超高效液质联用法测定牛奶中AFM1含量

近年来,牛奶中含有AFM1等食品安全恶性事件引起了社会的极大关注,也使人们对食品安全检测的需求进一步提高。而牛奶的成分复杂、加工工艺繁琐等特点也为食品安全检测技术和方法带来了更大的难度和挑战。研究结合实际工作,利用同位素内标超高效液质联用法来测定牛奶中黄曲霉毒素M1(AFM1)含量,旨在提高奶制品安全检测精准度,降低食品安全风险。

AFM1暴露量与原发性肝癌关系研究

目的研究黄曲霉毒素M1(AFM1)暴露量与原发性肝癌(PHC)发生的关系。方法对HBsAg阳性的25～60岁男性(肝癌高危人群)148例进行瞻性调查研究。采用高亲和力的抗-AFM1单克隆抗体系统,以免疫浓缩和高压液相(HPLC)系列,进行尿中AFM1累积排出量测定;用酶联免疫吸附试验检测血清HBV感染5项标志;肝功能ALT检测采用赖氏法;甲胎蛋白(AFP)检测采用固相放免法。结果⑴HBsAg(+)伴AFM1(+)组PHC发生率占总发生率的70.73%,20年里PHC的平均年发生率高达1835.45/10万,该组不论是PHC发生率还是ALT阳性率均显著高于AFM1(-)组,P<0.01。(2)AFM1(+)组的HBV感染模式主要为1,4,5同时(+),显著高于AFM1(-)组,P<0.01。(3)AFM1(+)组的AFP(+)率显著高于AFM1(-)组,P<0.05。(4)本研究对象中大量饮酒者(≥50g/d)均发生PHC。结论 HBV感染是导致PHC的基本病因,黄曲霉毒素则是重要的辅助病因,AFM1暴露与HBV有明显的协同致癌效应;而长期大量饮酒对PHC的发生具有促进作用。提倡健康饮食理念和对HBV开展预防研究在肝癌防治现场具有重要意义。

生鲜乳中黄曲霉M1胶体金法的推广研究

一、黄曲霉毒素黄曲霉毒素(Aflatoxin)是一类结构包括二呋喃环和香豆素的化合物。黄曲霉毒素可以在长波紫外光照射下产生荧光反应,依据其荧光颜色、RF值高低及化学结构的不同,分别命名为B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、R1、GM和毒醇。黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1,AFM1)是一类哺乳动物因采食黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)后在其机体内羟基化产生的有毒代谢转化产物。

黄曲霉毒素M1免疫学检测方法研究进展

黄曲霉毒素M1（Aflatoxin M1,AFM1）是黄曲霉毒素的一种,是在动物摄入含有黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）的饲料后,AFB1在体内经羟基化所形成的代谢物。AFM1主要存在于动物的乳汁中,在肝肾、肉、蛋以及尿液也有存在。随着人们生活水平的提高,乳及乳制品以其较高的营养价值深受消费者的喜爱。

基于HRP标记抗体的黄曲霉毒素M1的直接竞争-ELISA快速检测方法

为构建快速检测乳制品中黄曲霉毒素M1(AFM1)的直接竞争-酶联免疫吸附(dc-ELISA)体系,将辣根过氧化物酶(HRP)与高纯度抗AFM1单克隆抗体进行偶联后对其与AFM1竞争性反应条件进行优化,并利用AFM1污染标准物质ERMI-BD282(0)、ERMI-BD 283(0.11μg/kg)、ERMI-BD 284(0.44μg/kg)等对检测体系的灵敏度和精确性进行验证。结果当AFM1-BSA包被质量浓度0.25μg/L、抗AFM1 mAb-HRP稀释2000倍时dc-ELISA检测AFM1的IC50为0.75μg/L,检测范围为0.015～4.05μg/L,添加AFM1至0.45μg/L的鲜奶样品中检测回收率平均为80%,dc-ELISA可满足鲜乳中AFM1国家残留限量标准0.5μg/kg的检测要求。该体系可应用于鲜奶制品中AFM 1大于0.5μg/kg污染样品的快速初筛。

