保心康对心肌肥大型心力衰竭大鼠血管平滑肌环核苷酸水平的影响

【目的】探讨保心康(由人参、附子、毛冬青等组成)对心肌肥大型心力衰竭大鼠血管平滑肌环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)水平的影响及其作用机理。【方法】大鼠皮下注射异丙肾上腺素共13d以制备心肌肥大型心力衰竭模型,采用放射免疫分析法观察各组动物血管平滑肌。cAMP和cGMP水平的变化,同时对大鼠体重和心、肝、肺分别称重,并对心、肝、肺脏器进行组织形态学现察。【结果】模型组大鼠血管平滑肌cAMP、cGMP含量及心脏和肝脏的指数均比正常对照组显著升高(P<0.01)。而中药保心康能明显降低cAMP,和cGMP含量及心脏和肝脏的指数(P<0.05或P<0.01)。组织形态学观察显示保心康能改善病理状态下大鼠心、肝脏形态结构。【结论】保心康对实验性心肌肥大型心力衰竭有较好的防治作用,其作用机理与cAMP、cGMP的调节有关。

中医药调控环磷酸腺苷cAMP信号通路的文献计量与可视化分析

目的通过CiteSpace、VOSviewer、carrot 2多软件联合分析法,对中医药调控环磷酸腺苷cAMP信号通路文献进行文献计量与可视化分析,了解中医药调控cAMP信号通路的研究特点及研究热点、前沿。方法检索Web of Science核心集数据库自建库至2021年6月29日收录有关中医药调控cAMP信号通路的相关文献,对纳入文献的发文数量、发文国家地区和机构、期刊分布、发文作者、被引文献、研究热点与前沿,利用CiteSpaceV(5.6.R1)、VOSviewer、carrot 2软件联合,生成相关知识图谱并开展计量与可视化分析。结果共获得194篇相关文献,2020年发文量最多,中国大陆是发文量最多、总被引频数最高的国家,发文集中在2016年前后;北京中医药大学发文量最高,中国科学院被引频次最高,机构间合作主要以北京地区各机构合作为主,来自不同国家地区的机构之间需要加强合作;期刊《Journalof Ethnopharmacology》发文量最多,但平均被引量最多的期刊是《PLoS One》,各期刊发文主要集中在神经学、药理学、分子生物学、细胞生物学领域,施引期刊、被引期刊仅限于医学和生物学领域,而与其他学科关系不大。中国大陆作者Duan Jinao发文量最多,Wang Y、Liu X研究者文章被引率较高;被引文献主要集中在中医药对抑郁症相关的研究;研究热点、前沿集中在中医药对心血管疾病、抑郁精神心理障碍相关机制研究方面。结论中医药调控cAMP通路研究发展前景良好,通过对此深入研究可能为未来“双心”的研究提供参考,具有一定的研究价值。

基于环化腺苷的自发荧光特性用荧光光谱法直接测定注射剂的中环磷腺苷

根据环磷腺苷(cAMP)在酸性至中性的水溶液具有明显的自发荧光性质,建立了一种注射剂中环磷腺苷药物含量测定的新方法。实验结果表明,在pH=2.0的B-R缓冲溶液中,cAMP在激发波长285nm下于393nm处有最强的荧光发射峰。通过紫外光谱、荧光光谱和质谱研究表明,该荧光发射信号可能来源于cAMP的环化腺苷结构,在酸性质子化后荧光强度明显增强,并且荧光光谱具有较大Stokes位移,明显区别于腺嘌呤(ANE)产生的荧光光谱。cAMP在1.0×10-6～1.0×10-5 mol/L浓度范围内与荧光峰强度呈良好的线性关系(r=0.9991),检出限(3S0/K)为1.708×10-9 mol/L。将该方法用于cAMP注射液的检测,加标回收率范围98.3%～110.0%,相对标准偏差(RSD)≤4.9%。

益气活血方对兔脑缺血再灌注损伤TXA2，PGI2及环核苷酸的影响

用家兔四血管夹闭模型观察益气活血方对脑缺血再灌注损伤ＴＸＡ２、ＰＧＩ２及ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ的影响。在缺血３０分钟和再灌注４５分钟后，脑组织ＴＸＢ２含量明显升高（Ｐ＜０．０５），６—ｋｅ－ｔｏ—ＰＧＦ１α含量降低（Ｐ＜０．０５），血浆及脑组织ｃＡＭＰ含量升高（Ｐ＜０．０５），而血浆及脑组织ｃＧＭＰ含量无明显变化（Ｐ＞０．０５）。在缺血前静注益气活血方（４．４ｇ生药／ｋｇ），可明显抑制再灌注后脑组织ＴＸＢ２含量的增加（Ｐ＜０．０５），提高脑组织６—ｋｅｔｏ—ＰＧＦ１α含量（Ｐ＜０．０５），但对缺血及再灌注时血浆及脑组织ｃＡＭＰ含量的增加并无明显影响（Ｐ＞０．０５）。提示脑组织局部的ＴＸＡ２／ＰＧＩ２平衡失调与脑缺血再灌注损伤的发生发展密切相关。

