ELISA间接法测定AchRab对重症肌无力的诊断价值

一、临床资料 根据典型病史,腾喜龙试验及部分患者肌电图检查确诊的重症肌无力(MG)患者80例,其中眼肌型34型,全身型46例。男33例,女47例。发病年龄:1～66岁,≤20岁者25例,】20者55例。病程:14天～28年,≤1年者41例,】1年者39例。80例MG患者中作了胸腺CT或MRI检查者49例,其中胸腺正常25例,胸腺增生8例,胸腺瘤16例。病情程度参照Oosterhuis分级:全身型:重度5例,中度18例,轻度23例,眼肌型:重度3例,中度7例,轻度24例。

重症肌无力患者Foxp3^+CD4^+CD25^+调节性T细胞与AChRAb、Titin-Ab的相关研究

目的探讨重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者Foxp3^+CD4^+CD25^+调节性T细胞(Foxp3^+CD4^+CD25^+Treg)与乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)及连接素抗体(Titin-Ab)之间的关系,进一步揭示MG的发病机制。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测22例MG患者以及20名健康对照者血清AChRAb和Titin-Ab水平;采用流式细胞术(FCM)检测两组外周血中CD4^+CD25^+Treg的比例及其表达Foxp3的比例。结果 MG患者外周血CD4^+CD25^+Treg比例[(2.9±0.52)%]与健康对照组[(3.12±0.51)%]比较无统计学差异(P>0.05);CD4^+CD25^+Treg细胞Foxp3表达比例为(37.24±9.57)%,低于健康对照组[(58.60±4.91)%](P<0.01)。MG组CD4^+CD25^+Treg表达Foxp3比例与AChRAb、Titin-Ab水平[分别为(0.232±0.060)和(0.170±0.035)pg/mL]均呈负相关(r=-0.449,P<0.05;r=-0.691,P<0.01)。结论 Foxp3^+CD4^+CD25^+Treg细胞数目减少导致机体免疫功能缺陷是MG发病的重要环节。

神经生长因子对AchRab诱导脑内神经元凋亡的保护作

为探讨神经生长因子(NGF)对乙酰胆碱受体抗体(AchRab)脑室内注射致重症肌无力(MG)中枢神经系统(CNS)损害神经细胞凋亡的影响,分别从 MG 患者和健康人血中提取的 IgG,注入大鼠脑室系统(MG 组和 C_1组),用原位末端标记(TUNEL)法观察脑细胞凋亡情况及动态变化;另一组在注入 AchRab 后予 NGF(NGF 组);一组不予任何处理作为空白对照(C_2组)。结果表明,NGF 组凋亡细胞数少于 MG 组。结论:NGF能减轻神经元凋亡的程度,补充 NGF 可能有助于 MG CNS 损害的防治。

扶正强筋片治疗重症肌无力疗效观察和AChRab的测定

作者比较了单纯应用强的松(对照组)和强的松加中药扶正强筋片(实验组)对重症肌无力(MG)的治疗效果。结果表明:症状完全缓解者对照组为 28.89％,实验组为 53.33％。复发率对照组为37.78％,实验组为 4.44％。两组症状完全缓解率和复发率比较差异均有显著性意义(P<0.05和 P<0.01)。两组治疗前后乙酰胆碱受体抗体(AChRab)均值比较和治疗前后差值平均数的比较,差异均有极显著性意义(P<0.01)。表明中药扶正强筋片是治疗MG的一种安全、有效的辅助药物。

重症肌无力患者胸腺切除前后血清AchRab和SIL-2R变化的研究

目的:探讨胸腺切除对重症肌无力患者血清AchRab和SIL-2R水平的影响。方法:采取39例重症肌无力(myasthenia gravis HG)患者在胸腺切除前后和40例健康献血员血清,用ELLSA法检测AchRab和SIL-2R的水平。结果:64.2％的MG患者血清AchRab显著增高,79.6％患者血清AIL-2R显著高于正常者,二项指标在胸腺切除后有显著下降的比例分析为48％、32％。结论:胸腺切除对外周血中的AchRab、SIL-2R有明显下调作用。

胸腺摘除对重症肌无力患者血清AchRab、PsmRab及sIL-2R的影响

采用ＥＬＩＳＡ法检测重症肌无力（ＭＧ）患者胸腺摘除术前后血清乙酰胆碱受体抗体（ＡｃｈＲａｂ）、突触前膜受体抗体（ＰｓｍＲａｂ）及ｓＩＬ２Ｒ的水平。结果表明：术前三项指标显著增高的比例分别为６４２％、２７５％和７９５％；胸腺摘除后，前述三项指标转阴率分别为４８％、４５％、３２％。说明胸腺摘除对部分ＭＧ患者外周血中上三项指标均有明显下调作用。