黄曲霉毒素B_1在奶牛体内的代谢及转化为乳中黄曲霉毒素M_1机制的研究进展

质量安全是奶业的生命线,霉菌毒素污染一直是奶业面临的主要风险因子之一,了解奶中黄曲霉毒素M_1的代谢机理是解决霉菌毒素污染的基础。本文综述了饲料中黄曲霉毒素B_1在奶牛瘤胃内的消化与代谢、在机体内的运输、在肝脏中的代谢,以及AFB_1转化为乳中AFM_1的转化率及降低措施,以期为控制乳中的黄曲霉毒素提供参考。

黄曲霉毒素M_1酶联免疫吸附检测方法的建立

建立单抗-多抗夹心酶联免疫吸附(ELISA)检测方法,为黄曲霉毒素M_1(AFM_1)的快速检测及研究奠定基础。采用有机合成法将AFM_1转化成半抗原AFM1肟化物(AFM1O),进一步与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和卵清蛋白(OVA)偶联合成完全抗原AFM_1-KLH和AFM_1-OVA;以AFM_1-KLH为免疫抗原、AFM_1-OVA为筛选抗原,采用杂交瘤技术制备AFM1单克隆抗体,以AFM_1-KLH免疫新西兰大白兔制备兔多克隆抗体;以AFM_1-OVA为标准蛋白,制备的单克隆抗体为捕获抗体,纯化的兔多克隆抗体为检测抗体,商品化HRP标记的山羊抗兔Ig G作为检测二抗,采用方阵滴定法优化各步检测条件,得到最佳试验条件,建立AFM1夹心ELISA检测方法。标准曲线方程为y=0.004 4x+0.002 1(R2=0.992 2),检测范围0.5 ng/m L^128 ng/m L;最低检测限为0.5 ng/m L,批内和批间差均小于10%,重复性良好。

免疫亲和柱-高效液相荧光检测牛奶和奶粉中的黄曲霉毒素M1

目的建立一种快速测定牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1（AFMl）的方法。方法样品经离心、过免疫亲和柱，以乙腈水为流动相，测定牛奶和奶粉中AFMl，荧光检测器定量。结果该法浓度在1～50pg／L范围内吸收度呈良好线性关系，相关系数为0．99997；回收率牛奶为90．2％，奶粉为86．7％；最低检出限牛奶0．0004,ug／L、奶粉0．004〉g／kg。结论该法快速、简便、准确、可靠，简化了现有国标法中的操作步骤，适合于牛奶和奶粉中AFMl的定量分析。

酶联免疫快速检测奶酪中AFM_1检测方法的建立

建立奶酪中AFM1的酶联免疫快速检测方法。3种奶酪样品用80%的甲醇水于90℃加热回流15 min后用三氯甲烷萃取净化，挥干三氯甲烷后用10%甲醇水复溶凝结物，最后用酶联免疫试剂盒检测AFM1的含量。结果表明，3种不同样品重复测定值相对标准偏差均少于5%，对样品分别添加AFM1标准溶液0.25，0.50，1.0μg/kg，回收率为85.1%~88.5%。所建立的酶联免疫快速检测奶酪中的AFM1的检测方法，具有重复性良好、结果相对偏差小和加标回收率高等特点。

生乳中AFM_1的来源及防控措施

针对牛奶中黄曲霉毒素的严峻形势,对某地主要生乳基地的426个饲料中AFB1及54个生乳中AFM1的来源、检测方法及脱毒剂的使用等进行了研究.结果表明,玉米及以玉米为原料生产的产品受污染较严重,分别超标2.4及2.6倍;奶牛摄入AFB1的量与奶中AFM1呈正相关;玉米中不同AFB1质量分数添加不同水平脱霉剂后在不同饲养环境下与牛奶中AFM1的转化率为0～2.32％,饲养环境差会加剧AFM1的毒性.霉变玉米是乳中AFM1的主要来源,防控应主要从源头抓起.

