鸡肺泡上皮Ⅱ型细胞的培养与鉴定

为研究禽流感等敏感病毒及其他致病因子对肺泡上皮Ⅱ型细胞（AEC-Ⅱ）的致病性,建立了鸡AEC-Ⅱ细胞体外培养方法。采用胰蛋白酶和Ⅳ型胶原酶联合消化法对18日龄鸡胚肺组织进行消化,经差速离心和免疫黏附,获得了鸡AEC-Ⅱ细胞,再经纯化、体外培养和碱性磷酸酶染色法鉴定。结果表明,鸡AEC-Ⅱ细胞在接种后18 h开始贴壁进入适应期,细胞为圆形,呈岛屿状生长;接种后24-72 h,进入对数生长期,细胞为多边形,并融合成单层,胞浆内有明显的颗粒;接种后第4天细胞数量达到高峰（1.38×10^5个/mL）,并进入稳定生长期,胞浆内颗粒开始减少;接种后6-7 d,细胞进入衰退期,胞浆内颗粒显著减少,细胞逐渐死亡、脱落。另外,4代（F4）之前的AEC-Ⅱ传代细胞贴壁时间早,形态均一,纯度高。说明接种后24-72 h内获得的AEC-Ⅱ原代细胞和F4之前的传代细胞可以供体外试验研究。

以Ⅱ型胶原为基质长期传代培养软骨细胞

目的 :建立以Ⅱ型胶原为基质的软骨细胞培养系统。方法 :分离兔关节软骨细胞 ,于Ⅱ型胶原包被的培养板上培养。通过光镜和电镜检查、S 10 0蛋白及尿酸检测 ,分析细胞的生物学特性。结果 :原代软骨细胞接种 48h贴壁 ,传代细胞 8h贴壁。连续培养至 2 3代 ,存活时间达 5个月。前 6代细胞增殖快 ,呈圆形或多角形 ,可见异染物沉积 ,多数细胞有S 10 0蛋白表达。 6代以后的细胞呈现反分化现象 ,增殖速度下降 ,异染物合成减少 ,S 10 0蛋白的表达逐渐丧失。结论 :以Ⅱ型胶原为基质培养软骨细胞是较理想的培养系统。