RT-PCR/Southern杂交方法检测肝癌患者外周血AFP mRNA

目的 寻找一种敏感的方法以检外外周血中的肝癌细胞。方法 分离原发性肝癌患者以及肝硬化、急慢性肝炎、肝转移癌、肝脏良性肿瘤患者和健康志愿者的外周血单个核细胞 ,提取单个核细胞的总RAN ,进行RT -PCR/Southern杂交检测AFPmRNA。结果 原发性肝癌患者外周血AFPmRAN的检出率为 41.4% ,其检出率与肿瘤大小以及TNM分期有关 ,对照组均为阴性。结论 肝癌患者外周血中的AFPmRNA可以作为肝癌细胞的血液微小转移的标志物。

Role of AFP mRNA expression in peripheral blood as a predictor for postsurgical recurrence of hepatocellular carcinoma: A systematic review and meta-analysis

AIM:To identify the role of alpha-fetoprotein (AFP) mRNA expression in peripheral blood one week after surgery as a predictor for recurrence of hepatocellular carcinoma (HCC). METHODS: Published studies fulfilling the selection criteria were identified by searching several databases online. After a methodology assessment using a quality scale designed by European Lung Cancer Working Party, data in each research were aggregated by means of meta-analysis. RESULTS: Altogether 368 cases were included in the 9 selected studies, which fulfilled the selection criteria. The quality scores ranged from 35% to 84% with a median score of 55%. The 'design' subscore had the lowest median value (38%). By aggregating the data, a high x2 value (77.576) was presented. The fail-safe number was 136 and 64 for P= 0.05 and 0.01, respectively. CONCLUSION: AFP mRNA expression in peripheral blood 1 wk after surgery correlated with the recurrence of HCC and was a good predictor for tumor recurrence.

联合检测外周血AFP mRNA、h-TERT mRNA对肝细胞肝癌的诊断价值

目的探讨肝细胞肝癌患者外周血AFP mRNA、h-TERT mRNA表达对肝细胞肝癌的诊断价值。方法应用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量检测60例肝细胞肝癌患者外周血AFP mRNA、h-TERT mRNA的表达量,并与对照组进行比较。结果肝细胞肝癌患者外周血中的AFP mRNAh、-TERT mRNA表达量比对照组增高,差异有统计学意义(P<0.01)。它们的阳性率分别达到76.7%、83.3%,和对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);联合两个指标进行检测,敏感度提高到92.6%,同时其特异度为97.2%,是诊断肝细胞肝癌的良好肿瘤标志物。其表达结果与肿瘤包膜是否完整、有无肝内浸润和(或)转移明显相关(P<0.05);而与肝癌组织的分化程度、外周血AFP的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论在外周血中定量检测AFP mRNA、h-TERT mRNA表达量可以作为肝细胞肝癌的诊断指标,能够早期发现肿瘤,甚至可以发现其他检测方法尚不能发现的小肝癌,联合检测的意义更为明显。

基因重组构建AFP mRNA的real time RT-PCR标准定量模板

目的 :构建AFPmRNA的realtimeRT PCR标准定量模板。方法 :提取肝瘤细胞株BEL740 2细胞总RNA ,进行RT PCR扩增并纯化AFP基因片段 ,与PMD 1 8T载体连接构建重组质粒。结果 :重组质粒的阳性克隆效率为81 .8% ,经酶切鉴定 ,目的基因片段已插入PMD 1 8T载体内。结论 :成功构建了AFPmRNA的标准定量模板 ,可应用于该基因的realtimeRT

高强度聚焦超声治疗对肝癌患者外周血AFP mRNA的影响

目的 探讨高强度聚焦超声治疗对肝癌细胞血道播散的影响。方法 应用Nested RT PCR技术检测19例患者高强度聚焦超声治疗前、后外周血AFPmRNA的表达 ,观察其对肝癌细胞血道播散的影响。结果 ①高强度聚焦超声治疗前 ,19例肝癌患者外周血检出AFPmRNA表达者 11例 ( 5 7.9% ) ,良性疾病对照组均未检出。治疗前AFPmRNA表达阳性率与血清AFP水平、肿瘤直径、门静脉癌栓、远处转移等临床参数明显相关 (P<0 .0 5 )。②余 8例治疗前AFPmRNA表达阴性者 ,有 2例于术后即刻转为阳性 ,其中 1例于 72h后又复转为阴性 ;19例患者于治疗后 1周时其AFPmRNA表达阳性率 ( 31.6 % )低于治疗前 ,但差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。③治疗后 1周时 ,肿瘤直径≤8cm者AFPmRNA表达阳性率低于直径>8cm者 (P<0 .0 5 )。结论 高强度聚焦超声治疗可能会降低肝癌的血道播散 ,特别是对于肿瘤直径 ≤8cm的肝癌患者 ,疗效较好。