大学生营养状况及尿黄曲霉毒素情况调查研究

目的了解大学生日常饮食习惯及营养状况。了解尿黄曲霉毒素代谢物(AFM1)水平与进食食物种类相关性。方法对90名尿AFM1阳性的学生进行身高、体重测量,并采用食物频数法进行饮食习惯问卷调查。结果身高、体重及BMI值均达全国成人标准;膳食以谷物为主,蔬菜摄入量充足;动物性食物以畜肉类为主,水产品摄入不足,奶类食用频数过低;早餐质量欠佳,睡前加餐现象普遍;尿AFM1水平与进食食物种类无显著性相关。结论适当减少畜肉类比例,增加奶类及水产品的摄入,养成良好的饮食习惯。

黄曲霉毒素M1人工抗原的制备及鉴定

目的:合成黄曲霉毒素M1(Aflatoxin M1,AFM1)免疫抗原和检测抗原,并对其进行鉴定。方法:采用肟化法改造AFM1,并用薄层色谱法监测肟化反应进程,对肟化物鉴定。将肟化物分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,得到免疫原AFM1-BSA和检测原AFM1-OVA,然后分别用紫外分光光度法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对合成抗原进行鉴定。经动物免疫试验获得鼠源多抗血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)对多抗血清进行检测,判断抗原是否偶联成功。结果:肟化改造后,肟化物在薄层板上的迁移距离缩短;偶联物AFM1-BSA在274 nm处出现最大吸收峰,且与BSA和AFM1的紫外吸收峰都不重合;AFM1-BSA的泳动速度明显小于BSA;免疫的3只小鼠效价均在1×10-4左右,其中3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50%inhibitive concentration,IC50)为359.9 ng/ml。结论:本试验成功制备出AFM1人工抗原,并得到了敏感性好的鼠源多抗血清。

黄曲霉毒素B_1与M_1对小鼠肠道细菌多样性的影响

试验旨在研究黄曲霉毒素B_1与M_1(AFB_1与AFM_1)对小鼠肠道细菌多样性的影响。选取体况良好的4周龄ICR(CD-1)雄性小鼠40只,随机分成4组,每组10个重复,每个重复1只小鼠,其中AFB_1组小鼠每只每天灌胃0.3mg/kg体重AFB_1,AFM_1组小鼠每只每天灌胃3.0mg/kg体重AFM_1,AFB_1+AFM_1组每只每天灌胃AFB_1与AFM_1的混合溶液,其中AFB_1终浓度0.3mg/kg体重,AFM_1终浓度3.0mg/kg体重,以上3组毒素溶剂均为1.0%二甲基亚砜水溶液。对照组小鼠每只每天灌胃1.0%二甲基亚砜水溶液。每只灌胃剂量均为200μL,每天09∶00灌胃一次,连续灌胃28d。灌胃结束后,处死并解剖小鼠,收集结肠内容物,采用16SrRNA测序的方法对肠内容物细菌多样性进行测序分析。结果显示:在细菌群落的门水平、科水平及属水平,与对照组相比,3个毒素处理组小鼠肠道内容物细菌优势菌群均未发生明显排序变化(P>0.05),但不同的毒素处理仍造成了不同分类水平下细菌菌群丰度的显著变化:与对照组相比,AFB_1组及联合灌胃组小鼠肠内致病菌或条件致病菌,如Facklamia、Staphylococcus、Corynebacterium属细菌丰度显著升高(P<0.05);而AFM_1组与对照组相比未见显著差异(P>0.05)。综合试验结果,AFB_1单独作用或与AFM_1联合作用可诱导小鼠肠道内致病菌或条件致病菌细菌增殖,改变肠道健康微生物区系,损伤肠道微生物屏障功能。

肝癌高发区HBsAg携带者尿中AFM_1排出量的测定

在肝癌高发的启东市,近年来采取了一系列防霉去毒措施,易受AFB_1污染的主食玉米已调改成大米。本文报告通过上述措施后HBsAg 携带者尿中AFM_1排出量测定的结果。对象与方法1.对象:启东市某乡,男性、年龄在30～60岁之间,既往曾患肝炎,血检HBsAg 阳性者共69例,为本文检测对象。2.尿标本收集:由当地乡村保健医生协助收集,收集被检测对象的一次性晨尿500ml 送检。3.尿中AFM_1测定:

