新型胆碱酯酶抑制剂对AD大鼠空间记忆及海马结构胆碱能纤维的影响

目的探讨新型胆碱酯酶抑制剂(NAI)及水迷宫训练对AD大鼠海马结构胆碱能纤维的影响。方法用36只Wistar♂大鼠制作AD动物模型,随机分成3组:NAI组、石杉碱甲组(Hup组)、单纯损伤组(SO组)。水迷宫训练后,采用组织化学方法测定海马结构胆碱能纤维密度。结果①定位航行实验中,NAI组逃避潜伏期较SO组显著缩短(P<0.01)。②空间探索实验中,NAI组跨越各象限平台相应位置次数占总次数百分率较SO组明显增高(P<0.01)。③组化结果显示:NAI组海马结构胆碱能纤维密度较SO组明显增加(P<0.05)。尽管NAI组胆碱能纤维密度高于Hup组,但无统计学意义。结论经NAI治疗及水迷宫行为训练后的AD大鼠,海马结构内胆碱能纤维密度明显增加,提示NAI及水迷宫训练联合作用可促进AD大鼠海马结构胆碱能纤维重建。

远志皂苷对脑定位注射Aβ_(1-40)拟AD大鼠脑内神经形态病理学变化的影响

目的:建立阿尔茨海默病(AD)的大鼠模型,并观察远志皂苷对AD模型大鼠β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积及其神经细胞毒性的影响。方法:在大鼠右侧基底核区定向注射凝聚态Aβ1-40和鹅膏蕈氨酸建立AD模型,20只AD大鼠分为模型组和远志皂苷组,相同部位注射生理盐水作为假手术组。30天后,采用HE、N issl、透射电子显微镜和免疫组化染色等方法观察海马区神经细胞形态和基底核Aβ沉积变化。结果:脑内Aβ注射后,模型大鼠海马区神经元数目明显比假手术组减少,基底核M eynert细胞区可见棕黄色斑块沉积。电镜下可见神经元内脂褐质含量增加,线粒体等细胞器出现明显变性改变。结论:凝聚态Aβ1-40基底核定位注射具有明显的在体神经毒性作用,可较好地模拟AD病理表现,远志皂苷对Aβ引起的神经细胞凋亡有明显的保护作用。

BDNF、NGF对AD模型鼠脑移植区胚胆碱能神经元发育生长的调控

目的探讨脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子（ＮＧＦ）对ＡＤ模型鼠脑植入胚基底前脑后行为改善和移植区胚胆碱能神经元发育生长的影响。方法用使君子酸损毁ＳＤ大鼠基底大细胞核制成ＡＤ模型，分成ＢＤＮＦ、ＮＧＦ、ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ及单纯移植对照４组。在额、顶叶皮质植入同种胚基底前脑细胞悬液，前３组含相应神经营养因子，移植后每２ｄ向侧脑室灌注相应神经营养因子共７次。移植后１、２．５和４个月时行避暗回避试验和跳台试验，最后脑切片经ＡＣｈＥ组织化学、ＣｈＡＴ和ＬＮＧＦＲ免疫组织化学等染色，对移植区中的神经元及纤维作定量分析和图像处理。结果移植后应用神经营养因子的动物较对照组行为改善明显迅速，ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ组行为改善又较ＢＤＮＦ组或ＮＧＦ组明显。形态学证实，应用神经营养因子动物移植区中ＡＣｈＥ阳性神经元数、１６９００μｍ２网格中ＡＣｈＥ阳性纤维交点数及ＡＣｈＥ阳性神经元面积均优于对照组，ＢＤＮＦ＋ＮＧＦ组的结果又好于ＢＤＮＦ组或ＮＧＦ组。结论ＢＤＮＦ与ＮＧＦ一样能促进植入胚基底前脑的ＡＤ模型鼠行为改善和移植区胚胆碱能神经元的发育生长，ＢＤＮＦ和ＮＧＦ联合使用比单独使用一种因子更为有效。

针刺督脉穴对拟AD大鼠海马区AchE、ChAT活性的影响

目的 探讨针刺对拟AD大鼠大脑海马胆碱能神经功能的影响。方法 应用迷宫试验观测针刺对拟AD大鼠学习记忆能力的影响 ;并分别采用巯基比色分析法和免疫组化方法测定大鼠海马区乙酰胆碱酯酶 (AchE)和胆碱乙酰化酶(ChAT)活性的变化。结果 针刺组大鼠海马区AchE、ChAT活性比模型组有显著提高 (P <0 .0 1)。经迷宫学习记忆能力测试 ,针刺组大鼠成绩好于模型组 (P <0 .0 1)。结论 针刺督脉穴可增强海马区AchE和ChAT活性 ,改善拟AD大鼠的记忆功能障碍。