希罗达对人肝癌组织AFP mRNA表达影响的实验研究

目的 探讨希罗达 (Xeloda)对人肝癌组织AFPmRNA表达的影响。方法 抽提所收集的希罗达治疗组及对照组肝癌组织标本总RNA(共 4 1例 ) ,采用逆转录巢式聚合酶链反应 (RT nestedPCR)技术检测希罗达治疗组及对照组AFPmRNA的表达情况。结果 以RT nestedPCR扩增的AFP基因片段为 10 1bp ,与原设计一致。在希罗达治疗组中 ,2 1例肝癌组织标本中有 12例AFPmRNA呈阳性表达 ,阳性率为 5 7.14 % ;在对照组中 ,2 0例肝癌组织标本中有 18例AFPmRNA呈阳性表达 ,阳性率为 90 .0 0 % ,两者间差异有显著性意义 (P<0 .0 5 )。术后 4周 ,希罗达治疗组血清AFP浓度为 ( 2 3.2± 12 .8) μg/L ,明显低于对照组的 ( 39.6± 2 4 .3) μg/L(P<0 .0 5 ) ,而两者术前血清AFP浓度差异无显著性意义。结论 希罗达能有效抑制人肝癌组织AFPmRNA的表达 ,并降低其表达产物血清AFP浓度。

原发性肝癌患者外周血AFP mRNA和MAGE-1 mRNA水平的联合检测与术后复发转移的关系

目的寻找一种敏感的用于早期发现原发性肝癌患者术后复发与转移的检测方法。方法应用巢式逆转录聚合酶链反应(nested RT-PCR)分别在术前、术后1周和术后两个月检测85例行根治性切除的原发性肝癌患者外周血中MAGE-1 mRNA和AFP mRNA的表达。结果外周血中MAGE-1 mRNA和(或)AFP mRNA的阳性率与肿瘤的病理分期呈正相关:肿瘤病期越晚,外周血中微转移灶的检出率越高(P<0.01)。1年的随访中,有23例患者出现复发,MAGE-1和(或)AFP mRNA的阳性率为78.3%(18/23),而62例无复发患者阳性率为46.8%(29/62),二者比较差异有显著性(P<0.01)。复发患者中,15例外周血中MAGE-1 mRNA和(或)AFP mRNA持续阳性,5例术前阴性者分别于术后5个月及8个月转为阳性,另外3例术前、术后均保持阴性。经术后1年随访,无肿瘤复发的62例患者中有24例MAGE-1 mRNA和(或)AFP mRNA由术前阳性转为术后阴性。AFP mRNA阳性率与血浆AFP水平呈正相关(P<0.01),MAGE-1 mRNA阳性率与血浆AFP水平无相关性(P>0.05)。外周血AFP mRNA和MAGE-1 mRNA阳性率与肿瘤直径均无相关性(P>0.05)。结论联合检测外周血MAGE-1和AFP mRNA的表达是早期发现肝癌术后复发、评估预后的一项敏感可信的指标。

平调饮对原发性肝癌AFP mRNA、GPC-3 mRNA影响的研究

目的探讨平调饮对原发性肝癌患者AFP mRNA、GPC-3 mRNA表达的影响。方法抽取60例肝癌患者的抗凝血液,配对法随机分为试验组和对照组各30例。采用Tr-Izol一步法提取总RNA,用逆转录巢式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术检测治疗前后试验组及对照组患者AFP mRNA、GPC-3 mRNA的表达情况。结果治疗后试验组及对照组AFP mRNA、GPC-3 mRNA表达均显著下降,在降低AFP mRNA表达方面试验组与对照组无显著性差异,降低GPC-3 mRNA表达方面试验组明显优于对照组(P<0.05)。结论平调饮能有效抑制人血液中AFP mRNA、GPC-3 mRNA的高表达,在降低GPC-3 mRNA表达方面效果优于华蟾素。其治疗原发性肝癌机制与临床应用价值值得进一步研究。

围手术期检测肝细胞癌病人外周血AFP mRNA的临床意义

目的 检测围手术期肝细胞癌病人外周血AFPmRNA ,通过随访评估其预后价值。方法 通过巢式RT PCR的方法 ,在围手术期检测了 4 5例肝细胞癌病人外周血中AFPmRNA的表达 ,并进行了 1～ 2 0个月不等的随访。结果 在 4 5例肝细胞癌病人外周血中 ,AFPmRNA的检出率分别是术前 5 1.1% ,术后 7d 2 4 .4 % ,术后 2 8d 2 2 .2 %。多因素统计分析提示 ,术后 2 8d外周血检出AFPmRNA是提示病人复发的独立预后因素。结论 采用巢式RT PCR的方法检测肝细胞癌病人术后 2