饲喂黄曲霉毒素B_1对奶山羊乳中黄曲霉毒素M_1分泌规律与转化率的影响

为研究饲粮中添加单一剂量黄曲霉毒素 B1（ AFB1）后奶山羊乳中黄曲霉毒素 M1（AFM1）的分泌规律及AFB1转化为AFM1的转化率,选择3只健康、体重接近的泌乳中期关中奶山羊,每只羊饲喂1 mg AFB1。饲喂后0、4、8、24、32、48、56、72、80、96、104及120 h采集羊乳,测定AFM1含量。结果表明：1）饲喂AFB1前（0 h）,羊乳中未检出AFM1,但是饲喂AFB1后4 h,在收集的羊乳中均检出了AFM1；2）3只试验在羊乳中AFM1含量存在差异,但是其分泌规律非常相似,均呈先升高后急剧下降再缓慢下降的趋势；3）羊乳中 AFM1的峰值出现在饲喂AFB1后4～8 h；4）羊乳中 AFM1平均含量在56 h 时为0.39μg/kg,低于我国限量值（0.5μg/kg）,到120 h平均含量为0.02μg/kg,低于欧盟限量值（0.05μg/kg）；5）各时间点AFB1转化为AFM1的最大平均转化率为0.19%,出现在4 h；6）饲喂AFB1后24 h内的AFM1平均转化率之和占AFM1总转化率的81%。结果提示,AFM1在奶山羊乳中的排出时间主要集中在采食AFB1后的24 h内。

我国市售液态纯牛奶黄曲霉毒素M_1含量调查分析

本研究采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了采集自我国29个省、市、自治区以当地所产原料奶为原料生产的不同品牌市售超高温灭菌液态全脂纯牛奶(UHT奶)及巴氏灭菌液态全脂纯牛奶(巴氏奶)共计112种样本的黄曲霉毒素M1含量。结果表明:(1)112种牛奶样本的黄曲霉毒素M1含量介于0～130.32 ng/kg之间,均低于GB 2761-2005规定的≤500ng/kg的最高限量和NY/T657-2007、NY 5140-2005中规定的≤200ng/kg的最高限量,说明我国市售液态纯牛奶黄曲霉毒素M1含量安全;(2)我国液态纯牛奶黄曲霉毒素M1含量呈明显的地域性分布,南方明显高于北方。

短小芽孢杆菌漆酶基因的克隆表达及重组漆酶降解黄曲霉毒素M_1研究

为明确短小芽孢杆菌Cot A漆酶的酶学性质,探究其在黄曲霉毒素M_1降解中的应用潜力。经分析,短小芽孢杆菌E-1-1-1中cotA基因全长1 486 bp,编码495个氨基酸,无信号肽序列,分子质量约为58 kDa。该重组漆酶最适反应温度为40℃,最适pH 4.0;K_m为3.01 mmol/L,V_(max)为0.795 mmol/(L·min);金属离子和化学试剂会对酶活力造成不同程度影响,K^+、Na^+、乙醇和十二烷基硫酸钠对该酶有明显的抑制作用,抑制率分别为31.0%、13.6%、64.5%和100%,而Mn^(2+)和Zn^(2+)则表现出明显的促进作用,酶活力分别提高了33.0%和23.9%;该酶与牛奶中的黄曲霉毒素M_1反应72 h后,黄曲霉毒素M_1降解率为54.3%,毒性降低9.1%。结果表明,短小芽孢杆菌CotA漆酶作为黄曲霉毒素M_1降解酶具有巨大的应用潜力。

利用荧光免疫层析卡测定黄曲霉毒素M1的研究

将量子点与抗黄曲霉毒素M1(AFM1)的单克隆抗体偶联,以AFM1-BSA偶联物包被于NC膜作为检测线,山羊抗鼠二抗包被于NC膜上作为质控线,构建了直接竞争检测AFM1的荧光定量免疫层析检测卡体系,在0.156μg/L^1.25μg/L范围内能够准确定量黄曲霉毒素B1,灵敏度达到0.156μg/L。

侧向层析试纸条现场检测牛奶中黄曲霉毒素M1

文章研究了一种可用于现场快速检测牛奶中黄曲霉毒素M1(aflatoxin M1,AFM1)的方法,经测试该方法不需要任何的样品前处理,测试结果不受牛奶基质的影响。该实验分别在标准样品及牛奶样品中建立了线性方程,显示线性良好。测试结果表明AFM1快速检测试纸条的检测限为0.05μg/L,检测时间为10 min。该方法准确可靠,使用简单快捷,可用于大量样品的现场检测。