基于AFLP遗传多样性和功能成分含量的葛资源特性研究

目的:研究葛资源的遗传多样性和品质特征。方法:提取葛幼嫩叶片基因组DNA,使用扩增片段长度多态性(AFLP)分子标记技术对各样品进行扩增,并应用GeneMapper分析软件对AFLP扩增结果进行分析;采用高效液相色谱(HPLC)对葛根中异黄酮类化合物葛根素、大豆苷、大豆甙元等主要成分进行含量测定,并利用SPSS软件进行成分含量的聚类分析。结果:5对AFLP荧光引物扩增获得1113条多态性条带,多态性比率达到100%。非加权组平均法(UPGMA)聚类分析结果显示,20号样品(湖南茶陵野葛)与其它葛资源差异较大,在相关系数为0.35时与其它样品分开,剩余样品在0.48的相关系数处分为两大类群,其中一类主要为野葛(云南、重庆),但有17号(湖南武冈粉葛)、18号样品(湖南江背粉葛)与该类聚集为一群,其遗传背景与野葛相似;而另一个类群主要为粉葛(广东、广西、湖南)和湖南的野葛资源,湖南野葛资源与云南等地区野葛差异较大。成分含量聚类分析结果表明所有样品可分属野葛与粉葛2个群,其中野葛的成分含量比粉葛高,但17号样品(湖南武冈粉葛)聚集在野葛群。结论:综合分析发现AFLP分子标记技术能揭示葛的遗传多样性,野葛及粉葛在成分含量方面存在明显差异,其中17号样品(湖南武冈粉葛)成分含量与野葛相近,为优异的粉葛资源。

黄瓜种质资源遗传多样性及其亲缘关系的AFLP分析

采用AFLP分子标记技术 ,对中国黄瓜种质资源遗传多样性及其与外来种质的关系进行了分析 ,结果表明 8对AFLP引物在 70份黄瓜种质中共扩增出 4 2 5条带 ,多态性带的比例为 6 6 %。供试黄瓜种质的平均期望杂合度为 0 376 ,中国种质的平均期望杂合度为 0 387,明显高于国外种质的 0 2 91。西双版纳黄瓜和印度野生黄瓜具有一些栽培种质没有的特异位点 ,中国栽培种质的特异位点多于外来栽培种质 ,后者也有一些中国栽培种质没有的特异位点。聚类分析将 70份种质分为三大组群 ,即西双版纳黄瓜 (CucumissativusL .var.xishuangbannanesisQietYuan)组群 ,C .sativusvar.hardwickii野生黄瓜组群和栽培黄瓜组群。西双版纳黄瓜与栽培黄瓜的距离最远 ,与野生黄瓜次之。按一定的遗传距离可以将中国和外来栽培种质分开。大多数华南型和华北型种质归属于不同的亚组。

野败型杂交水稻恢复基因的AFLP标记研究

选择汕优６３ Ｆ_２的高可育株和高不育株分别建立 ２个基因池，利用 ＡＦＬＰ标记技术对 ２ 池间的多态性进行了研究。分析表明，６４组引物在两池间全部扩增出了稳定、清晰的带纹，共 计３ ４７７条带。多数引物在基因池间未呈现多态性，只有引物组合Ｅ－ＡＧＣ／Ｍ－ＣＡＡ在基因池 间表现多态性，用双亲、Ｆ_１、Ｆ_２单株以及生产和育种上的骨干不育系与恢复系验证均表明这组 引物所揭示的多态性片段与恢复基因有关（命名为ＡＰ_１）。ＡＰ_１为单拷贝，与恢复基因间的距离 为 ４．７６ｃＭ。

大白菜中与芜菁花叶病毒(TuMV)感病基因连锁的AFLP标记

TuMV是大白菜病毒病的主要病原物之一,所以抗TuMV病毒病成为白菜抗病育种的主要目标,寻找与抗性基因紧密连锁的分子标记,进行分子标记辅助育种,是提高白菜抗病育种效率的有效手段。以抗病自交系Brp0058和感病自交系Brp0181杂交后代的F2分离群体为试材,采用分离群体分组分析法(BSA),筛选到2个与TuMV感病基因紧密连锁的AFLP分子标记,利用MAPMAKER/EXP(Version3.0)作图软件统计,其遗传距离分别为7.5和8.4cM。