荧光定量RT-PCR检测AFP mRNA基因表达方法的建立

目的 建立荧光定量RT PCR检测检测AFPmRNA基因表达的方法。方法 提取肝癌细胞株HepG2 的总RNA ,进行RT PCR扩增AFPmRNA特异性片段 ,纯化PCR产物并与pMD 18 T载体连接 ,构建重组质粒。结果 重组的质粒经酶切和测序鉴定 ,目的片段已插入 pMD 18 T载体内。 结论 成功建立荧光定量RT PCR检测AFPmRNA基因表达的方法。

AFP mRNA检验对胃癌患者术后肿瘤复发转移及预后的预测价值

目的 探讨胃癌患者术前外周血甲胎蛋白信使核糖核酸（AFP mRNA）检验对术后复发转移及预后的预测价值。方法 选取2009年1月至2012年6月我院收治的胃癌手术患者100例,所有患者术前1 d取外周静脉血采用反转录·聚合酶链反应（RT-PCR）检测AFP mRNA,按照检测结果分为AFP mRNA阴性组（n=58）和AFP mRNA阳性组（n=42）。术后随访3年,观察并对比两组的术后1、2、3年复发转移率。采用Kaplan-Meier法计算两的总体生存率（OS）和无病生存率（DFS）,两组间比较Log-rank法。采用COX回归模型分析AFP mRNA阳性是否为胃癌手术患者预后的独立影响因素。结果 AFP mRNA阳性组术后1、2、3年肿瘤复发率分别为57.1%（24/42）、76.2%（32/42）、100.0%（42/42）;AFP mRNA阴性组分别为20.7%（12/58）、41.4%（24/58）、69.0%（40/58）,AFP mRNA阳性组术后3年有14.3%（6/42）发生肺转移,AFP mRNA阴性组术后3年无远处转移,AFP mRNA阳性组术后1、2、3年复发率和转移率均明显高于AFP mRNA阴性组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;AFP mRNA阳性组术后1、2、3年OS分别为（90.1%、31.6%、10.2%）;1、2、3年DFS分别为（72.3%、22.1%、5.4%）;AFP mRNA阴性组分别为（100.0%、72.4%、25.0%）和（88.5%、52.5%、13.5%）;AFP mRNA阴性组术后1、2、3年OS和DFS均明显高于AFP mRNA阳性组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。COX回归分析结果显示：AFP mRNA阳性是胃癌手术患者预后的独立影响因素（OR=3.294,95%CI 1.895∽6.423,P=0.001）。结论 术前外周血AFP mRNA阳性的胃癌患者术后更易发生复发转移,预后相对较差。

肝癌患者手术后外周血AFP mRNA的检测及其与术后复发的关系

目的探讨肝癌患者手术后外周血AFP mRNA的检测及其与术后复发的关系。方法原发性肝癌手术治疗患者29例，对照组为15例非原发性肝癌但须行肝部分切除手术者。分离术后第1，7和14天外周血单个核细胞，提取单个核细胞的总RNA，进行RT—PCR和Southem杂交，检测AFP mRNA，并对肝癌患者进行36个月的随访。结果全组有18例原发性肝癌患者复发。术后3次检测外周血AFP mRNA不全阴性者17例，其中14例复发，复发率为82．4％；3次检测均为阴性者12例，有4例复发，复发率为33．3％，差异有统计学意义（P＜0．05）。对照组手术后外周血AFP mRNA检测均为阴性。结论原发性肝癌患者手术后外周血AFP mRNA的检测可以预测肝癌的复发情况。

肝癌病人外周血及骨髓AFP mRNA的检测及意义

目的 通过检测AFPmRNA在肝细胞性肝癌 (hepatocellularcarcinoma ,HCC)病人外周血和骨髓中的表达 ,探讨AFPmRNA作为HCC微转移指标的可能性。方法 建立敏感的巢式逆转录聚合酶链反应体系 (Nested RT PCR) ,检测 71例HCC、36例肝硬化、9例肝血管瘤、11例肝转移瘤、30例正常对照外周血AFPmRNA和 19例HCC、15例血液病骨髓AFPmRNA。结果 71例HCC外周血中 38例AFPmRNA表达阳性 (5 3 5 %) ,肝硬化、肝血管瘤、肝转移瘤和正常对照均为阴性。HCC外周血AFPmRNA检出率与血清AFP值无明显相关 (P >0 0 5 ) ,而与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝内转移、肝外转移等临床参数有明显相关 (P <0 0 5 )。 19例HCC骨髓中 9例AFPmRNA表达阳性 (4 7 4 %) ,15例血液病为阴性。骨髓AFPmRNA检出率与血清AFP值、肝内转移无明显相关 (P>0 0 5 ) ,与肿瘤大小、门静脉癌栓、肝外转移明显相关 (P <0 0 5 )。外周血和骨髓AFPmRNA的表达呈一致性 (P <0 0 5 )。结论 血循环AFPmRNA可作为HCC微转移的早期检测指标。HCC病人外周血和骨髓AFPmRNA的表达与复发转移显著相关 ,且HCC病人外周血和骨髓AFPmRNA的表达呈一致性 ,联合检测有助于提高结论的可靠性。

