,而窦部数值相近。结果提示:胃底、体部纵、环肌上可能存在高、低两种不同亲和性的毒草碱受体,胃窦部则以低亲和性毒蕈碱受体为主。

麻醉药作用机制及其保护作用与离子通道相关性研究进展

麻醉药广泛应用于临床各类手术中,但其麻醉作用机制至今仍不清楚。随着更多新技术的应用,发现麻醉药的作用机制主要与增强GABAA-R通道,抑制N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate acid,NMDA)和神经元烟碱乙酰胆碱受体通道的功能以及抑制电压门控离子通道开放等有关。同时麻醉药的脏器保护作用也与离子通道有关,主要通过激活K+通道,抑制Ca2+内流等途径实现。本文将从这两方面综述麻醉药与离子通道的关系。