基于内质网应激PERK-ATF4-CHOP信号通路探讨白藜芦醇对AD大鼠脑神经细胞凋亡的影响

目的:探讨白藜芦醇(RESV)基于内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)-转录活化因子4(ATF4)-C/EBP同源蛋白(CHOP)信号通路对阿尔茨海默病(AD)大鼠脑神经细胞凋亡的影响。方法:健康大鼠海马区注射β淀粉样蛋白(Aβ1~40)建立AD模型,随机分为AD模型组、RESV低剂量组、RESV中剂量组、RESV高剂量组,RESV低、中、高剂量组大鼠分别腹腔注射10、20、40 mg/kg RESV,另设假手术组,每组10只,观察各组大鼠脑组织免疫组化情况、TUNEL染色情况、Caspase-3、GPR78、PERK、ATF4、CHOP蛋白表达水平。结果:假手术组大鼠海马神经细胞基本无Aβ1~40阳性表达,与假手术组相比,AD模型组大鼠海马神经细胞Aβ1~40阳性表达细胞显著增多(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),大鼠脑组织中Caspase-3、GPR78、PERK、ATF4、CHOP蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与AD模型组相比,RESV低、中、高剂量组大鼠海马神经细胞Aβ1~40阳性表达细胞显著减少(P<0.05),凋亡率显著减少(P<0.05),Caspase-3、GPR78、PERK、ATF4、CHOP蛋白表达水平不同程度降低(P<0.05)。结论:RESV可显著减少AD大鼠脑神经细胞Aβ1~40沉积,抑制海马神经细胞凋亡,调节凋亡关键蛋白Caspase-3表达,可能通过参与PERK-ATF4-CHOP信号通路介导的细胞凋亡抑制内质网应激,发挥脑神经细胞保护作用。

调神方对实验性类AD痴呆大鼠记忆行为和血清细胞因子含量的影响

为探讨调神方 (由党参、桂枝、远志、茯苓等组成 )对Alzheimer (AD)病的作用机理 ,造成类AD大鼠模型 ,以Y -电迷宫和ELISA法分别观察该方对模型大鼠学习记忆行为和血清细胞因子IL -2、TNF -α、INF -γ水平的影响。结果 :调神方可显著提高痴呆大鼠Y -迷宫正确次数 ,明显降低痴呆大鼠升高的血清IL -2、TNF -α含量。

养寿丹对AD模型大鼠脑内β-APP蛋白表达的影响

大鼠腹腔注射D-半乳糖,并同时注射鹅膏蕈胺酸(IBO)于双侧脑Meynert基底核建立AD动物模型,石杉碱甲作阳性药物对照组,用免疫组织化学染色法检测脑内β-APP蛋白的表达水平.手术阳性对照组、中药大剂量组和中药小剂量组大鼠脑内β-APP表达水平均低于AD模型组(P<0.05).中药剂量越大,β-APP蛋白表达越低.实验结果证明养寿丹可以降低脑内β-APP表达水平.

BDNF、NGF对AD模型鼠脑移植区一氧化氮合酶阳性神经元发育生长的影响

用使君子酸（ＱＡ）损毁ＳＤ 大鼠左侧Ｍ ｅｙｎｅｒｔ基底大细胞核，制成老年性痴呆症（ＡＤ）模型。将同种鼠胚基底前脑制成的细胞悬液不加神经营养因子和分别加入脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子（ＮＧＦ）及ＢＤＮＦ＋ ＮＧＦ者植入ＡＤ 模型鼠额、顶叶皮质，隔日通过脑室灌注人工脑脊液和相应神经营养因子共７ 次。移植后４ 个月，取脑切片作Ｎｉｓｓｌ染色、ＮＡＤＰＨｄ和ＮＡＤＰＨｄ＋ ＡＣｈＥ 组化染色，计数移植区中ＮＯＳ阳性神经元数及其纤维在１６９００ μｍ ２ 网格中的交点数，并用ＭＩＡＳ３００ 计算机图像分析系统对移植区中ＮＯＳ阳性神经元的细胞面积进行处理。结果显示：给予神经营养因子的动物，移植区中的ＮＯＳ阳性神经元数、ＮＯＳ阳性纤维交点数和ＮＯＳ阳性神经元的细胞面积等形态学指标均较不给予神经营养因子的对照组为佳，而在应用神经营养因子的各组中又以ＢＤＮＦ＋ ＮＧＦ组为优，提示ＢＤＮＦ、ＮＧＦ能促进移植区中ＮＯＳ阳性神经元的发育生长，ＢＤＮＦ与ＮＧＦ联合使用可发挥协同作用。本文对ＢＤＮＦ和ＮＧＦ促进移植区中ＮＯＳ阳性神经元发育生长的机制进行了探讨。