AChR_(α211)的分泌表达及其对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用

目的 在毕赤酵母(P .pastoris)中分泌表达AChRα2 1 1 ,研究其对重症肌无力患者血清中AChRAb的清除作用。方法 以质粒pUC AChRα2 1 1 为模板,PCR扩增人AChRα2 1 1 DNA片段,插入真核表达载体pPIC9K中。重组质粒转入P .pastorisGS115后,经甲醇诱导分泌表达AChRα2 1 1 ,用SepharoseQ离子交换柱和Superdex 75分子排阻层析进行纯化。Westernblot和ELISA进行免疫活性分析后,将目的蛋白偶联于CNBr Sepharose 4B树脂上,研究该免疫吸附剂对肌无力患者血清中AChRAb的清除作用。结果 双酶切鉴定和序列分析表明,AChRα2 1 1 DNA片段已正确插入到pPIC9K载体中。重组菌P .pastorisGS115 pPIC9K AChRα2 1 1 经甲醇诱导可分泌表达目的蛋白AChRα2 1 1 ,经阴离子交换柱和分子排阻层析可得95 %纯AChRα2 1 1 ,并制备成免疫吸附剂。Westernblot和ELISA分析表明,重组蛋白具有与天然AChRα亚基相似的免疫活性。免疫吸附实验表明该重组蛋白可特异性地去除肌无力患者血清中的AChRAb。结论 在P .pastoris中分泌表达并纯化重组蛋白AChRα2 1 1 ,制备成一种新的免疫吸附剂AChRα2 1 1 Sepharose ,可清除肌无力患者血清中的AChRAb。

胸腺切除对重症肌无力病人AChRAb、PsmRAb水平的影响

目的:观察胸腺切除对重症肌无力的影响。方法:采用ELISA法,对比了手术前后病人周围血中乙酰胆碱受体抗体及突触前膜受体抗体水平的变化。结果:伴发胸腺瘤的病者,乙酰胆碱受体抗体及突触前膜受体抗体水平高于伴发胸腺增生的病者;手术切除增生的胸腺可引起乙酰胆碱受体抗体水平的下降,而手术切除胸腺瘤可引起突触前膜受体抗体水平的增加。结论:术后周围血中抗PsmRAb水平增加,机制有待研究。

AChRab阳性和阴性重症肌无力患者CD5^+B细胞的研究

目的：研究ＣＤ５＋Ｂ细胞在重症肌无力（ＭＧ）发病中的作用。方法：采用免疫荧光双标记技术和流式细胞仪对３９例ＭＧ患者和１８例健康对照者周围血中ＣＤ５＋Ｂ细胞（ＣＤ５＋ＣＤ１９＋）的百分率进行测定，同时用ＥＬＩＳＡ间接法检测ＭＧ患者血清中ＡＣｈＲａｂ。结果：在ＭＧ患者周围血ＣＤ５＋Ｂ细胞百分率显著高于对照组，而且在血清ＡＣｈＲａｂ阳性和阴性ＭＧ中ＣＤ５＋Ｂ细胞均明显高于对照组；但在血清ＡＣｈＲａｂ阳性和阴性ＭＧ患者之间ＣＤ５＋Ｂ细胞百分率无显著性差异发现。结论：ＣＤ５＋Ｂ细胞与ＭＧ发病有关，但与ＡＣｈＲａｂ的产生之间无显著相关。

黄芪复方对重症肌无力患者T淋巴细胞亚群及IFN－γ、TNF—α、IL-4和AChRAb的影响

目的探讨黄芪复方对重症肌无力（MG）患者的细胞免疫调节机制及疗效。方法30例患者服用黄芪复方，疗程12周，观察症状改善情况及不良反应。应用流式细胞仪检测MG患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群分布的变化情况；应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定患者治疗前后外周血血清细胞因子IFN-γ、TNF—α、IL4及乙酰胆碱受体抗体（AChRAb）的变化情况：结果经治疗12周后，临床显效率60％（18／30），总有效率为80％（24／30）。CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值均有明显下降，差异有统计学意义（P〈0．01）。治疗后CD8^＋T细胞明显增加，与治疗前比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；治疗前血清IFN-γ、IL-4、TNF-α和AChRAb水平显著高于健康组，治疗后IFN-γ、IL-4、TNF-α和AChRAb水平显著降低，与治疗前比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论通过调节淋巴细胞亚群比例分布以及细胞因子水平的变化，可能是黄芪复方发挥免疫调节作用机制之一。