花生黄曲霉侵染抗性的AFLP标记

本研究利用抗、感黄曲霉侵染的花生品种为亲本配制杂交组合“中花5号×J11”,以其F2分离群体为研究材料,采用AFLP技术和BSA分析方法,获得了与花生黄曲霉菌侵染抗性连锁的2个分子标记,标记与抗性间的遗传距离分别为8.8 cM和6.6 cM;利用获得的分子标记对抗、感黄曲霉的花生种质资源进行了分子鉴定,试验结果表明,分子标记与抗性鉴定结果具有较高的一致性,证实了两标记应用于研究群体之外的育种潜力。该抗侵染分子标记的建立为开展花生抗黄曲霉侵染辅助选择育种提供了有效的筛选技术。

用AFLP分子标记鉴定冬枣自然授粉实生后代杂种的研究

应用AFLP技术对65株冬枣自然授粉实生后代进行杂种鉴定,从81对EcoRⅠ和M seⅠ选择性引物中筛选出12对带型清晰且多态性较高的引物。用这12对引物共扩增出517条谱带,其中多态性带376条,多态性百分率为72.7%。共扩增出金丝小枣特征带10条,鉴定出34株冬枣×金丝小枣杂交实生苗;扩增出尖枣特征带7条,鉴定出冬枣×尖枣杂交实生苗15株;不能确定的有16株。

山东石榴品种遗传多样性与亲缘关系的荧光AFLP分析

利用荧光AFLP标记技术,采用8对EcoR I/Mse I引物对山东省25个石榴品种进行AFLP-PCR分析,结果表明:25个石榴品种扩增的多态性位点数从70条到126条不等,平均90.25条,平均多态性位点41.78%;所有检出位点的平均观测等位基因数、平均有效等位基因数、平均Nei's基因多样度和平均香农信息指数分别为1.4178、1.1874、0.1133和0.1752;方差分析显示各位点的Nei's基因多样度和香农信息指数具有不同程度的显著性差异;基于Lei&Li相似系数利用UPGMA法进行聚类分析,在相似系数0.786处将25个品种划分为4大类。根据AFLP结果探讨了山东石榴品种的亲缘关系与新品种选育的前景。

苹果柱型基因Co的一个AFLP标记的SCAR转换

将苹果柱型基因的一个AFLP标记成功地转换成了简单实用的SCAR标记。首先对AFLP标记片段进行序列测定 ,然后根据序列特点设计了两对特异引物CoA1/CoA2 和CoA1/CoA3 ,每条引物长 2 0bp。PCR结果表明CoA1/CoA2 可以扩增出 2 16bp和 148bp两条带 ,其中 2 16bp的为柱型性状的特征带 ;CoA1/CoA3 可以扩增出 2 73bp和 2 0 5bp的两条带 ,其中 2 73bp的为柱型性状的特征带。两对引物在杂交后代中扩增出的特征带与柱型性状的分离重组率都很低 (CoA1/CoA2 为 6 .3%± 2 .5 % ;CoA1/CoA3 为 7.3%±2 .6 % ) ,所以它们都可以作为该SCAR标记的特异引物所用。