低聚磷酸盐促进cAMP发酵合成的全局转录组分析

目的:以节杆菌Arthrobacter sp. CCTCC 2013431为研究对象,探究低聚磷酸盐作为能量供体促进环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)发酵合成的作用机理。方法:在7 L发酵罐中添加低聚磷酸盐,对发酵性能、转录组学、关键酶活性以及重要代谢物水平进行分析,揭示低聚磷酸盐促进cAMP发酵合成的机理。结果:发酵24 h添加2 g/L六偏磷酸钠,cAMP产量显著提高,达到3.64 g/L,与对照组相比提高了33.82%。转录组数据分析表明,由于六偏磷酸钠的添加,227个基因表达量显著上调,265个基因表达量显著下调;磷酸戊糖途径和cAMP合成途径中多数酶编码基因的转录水平,电子传递链中复合体Ⅲ、复合体IV和F0F1-ATP酶以及聚磷酸盐激酶编码基因的转录水平,硫氧还蛋白、过氧化氢酶及CLP蛋白酶等编码基因的转录水平均显著提高。此外,对丙酮酸激酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶、腺苷琥珀酸合成酶、腺苷酸环化酶、过氧化氢酶、聚磷酸盐激酶活性以及胞内活性氧、ATP和NADPH等进行测定,进一步证明了转录组分析结果。结论:六偏磷酸钠能够强化磷酸戊糖途径与cAMP合成途径,提高ATP供应,同时维持胞内氧化还原平衡,促进产物合成与积累。

LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中cAMP和cGMP浓度的研究

目的：建立LC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的浓度。方法：采用RRHD Eclipse Plus C18色谱柱（3.0 mm×100 mm,1.8μm）,柱温为25℃,以水（含0.1%甲酸）-乙腈（90∶10）为流动相,流速为0.3m L·min-1。2种被测成分的监测反应质荷比分别为330.10→136.00（cAMP）、346.05→152.00（cGMP）,内标化合物的监测反应质荷比为277.28→152.00（恩替卡韦）。结果：cAMP、cGMP的线性范围分别为0.010 1-1 010.00 ng·m L-1、0.010 0-1 000.00 ng·m L-1（r≥0.999 0）,最低检测浓度分别为0.010 1、0.010 0 ng·m L-1。日内、日间RSD均小于15%,重复性好。采用LC-MS/MS方法测定大鼠血浆中cAMP、cGMP的浓度分别为（1.92±0.26）ng·m L-1和（3.61±0.40）ng·m L-1。结论：该方法灵敏、快捷、准确,专一性强,可用于药物代谢的分析研究及中医药作用机制研究。

野艾蒿总黄酮对HepG2细胞脂质代谢中AMPK蛋白相关信号转导通路的作用研究

目的:通过研究野艾蒿总黄酮对腺苷酸蛋白活化激酶(AMPK)相关信号转导通路的影响,从而探明其调节HepG2细胞脂质代谢过程中存在的作用机制。方法:以HepG2细胞作为研究对象建立脂质堆积模型,将实验细胞分为对照组和药物组,Western blot检测经药物作用后该模型中乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase,ACC)磷酸化表达情况以及AMPK上游钙调蛋白依赖性激酶(Ca2+ dependent protein kinase kinase,CaMKK)活性改变对药物激活AMPK的影响;超高效液相色谱法检测野艾蒿总黄酮激活AMPK对HepG2细胞内AMP/ATP水平的影响。结果:(1)油红染色结果显示,野艾蒿总黄酮能够通过AMPK来促进HepG2细胞脂质代谢。(2)Western blot结果显示,药物组与对照组相比,ACC的磷酸化表达均具有显著性差异(P<0.05)且表达水平升高,但该过程可以被AMPK抑制剂所阻断。(3)野艾蒿总黄酮在CaMKK特异性抑制剂作用下仍能够上调HepG2细胞中AMPK的磷酸化表达。(4)超高效液相色谱结果显示药物组与对照组相比,一磷酸腺苷(adenosine monophosphate,AMP)、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量及AMP/ATP含量比值均未发生显著变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:野艾蒿总黄酮能够依靠药物-AMPK-ACC这一调脂通路来影响HepG2细胞脂质代谢,但其激活AMPK途径与CaMKK活性和AMP/ATP含量比值变化无关。