电针对AD模型大鼠海马神经干细胞Nestin及学习记忆能力的影响

目的:探讨电针对淀粉样肽(-AP)所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠脑内Nestin表达的影响,并对其保护作用提供理论依据.方法:取健康的SD大鼠40只,随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组.用A 1-40微量注射至大鼠双侧Meynert基底核,建立AD模型,用电针进行治疗.于治疗后用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力,用免疫组化染色法检测Nestin阳性神经细胞数的表达.结果:①学习记忆观察:电针组的逃避潜伏期较模型组明显缩短,大鼠在原平台象限游泳时间占整个游泳时间的百分比显著升高,穿过原平台所在位置的次数明显增加(<0.01).②Nestin免疫组化检测:电针组大鼠海马Nestin阳性神经元数量在治疗组表达最强,与模型组相比具有显著性差异(<0.01).结论:电针能增强AD模型大鼠海马神经干细胞Nestin的表达,提高AD大鼠的学习记忆能力,其机制尚需讨论.

β-细辛醚对AD大鼠海马神经元蛋白质组图谱的影响

目的:探讨β-细辛醚对痴呆大鼠海马神经元蛋白质表达谱的影响。方法:SD大鼠随机分为正常时照组、模型组和β-细辛醚治疗组。模型组和β-细辛醚治疗组大鼠行脑立体定位注射术,模型组从大鼠右侧海马注入β淀粉样蛋白(Aβ_(1-40))5μg;治疗组:将Aβ_(1-40)和β-细辛醚(0.12%)混合后注入大鼠右侧海马。抽提各组大鼠海马神经元组织蛋白质,行双向电泳,采用PDQuest-7.1.1分析软件解析各组之间有明显差异表达的蛋白质。结果:β-细辛醚治疗组α-烯醇化酶(α-enolase)、钙/钙调蛋白依赖蛋白激酶(Ca^(2+)/Calmodulin-dependent protein kinase)的表达高于模型组,而尿激酶型纤溶酶原激活物(urokillasc plasminogen activator surface)、P53抑癌基因(P53 tumor suppressor)和未知蛋白(SSP6001)表达则低于模型组。

远志总皂苷对AD模型大鼠学习记忆及海马AchE、ChAT活性的影响

目的建立阿尔茨海默病(AD)的大鼠模型,并观察远志总皂苷对AD模型大鼠学习记忆及胆碱能系统的影响。方法将70只大鼠随机分为模型组,远志总皂苷高、中、低剂量组,盐酸多奈哌齐组,正常组和假手术组共7组,每组10只。采用双侧海马内一次性注射β-淀粉样多肽25-35片断(Aβ25-35)制作大鼠AD模型;连续给药5周后采用水迷宫检测各组大鼠的学习记忆能力;采用生化法检测各组大鼠脑组织匀浆中乙酰胆碱酯酶(AchE)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性变化。结果与模型组相比,远志总皂苷干预治疗组大鼠进入盲端的次数明显减少、游泳时间明显缩短,同时脑内ChAT活性增强,AchE活性降低,差异均具有统计学意义(P<0.01、P<0.05)。结论远志总皂苷对AD模型大鼠的学习记忆能力减退具有改善作用,其作用机制可能与保护中枢胆碱能系统有关。

葛根异黄酮对AD模型大鼠抗衰老作用研究

目的研究葛根异黄酮对D-半乳糖致衰老大鼠的抗衰老作用。方法 wistar大鼠68只,随机分为对照组、模型组、药物组低、高剂量组,每组17只。造模成功后,第二天开始灌胃给药,药物低、高剂量组每天分别给予40 mg/kg、160 mg/kg葛根异黄酮灌胃,模型组、对照组每天给予80 mg/kg生理盐水灌胃,连续8周后取血液,并将大鼠断头处死后取肝脏及脑组织,制作海马10%组织匀浆,分别检测丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、单胺氧化酶(MAO)水平的变化情况。结果模型组大鼠血液、肝脏、海马中SOD、GSH-Px的活性明显降低,MDA的含量明显增加,与对照组相比有明显差异(P<0.01);与模型组相比,药物低、高剂量组大鼠,除MAO外各项指标明显好转(P<0.05),且高剂量组比低剂量组的作用更明显(P<0.01);血液、肝脏组织中MAO的活力用药后,低、高剂量组均未见显著性改变,而在海马组织中有显著性降低(P<0.05)。结论葛根异黄酮能增加血液和肝脏中SOD、GSH-Px活力,降低血液、肝脏和脑组织中MDA的含量,具有一定的抗衰老作用。