运用近等基因系(NIL)、AFLP、RFLP和SCAR标记对玉米S组育性恢复基因(Rf_3)的研究

以１对近等基因系（ＮＩＬ）及其回交群体（ＢＣ１）为材料，采用ＢＳＡ法，利用ＡＦＬＰ技术，筛选与Ｒｆ３基因连锁的分子标记。在筛选的１２８个ＡＦＬＰ引物组合中，有２个能在ＮＩＬ及其可育池、不育池间扩增出多态性条带ＲＲ６和ＲＲ７。１００个ＢＣ１个体验证结果表明，ＡＦＬＰ标记ＲＲ６扩增产物中仅出现２个重组体，重组率２％，由此估测ＲＲ６距Ｒｆ６基因约２．０ｃＭ。并成功地将此标记转化为 ＳＣＡＲ标记，进行了ＮＩＬ和 ＢＣ１个体的特异性扩增。在来自综 ３ × Ｐ１３８的Ｆ２：３的群体上经ＲＦＬＰ分析后，将ＲＲ６定位于第二染色体的长臂上。不仅为辅助育种奠定了基础，而且为克隆Ｒｆ３基因提供了有益的信息。

利用AFLP技术筛选与银杏性别相关的分子标记

利用 amplified fragment length polymorphism(AFLP)技术 ,应用 4 8个引物组合 ,检测了雌雄银杏基因组DNA的多态性 ,筛选与银杏性别相关的分子标记 ,其中 3个引物组合各提供了 1个与雌性相关的分子标记 .经Southern点杂交证实有两个标记为银杏雌性基因组所特有 .这些分子标记的获得 ,为寻找性别特异的探针或PCR引物 。

4种养殖扇贝的群体遗传多样性及特异性AFLP标记研究

应用AFLP技术对我国4种主要养殖扇贝进行了遗传分析.虾夷扇贝、海湾扇贝、华贵栉孔扇贝、栉孔扇贝4种养殖扇贝群体中,种内遗传相似度依次分别为0.841 5,0.786 3,0.719 0 和0.673 1,香侬氏指数分别为43.52,58.87,80.16和92.83,栉孔扇贝和华贵栉孔扇贝的遗传多样性水平明显高于海湾扇贝和虾夷扇贝;AFLP标记共享位点分布表明,在4种扇贝中栉孔扇贝与华贵栉孔扇贝之间的共享位点最多,同时4种扇贝的种间遗传相似度也以栉孔扇贝和华贵栉孔扇贝之间为最高(0.769 5),海湾扇贝和虾夷扇贝之间为最低(0.662 6),揭示所研究的几种扇贝中栉孔扇贝和华贵栉孔扇贝的遗传关系最近(遗传距离为0.262 1);找到了21 个种内特异性AFLP标记和种间共享标记,可用于种质鉴定和分子辅助分类.

中国滇蔗茅种质资源遗传多样性的AFLP分析

利用10对AFLP引物对来自国家甘蔗资源圃的41份滇蔗茅(Erianthus rockii)无性系进行扩增,获得860个片段,多态性条带629个,多态性条带比率0.73,特异片段54个。遗传相似性系数、UPGMA聚类和主效应分析表明,在相似系数0.52处做切割线,毛轴野古草、斑茅和滇蔗茅无性系分为3个类群;在相似系数0.715处做切割线时,又将41份滇蔗茅无性系划分为3个大类群,云滇07/23独自形成A类群,鉴于其叶鞘背毛,有待作进一步的分析;B类群3份无性系,主要来自云南西南部高海拔地区;C类群37份无性系,其中30份来自云南西南方向的保山、德宏地区,其他地区7份;在相似系数0.738处做切割时,将C类群37份无性系划分为4个亚类群,亚类群的划分反映出明显的地域分布规律,来自同一地区的无性系多聚为一类;在相似系数0.765处做切割可将C4亚类群划分为4个亚类群(C4-1,C4-2,C4-3,C4-4),其中C4-3亚类群中云滇07/9/1与云滇99/4分子聚类最为相似,可作为复份材料保存;C4-3亚类群在相似系数0.773处切割又可以分为3个分支类群,以上分析反映出同一地区无性系之间具有丰富的遗传变异;主效应分析反映的属间、种间、无性系之间的亲缘关系与分子聚类分析结果一致;由此可见,丰富的地理生态条件造就了滇蔗茅丰富的遗传多样性和明显的地域性分布规律。