CD40配体在血清AChRab阳性和阴性重症肌无力发病机制中作用的探讨

目的 :研究CD40配体在血清阳性重症肌无力 (SPMG)和血清阴性重症肌无力 (SNMG)主要致病因素产生中的作用。结果 :无论SPMG或SNMG ,外周血单个核细胞体外培养后上清液中γ干扰素 (IFN γ)、白细胞介素 4(IL 4)、抗乙酰胆碱受体抗体 (AChRab)和抗突触前膜受体抗体 (Prsmab)均比健康对照组非常显著增高 (P =0 0 0 0 )。抗CD40L单克隆抗体 (anti CD40Lmonoclonalantibody ,CD40LMcAb)干预后 ,SPMG组与健康对照组的差异无统计学意义 (P >0 0 5 ) ,SNMG组只有PsmRab与健康对照组的差异无统计学意义 (P >0 0 5 ) ,而IFN γ、IL 4和AChRab的水平虽有所下降 ,但仍显著高于健康对照组 (P <0 0 5 )。结论 :SNMG的AChRab、IFN γ和IL 4可能还通过其他途径产生 ,存在其他发病机制。

AChRab阳性和阴性重症肌无力IL-4和IFN-γ分泌细胞的检测

胸腺切除术的MG患者,分成AChRab阳性和阴性两组。发现在阳性组中,其外周血和骨髓中IL-4和IFN-γ分泌细胞数量均高于AChRab阴性组,(P<0.05)。而胸腺中两组差异无显著性。AChRab阳性的MG病人IL-4分泌细胞和IFN-γ分泌细胞的水平异常增高显示IL-4和IFN-γ在MG自身抗体的产生中均有重要作用,T细胞的不同亚类都参与了MG的免疫调节。

干扰素-γ对重症肌无力患者自身抗体的调节作用及相关性分析

目的 了解重症肌无力患者自身抗体的产生与细胞因子的关系。方法 采用免疫酶点方法检测 2 2例重症肌无力患者外周血AChRAb分泌细胞和IFN γ分泌细胞。结果 重症肌无力患者外周血AChRAb分泌细胞和IFN γ分泌细胞均高于正常对照组 ,AChRAb和IFN γ之间呈高度正相关性 ,不同亚型之间两种分泌细胞差异均无显著性。结论 重症肌无力患者体内有IFN γ分泌细胞增高 ,IFN γ与AChRAb的相关性提示IFN γ可能对重症肌无力患者自身抗体的产生有促进作用。

参芪扶正注射液在重症肌无力激素冲击治疗过程中的应用

目的评价参芪扶正注射液在重症肌无力激素冲击治疗过程中的疗效和不良反应。方法将连续收治的确诊的66例重症肌无力患者分为2组。参芪组以参芪扶正注射液辅助甲泼尼龙激素冲击治疗,对照组采用单独甲泼尼龙激素冲击治疗。采用许氏临床绝对评分和相对评分法评价甲泼尼龙激素冲击治疗前、治疗中和治疗后的病情严重程度,并比较两组激素冲击加重的时间。结果治疗过程中,两组分别有29例患者在激素冲击阶段出现一过性加重期。与治疗前相比,在激素冲击加重期,两组患者临床绝对评分均显著增加(P<0.000),参芪组的临床绝对评分低于对照组(P<0.05)。治疗结束时,参芪组的绝对评分显著高于对照组(P<0.000)。参芪组加重期时间(3.7±1.1)d显著少于对照组(7.8±2.0)d。治疗结束时,参芪组的相对评分显著高于对照组(P<0.000)。参芪组出现轻微的不良反应(18.75%),如消化不良和皮疹。结论参芪扶正注射液能减轻激素冲击治疗期间重症肌无力一过性加重程度和缩短加重持续时间,同时有一些轻微不良反应。

重症肌无力治疗现状概述

重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是一种由乙酰胆碱受体抗体(acetylcholine receptor antibody,AChRAb)等多种抗体介导、细胞免疫依赖及补体共同参与,引起神经肌肉接头突触后膜乙酰胆碱传递障碍,导致骨骼肌收缩无力的获得性自身免疫性疾病。可发生于任何年龄,但以儿童及青壮年多见,MG最早出现受累的肌肉多为眼外肌,其次是肢体肌、咽喉肌、咀嚼肌等。但随着病情的进展则全身肌受累者增加,平滑肌及膀胱肌一般不受侵犯[1~4],易疲劳,活动后加重,休息和胆碱酯酶抑制剂等治疗后明显缓解[5]。MG患者因肌无力在生活、劳动中受到严重影响,给患者的身体和心理造成很大痛苦,对家庭和社会也造成很大的负担,部分患者因肌无力危重造成死亡。