乳鼠海马神经元细胞元代培养及AD损伤模型制备

采用乳鼠海马做神经元细胞的原代培养和鉴定,并利用Аβ25-3损伤处理细胞,制备AD损伤细胞模型,为后继研究中药脑脊液和血清对神经元保护试验的奠定前期基础。

重组腺病毒Ad-shRNA-NgR在大鼠缺血脑组织的转染效率研究

目的探索用于RNA干扰的重组腺病毒Ad-shRNA-NgR转染大鼠缺血脑组织的适宜滴度。方法将低、中、高3种不同滴度(7.90×109、1.58×1010、3.16×1010pfu/ml)的重组腺病毒通过立体定位手术注射到大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)/再灌注模型大鼠(n=10)脑缺血区,于术后48 h和1周在荧光显微镜下观察各组大鼠脑组织中绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达强度并估算转染效率,通过HE染色检测炎性反应。结果中滴度和高滴度注射组大鼠脑组织腺病毒转染效率相似,为60%～70%,明显高于低滴度注射组(P<0.01)。在各组脑组织切片中,仅高滴度注射组有明显炎症反应,血管周围可见淋巴和巨噬细胞浸润。结论中等滴度(1.58×1010pfu/ml)的腺病毒能高效、稳定、低毒地转染大鼠缺血脑组织,推荐用于脑缺血基因干预治疗的实验研究。

银杏内酯对OA诱导拟AD大鼠行为学和海马bcl-2表达的影响

目的研究银杏内酯对冈田酸(OA)诱导拟AD大鼠行为学和海马CA1区bcl-2表达的影响。方法大鼠海马CA1区多次微量注射OA,建立拟AD动物模型。部分模型动物同时用银杏内酯灌胃。Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,免疫组化方法观察大鼠海马CA1区bcl-2表达。结果与拟AD模型组相比,银杏内酯组水迷宫定向航行试验平均潜伏期明显缩短(P<0.05或P<0.01);空间探索试验原站点象限活动时间明显延长(P<0.05),站台穿越次数明显增多(P<0.05)。大鼠海马CA1区bcl-2阳性表达明显增多(P<0.05)。结论促进海马CA1区bcl-2表达上调,从而减少神经细胞的凋亡是银杏内酯改善拟AD大鼠学习记忆的可能机制之一。

嗅三针对AD大鼠的治疗效应与海马细胞钙稳态的相关性研究

目的:探讨嗅三针疗法对阿尔茨海默病(AD)大鼠的疗效与海马细胞钙稳态的相关性。方法:成年SD雄性大鼠50只,随机分为正常对照组、AD模型组、AD嗅神经切断模型组、嗅三针组和嗅三针对照组,每组10只。制作AD大鼠模型和AD嗅神经切断大鼠模型,通过嗅三针治疗,测试大鼠水迷宫学习记忆能力并采用荧光分光光度法测定海马细胞内Ca2+浓度。结果:水迷宫定位航行试验结果显示:平均逃避潜伏期和平均游泳路程比较,正常对照组和嗅三针组均明显短于AD模型组(P<0.01);嗅三针对照组短于AD模型组(P<0.05);嗅三针组短于嗅三针对照组(P<0.05);AD模型组与AD嗅神经切断模型组相比较,其差异无显著性意义(P>0.05)。海马细胞内Ca2+浓度比较:正常对照组、嗅三针组和嗅三针对照组均明显低于AD模型组(P<0.01);嗅三针组低于嗅三针对照组(P<0.05);AD模型组与AD嗅神经切断模型组相比较,其差异无显著性意义(P>0.05)。结论:嗅三针能够显著增强AD大鼠学习记忆功能,并且能够降低海马细胞内Ca2+浓度,其治疗效应的发挥依赖于嗅觉传导通路的完整性。