河北和山东冬枣果实品质评价及AFLP分子标记的研究

为探讨产区间冬枣的品质、遗传差异，将来源于河北和山东不同产地的冬枣按照完全随机区组设计栽种于河北、山东、北京的4个试验园，采取同样的栽培管理措施。通过对试验园冬枣果实的形态、品质等各项指标进行连年的分析测定和感官评价，并进行了DNA—AFLP分子标记研究。结果表明：河北、山东两省冬枣的单果质量、纵横径、果形指数、可食率、含水率、着色指数，果实Vc、总糖、可滴定酸和可溶性固形物含量等指标间没有明显差异，在同一试验园两省冬枣的感官评价差异也不明显；AFLP分析证明两省冬枣样品间遗传相似性很高（SM=0．9873～1．0000），被聚为一类，表明产自河北、山东的冬枣属于同一品种，造成冬枣果实品质差异的主要原因是立地条件和管理措施。冬枣品种内确实存在一定差异，这些差异属于单株变异，与产地来源无关。

棉花纤维发生相关AFLP标记

以徐州１４２及其无绒无絮（无纤维）突变体（ｆ１）为材料，利用ＡＦＬＰ标记技术对该近等基 因系进行ＤＮＡ多态性分析。在６４对引物产生的６ ３６０多条扩增带中，发现１条差异带（ＣＦ１） 稳定出现在有纤维和无纤维之间。进一步用徐州１４２无线无絮突变系与纤维发育正常的渝棉一号的杂交后代 Ｆ２、Ｆ３分离群体以及几个陆地棉品种作材料验证，结果表明，差异带（ＣＦ１）与 纤维的产生呈共分离，该差异带是与棉花纤维发生相关的分子标记。进而对 ＣＦ１进行回收、克 隆和序列测定，ＣＦ１长２０５ｈｐ，通过６个开放阅读框推断的氨基酸序列，与酚羟化酶ａ－亚基、外 表皮蛋白Ｃ、ＮＡＤＨ脱氢酶亚基１、ＮＡＤＨ－ＣｏＱ氧化还原酶、２－氧代－铁氧还蛋白－氧化还原酶 以及假拟 １４．５ｋＤ蛋白（ｈｙｐｏｔｈｅｔｉｃａｌ １４．５ｋＤ ｐｒｏｔｅｉｎ）有较高的相似性。

西藏野生油菜和栽培油菜遗传多样性的AFLP分析

采用24对AFLP随机引物组合,对供试的14份西藏栽培油菜、29份野生油菜(分为白菜型和芥菜型)的遗传多样性进行了比较研究。结果表明:1)在供试的西藏油菜中,野生种多态性为64.22%,栽培种多态性为54.13%。2)野生种的遗传离散度为84.30%,遗传分化系数为4.8%,基因流Nm为14.84;栽培种的遗传离散度为75.44%,遗传分化系数为16.30%,基因流Nm为2.57。3)通过UPGMA聚类分析,可将供试的西藏油菜分为白菜型油菜(Ⅰ大类群)和芥菜型油菜(Ⅱ大类群)两大类群,在每一类群中,野生油菜和栽培油菜明显地聚为不同的两类。这一研究结果首次发现,西藏油菜野生种的遗传多态性明显高于栽培种,野生种较栽培种具有更高的遗传离散度、基因流Nm值和较低的遗传分化系数。

用酯酶同工酶和AFLP标记鉴定甘蓝型油菜“中油杂2号”的种子纯度

对甘蓝型油菜“中油杂 2号”杂交种及其父母本的酯酶同工酶分析结果显示,父本和杂种F1 比母本多一条迁移率(Rf)为 0. 8的条带,该特征条带可用来进行杂种纯度鉴定。在“中油杂 2号”的父母本间筛选了 20个AFLP引物组合,发现E33M59不仅扩增产物多态性好,而且有 3条母本特异带和 7条父本特异带在杂种F1中出现,因此该引物组合被用来进行“中油杂 2号”种子纯度的鉴定。对 5个“中油杂 2号”样品进行纯度鉴定的结果表明,酯酶同工酶和AFLP标记鉴定与田间种植鉴定的结果相吻合。