重症肌无力自身抗体、T淋巴细胞亚群及其临床意义的探讨

目的：探讨重症肌无力（ＭＧ）抗乙酰胆碱受体抗体（ＡｃｈＲａｂ）、抗突触前膜受体抗体（ＰｓｍＲａｂ）和Ｔ淋巴细胞亚群与临床的关系。方法：应用ＥＬＩＳＡ法检测４０例重症肌无力病人血清中上述两种自身抗体，应用Ｔ淋巴细胞亚群单克隆抗体微量细胞毒法检测该组病人Ｔ淋巴细胞亚群。结果：①ＡｃｈＲａｂＩｇＧ型阳性２４例（６０％）、ＩｇＭ型阳性１５例（３７．５％），ＰｓｍＲａｂＩｇＧ型阳性２４例（６０％）、ＩｇＭ型阳性１１例（２７．５％）；②仅ＡｃｈＲａｂＩｇＧ型阳性３例（７．５％）、ＩｇＭ型阳性１例（２．５％），只有ＰｓｍＲａｂＩｇＧ型阳性２例（５％），二种抗体的ＩｇＧ型和ＩｇＭ型均阴性７例（１７．５％）；③ＡｃｈＲａｂ与ＰｓｍＲａｂ存在直线正相关；④本组病人ＣＤ＋４增高、ＣＤ＋８降低、ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比率增高；⑤ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比率与这两种自身抗体无相关关系；⑥年龄大于４０岁组的ＣＤ＋８低于４０岁以下组，而ＣＤ＋４／ＣＤ＋８高于４０岁以下年龄组；⑦病程大于或等于３年组的ＣＤ＋８、ＣＤ＋４／ＣＤ＋８分别低于、高于病程小于３年组。结论：ＭＧ病人存在体液免疫和细胞免疫的异常；ＭＧ可受到ＡｃｈＲａｂ和ＰｓｍＲａｂ的免疫性损害?

大剂量甲泼尼龙治疗重症肌无力的临床疗效及对血清补体的影响

目的:观察大剂量甲泼尼龙治疗重症肌无力(MG)的临床效果及对血清补体的影响。方法:对大剂量甲泼尼龙冲击(MPPT)治疗的32例MG病人于治疗前及治疗后分别进行临床评分、疗效观察和血清乙酰胆碱受体抗体(AChRAb)、C3、C4检测。结果:MPPT治疗MG后,1周时临床显效率56·3%(18/32),3月时临床显效率为81·3%(26/32),总有效率为93·8%(30/32)。治疗3月后血清AchRAb水平明显高于对照组,C3、C4水平明显低于对照组(P<0·05);经治疗后患者血清AchRAb水平明显降低,C3、C4水平明显增高,较治疗前差异显著(P<0·05)。结论:大剂量甲泼尼龙冲击治疗MG见效快,冲击后能维持临床缓解,可促进C3、C4水平升高,值得临床广泛应用。

重症肌无力乙酰胆碱受体抗体致中枢损害时IL-6水平的研究

目的 探讨重症肌无力 (MG)患者中枢神经系统 (CNS)受损时白细胞介素 - 6 (IL - 6 )水平的变化及其意义 ,进一步阐明MG之CNS受损的免疫机制。方法 将MG患者血中提取的乙酰胆碱受体抗体 (AChRab)注入大鼠的脑室系统 ,建立CNS损害的MG大鼠模型 ,然后用放免法测定中枢及外周组织IL - 6水平及其动态变化。结果 脑室注入AChRab后 ,大鼠出现明显MG动物模型样表现 ,脑干听觉诱发电位 (BAEP)异常 ,同时测得其脑组织、胸腺、血清IL - 6水平显著升高 ,并随模型动物症状加重及注射时程的延长而逐步增高。结论 MG患者AChRab所致大鼠CNS损害时 ,中枢及外周IL - 6水平显著升高 ,提示IL - 6在MG患者CNS损害过程中起极其重要的作用。

重症肌无力乙酰胆碱受体抗体与猴神经烟碱型乙酰胆碱受体之间的免疫结合反应

目的 探讨重症肌力 (myasthenia gravis,MG)患者的乙酰胆碱受体抗体 (ACh Rab)与猴中枢神经烟碱型乙酰胆碱受体 (神经 - n ACh R)之间的免疫结合反应 .方法 从ACh Rab阳性的 MG患者血中提取纯化 ACh Rab,再用免疫组化法探讨 ACh Rab与猴 CNS神经 - n ACh R之间的免疫结合反应 .结果 首次表明 ACh Rab可与猴 CNS神经 - n ACh R之间免疫交叉结合 ,其阳性免疫结合反应广泛分布于猴 CNS许多部位 ,如大脑皮层 ( , , 层 )、海马皮层、基底节、下丘脑、脑干运动核团、脑干网状结构、脊髓前角运动神经元、小脑深部核团和皮层哺肯野细胞等呈强或较强阳性反应 .结论 MG患者 ACh Rab可与猴 CNS神经 - n ACh