开心散对双侧海马CA1区注射Aβ_(1-42)致AD大鼠的治疗作用及机制研究

目的考察开心散对双侧海马CA1区注射Aβ_(1-42)致AD大鼠的治疗效果,初步明晰其作用机制。方法以“β-淀粉样蛋白毒性学说”为依据,使用脑立体定位仪在SD大鼠双侧海马CA1区注射Aβ_(1-42)寡聚肽段,从而复制AD大鼠模型。将痴呆大鼠随机分为模型组、石杉碱甲组、开心散低剂量组、中剂量组与高剂量组,每组10只。另取10只大鼠颅内注射等量的生理盐水为假手术组,正常大鼠10只作为空白对照组。连续灌胃给药30 d。通过Morris水迷宫行为学测试观测大鼠学习记忆成绩的变化;HE染色及Nissl染色观察脑组织病理形态;ELISA法检测脑组织中胆碱能神经递质(ACh、AChE、ChAT)、炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)及β-淀粉样蛋白(APP、Aβ_(1-40)、Aβ_(1-42))的含量;IHC法解析皮层、海马组织中tau蛋白及GSK-3β的表达水平;Western blot法察看脑组织中BAX与BCL-2的表达程度。结果与模型组相比,开心散干预组大鼠逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数增多,在目标象限的停留时间及游泳路程所占百分比均有增加(P<0.05或P<0.01);皮层、海马组织神经元数量增多,形态结构趋于正常,且尼氏小体数量增加,胞浆着色变深;脑组织中AChE活性减弱,ChAT及ACh含量明显升高(P<0.05或P<0.01);TNF-α、IL-6、IL-1β、APP、Aβ_(1-40)及Aβ_(1-42)的含量显著下降(P<0.05或P<0.01);皮层、海马组织中tau蛋白及GSK-3β的阳性表达量皆有下调(P<0.05或P<0.01);BAX蛋白的表达水平趋于下降,且BCL-2/BAX的比值有不同程度的升高趋势(P>0.05)。结论开心散对AD损伤大鼠的痴呆症状与脑组织损伤有较好的治疗效果,其作用机制涉及到胆碱能系统的修复、炎症因子释放的抑制、β-淀粉样蛋白的清除及tau蛋白磷酸化水平的调控。

维生素AD对肾阳虚证模型大鼠肾上腺、睾丸、血清睾酮水平的影响

目的:探索维生素AD对肾阳虚证模型大鼠肾上腺、睾丸、血清睾酮水平的影响。方法:将大鼠随机分为正常组、维生素AD高剂量组、维生素AD治疗剂量组、维生素AD低剂量组、模型组,以氢化可的松建立肾阳虚模型,维生素AD高剂量组、维生素AD治疗剂量组、维生素AD低剂量组用维生素AD浓缩滴剂灌胃;正常组、模型组灌以生理盐水。2周后,用Elecsys-2010全自动电化学发光免疫分析仪测血清睾酮,用分析天平称取肾上腺、睾丸的质量。结果:模型组血清睾酮含量显著低于正常组(P<0.05),肾上腺质量也显著低于正常组(P<0.05);维生素AD低剂量组肾上腺质量显著高于模型组(P<0.05);维生素AD治疗剂量组血清睾酮含量显著高于模型组(P<0.05)。结论:维生素AD可提高肾阳虚证模型大鼠的肾上腺质量,并能提高其血清睾酮含量。补充维生素AD可作为肾阳虚证预防和治疗的辅助疗法。

嗅三针对AD大鼠学习记忆能力及海马钙依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响

目的 :探讨嗅三针对阿茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力及海马组织钙依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的影响。方法:成年SD雄性大鼠50只,随机分为正常对照组、AD模型组、AD嗅神经切断模型组、嗅三针组和嗅三针对照组,每组10只。制作AD大鼠模型和AD嗅神经切断大鼠模型,通过嗅三针治疗,测试大鼠水迷宫学习记忆能力并采用ELISA法测定海马组织CaMKⅡ含量。结果:水迷宫定位航行试验显示:平均逃避潜伏期和平均游泳路程比较,正常对照组和嗅三针组均明显短于AD模型组(P<0.01),嗅三针对照组短于AD模型组(P<0.05),嗅三针组短于嗅三针对照组(P<0.05),AD模型组与AD嗅神经切断模型组比较,其差异无统计学意义(P>0.05)。海马组织CaMKⅡ含量比较:正常对照组、嗅三针组和嗅三针对照组均明显低于AD模型组(P<0.01),嗅三针组低于嗅三针对照组(P<0.05),AD模型组与AD嗅神经切断模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:嗅三针能够显著增强AD大鼠学习记忆功能、并且能提高海马组织CaMKⅡ含量表达,其治疗效应的发挥依赖于嗅觉传导通路的完整性。