蒙古栎天然群体遗传多样性的AFLP分析

以黑龙江省小兴安岭嘉荫、内蒙古大青沟和河北省雾灵山的 3个蒙古栎群体及北京东灵山辽东栎群体为供试材料 ,用筛选出的 4对荧光引物 ,对 4个群体共计 96个个体进行AFLP分析 ,每对AFLP引物扩增出 6 3～ 1 1 3条 ,共得到 346条多态带 ;群体特异带及群体间共有带的差异与分布揭示了群体间的遗传差异及相似性 ;蒙古栎遗传多样性主要存在于群体内 ,群体间的遗传分化系数Gst为 0 0 77。蒙古栎在种级水平的遗传多样性参数略高于群体水平 ,多态带百分率P分别为 96 8%、6 7 2 % ,有效等位基因数Ae分别为 1 2 2 0、1 2 0 8,Nei基因多样性指数H分别为 0 1 4 5、0 1 34,Shannon多样性指数I分别为 0 2 4 6、0 2 0 8。东灵山辽东栎群体的P为 6 7 6 % ,Shannon多样性指数I为 0 2 2 0 ,Nei基因多样性指数H为 0 1 34。UPGMA聚类分析结果表明 ,蒙古栎自然群体间的遗传距离有随地理距离跨度增加而递增的趋势。蒙古栎遗传多样性偏低可能与其在历史上长期用作经济树种、人为干预和环境破坏较为严重。

黄瓜全雌性基因连锁的AFLP和SCAR分子标记

本研究以全雌品种‘戴多星’自交系和弱雌品种‘北京截头’自交系为双亲杂交获得F1,然后得到F2性型分离群体,利用分离群体分组分析法(BulkedSegregantAnalysis,BSA)构建全雌和弱雌两个基因池,筛选了64对AFLP选择性引物EcoRINN+MseINNN组合,发现EcoRITG+MseICAC引物组合在全雌基因池中扩增出一条分子量为234bp的特异带。经F2代单株验证,该特异条带能在全雌单株中稳定出现。以MAPMAKER(Version3.0)软件分析,该标记与全雌性位点的连锁距离在6.7cM。命名该连锁标记为TG/CAC234。将该特异条带回收、克隆、测序,设计特异SCAR引物,再对F2代单株基因组DNA进行扩增,仅在全雌单株中扩增出1条分子量为166bp的特异带,表明已成功地将与黄瓜全雌性连锁的AFLP标记转化为操作简便、表现稳定的SCAR标记,该标记命名为SA166。

贵州小型香猪基因组DNA的AFLP检测研究

报道了AFLP标记在研究贵州小型香猪遗传多态性方面的应用和该品系猪个体基因组DNA的AFLP扩增结果 ,分析了贵州小型香猪的群体遗传结构。实验应用 10条AFLP引物 ,用PstⅠ酶切 ,对 17头猪基因组DNA进行AFLP反应 ,共获得 116个AFLP标记 ,单引物获得的标记数在 2～ 2 2间 ,贵州小型香猪群体相似系数AFLP研究结果为 0 .86 6 (0 .76 0～ 0 .96 7) ,该研究为评价贵州小型香猪的遗传稳定性提供了相关的参数 。

水稻空间诱变的遗传变异及突变体的AFLP分子标记

搭载“神舟三号”航天飞船的水稻纯合种子在返回地面后SP3代种子出现颖壳、茎杆和叶片的主脉变异为金黄色的突变体,其他性状无明显变异,经遗传分析,颜色变异属一对隐性基因控制的性状变异。同时利用AFLP分子标记的方法,对航天诱变的水稻突变体进行基因组对比分析,通过聚丙烯酰胺电泳寻找突变体(黄金1号)多态性DNA片段,经过一系列引物筛选,找到了5条多态性DNA条带,对开展突变体基因功能研究和杂交水稻聚合育种有十分重要的意义。