乳牛前脂肪细胞原代培养过程中ADPN基因和HSL基因表达水平的检测

选取犊牛大网膜脂肪组织,进行牛前脂肪细胞的单层贴壁培养,在细胞接种后第4、6、8、10、12、141、6 d分别提取细胞总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR方法,检测了体外培养的犊牛前脂肪细胞不同时期ADPN基因mRNA和HSL基因mRNA的表达情况。结果表明,单层培养的脂肪细胞在第4、6、8、10、12、141、6 d,ADPN基因mRNA的表达水平呈先下降后升高的趋势,而HSL基因mRNA的表达水平则呈下降趋势。

绵羊ADPN基因和PTGS2基因多态性与产羔数相关性研究

实验旨在研究ADPN基因和PTGS2基因与湖羊和杜泊羊产羔数的相关性,采用直接测序法检测65只湖羊和60只杜泊羊的ADPN基因的第3外显子以及PTGS2基因的第3外显子到第5外显子的多态性,并分析其与产羔数的相关性。结果表明:湖羊在ADPN基因第3外显子的133 bp处突变的密码子由GAT转变成AAT,并使编码的氨基酸由D(天冬氨酸)转变成N(天冬酰胺);在594bp处突变的密码子由AGA转变为AAA,使编码的氨基酸由R(精氨酸)转变为K(赖氨酸);湖羊在PTGS2基因第3外显子的77 bp位点的密码子由AAA转变为CAA,并使编码的氨基酸由K(赖氨酸)转变为Q(谷氨酰胺);但在杜泊羊群体中并没有发现基因的突变。因此推测ADPN基因和PTGS2基因可能是引起湖羊高繁殖力的基因。

新疆维吾尔族老年人低骨量与ADPN基因多态性的相关性研究

目的研究ADPN基因2个单核苷酸多态性位点T45G(rs2241766)、G276T(rs1501299)与新疆维吾尔族老年人低骨量的相关性,探讨该基因多态性维吾尔族的分布差异。方法收集2010年以来入住新疆医科大学第一附属医院干部病房的维吾尔族患者共490例,使用双能X线骨密度仪测量腰椎或髋关节骨密度(BMD)值,根据BMD值进行分组,其中低骨量病例组(骨量减低组+骨质疏松组)250例,对照组(骨量正常组)240例。采用多重SNa Pshot SNP方法对ADPN基因T45G及G276T位点进行基因分型。结果 (1)ADPN基因多态性在病例组与对照组间整体进行比较,基因型及等位基因分布差异均无统计学意义(P>0.05);(2)ADPN基因T45G、G276T两位点按性别分组,该基因多态性在男性、女性之间的分布差异无统计学意义(P>0.05);(3)Logistic回归分析提示女性及高血压是影响骨质疏松的独立危险因素。结论 ADPN基因T45G、G276T多态性与新疆地区维吾尔族老年人群低骨量发生无明显相关性。

重组人脂联素基因构建、表达、纯化及活性鉴定

根据脂联素cDNA序列设计并合成9条寡聚核苷酸片段,经重叠PCR技术获得重组人脂联素基因.构建pET-22b(+)/ADPN表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达.目的蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上.表达产物通过Ni-NTA柱纯化,SDS-PAGE分析显示,其分子量约为30 ku,与预期结果一致.内皮细胞生长抑制实验证实,重组人脂联素生理浓度下具有抑制人内皮细胞生长的活性并呈时间依赖性.以上工作为进一步研究脂联素的生物学功能奠定了基础.

脂联素对酮病奶牛中性粒细胞自噬相关基因mRNA表达的影响

通过模拟向高BHBA的中性粒细胞培养液中添加不同质量浓度的脂联素(ADPN),运用荧光定量PCR技术,分别检测中性粒细胞自噬相关基因mRNA的表达水平。结果显示:添加高BHBA(4.8mol/L)的中性粒细胞培养6h后,与对照组相比,自噬相关基因LC3B、Beclin、ULK1的mRNA表达水平显著升高(P<0.01),SQSTM1(p62)、mTOR的mRNA表达水平显著下降(P<0.01);添加不同质量浓度的ADPN(25,50,100μg/L)后,相对于高BHBA组,中性粒细胞自噬相关基因LC3B、Beclin、ULK1的mRNA表达水平显著下调,且在ADPN 50μg/L时,具有极显著差异性(P<0.01);此外SQSTM1、mTOR的mRNA表达水平显著升高。结果表明:BHBA可增加中性粒细胞自噬相关基因的表达,ADPN可抑制高BHBA引起的中性粒细胞细胞程序性死亡,进一步说明ADPN对调控酮病奶牛中性粒细胞免疫抑制具有重要的价值意义。