HS-GGT和AFP-mRNA联合分析在肝癌诊断中的临床价值

目的 探讨肝癌特异性γ 谷氨酰转移酶 (HS GGT)和AFP mRNA联合分析在肝癌诊断中的临床价值。方法 从肝癌患者外周血有核细胞中提取总RNA ,以逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)扩增分析AFP mMNA ,同时定量分析患者血HS GGT水平 ,比较它们在肝癌诊断中的临床价值。结果 所设计RT PCR扩增AFP基因片段大小为 15 9bp ,肝癌患者外周血AFP mRNA阳性率为60 3 % ,显著高于急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、肝外肿瘤及正常对照组 (P <0 0 1)。另外 ,AFP mRNA阳性率 ,在AFP浓度低于 5 0ng/ml肝癌组中为 5 7 1% ,在伴肝外转移的肝癌组中全数阳性。AFP mRNA阳性与肿瘤大小间无明显相关性 ,与HS GGT联合分析诊断肝癌的总阳性率达 93 6% 结论 HS GGT定量和外周血AFP mRNA分析有助于肝癌诊断。

荧光定量检测肝癌、癌旁组织及外周血AFP mRNA

目的 探讨肝癌、癌旁组织及外周血AFPmRNA的表达意义。方法 应用荧光定量聚合酶链反应 (FQ -PCR)定量检测 30例原发性肝癌术前外周血、肝癌组织、癌旁组织AFPmRNA。结果 肝癌组织AFPmRNA的基因拷贝数与组织的分化程度、有无肝内浸润和 (或 )转移及血清AFP明显相关 ;而与外周血的AFPmRNA的表达相关无显著性 ;肝癌组织与癌旁组织AFPmRNA的表达量差异有显著性。结论 定量检测AFPmRNA表达情况可能判断肝癌组织的分化程度及早期诊断微小肝癌、肝癌的复发和转移 ,并指导治疗 ,判断预后。

AFP、APF-L3、GP73、AFP-mRNA联合检测在肝细胞癌诊断中的应用价值

目的探讨甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体(AFP-L3)、高尔基体蛋白(GP73)及AFP-mR-NA联合检测在HCC诊断中的价值。方法收集175例血清、其中肝细胞癌患者73例(HCC组)、肝硬化患者41例(肝硬化组)、慢乙肝患者36例(慢性肝炎组)、正常人25例(正常人组),采用酶联免疫法检测GP73,用化学发光法检测AFP,用亲和吸附离心法检测AFP-L3,采用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测患者AFP-mRNA外周血的表达。结果 AFP、AFP-L3、GP73及AFP-mRNA在HCC组的含量与肝硬化组和正常组比较差异有统计学意义(P<0.01),通过ROC曲线评价,AFP、AFP-L3、GP73及AFP-mRNA的曲线下面积分别为0.691、0.859、0.816、0.762,敏感度分别为54.79%、76.71%、80.82%、53.42%,特异度分别为79.41%、95.10%、82.35%、99.02%,四者联合检测的ROC曲线下面积为0.958,联合检测的敏感度明显提高达95.8%,特异度为95.0%。结论 AFP、AFP-L3、GP73及AFP-mRNA四者联合检测可显著提高肝细胞癌诊断的灵敏度和特异度。优于AFP、AFP-L3、GP73和AFP-mRNA的单项检测。

AFP mRNA在监测肝癌转移复发上的研究现况

手术切除是目前治疗肝癌的最佳途径，但术后肿瘤的转移复发严重制约了手术的疗效。肝癌的转移和复发不但严重威胁着人们的健康，而且给患者家庭以及社会都带来了沉重的负担。当前公认肝癌的诊断标志物为AFP，但其特异性不高，且AFP的生物学特性使其不能作为监测肝癌转移复发的标志物。随着基因技术的发展，人们发现AFP的前体AFPmRNA可作为监测肝癌转移复发的标志物，本文就此作一综述。

肝动脉化疗栓塞对肝癌患者外周血AFP mRNA表达水平的影响

目的 探讨肝动脉化疗栓塞对肝癌患者对外周血AFPmRNA表达水平的影响。方法采用实时RT PCR技术 ,定量检测 2 4例肝细胞癌患者肝动脉化疗栓塞前后外周血AFPmRNA的表达水平。结果 肝癌患者肝动脉化疗栓塞前外周血AFPmRNA平均表达水平为 (1330 74 6± 2 716 3 7)拷贝 μgRNA ,肝动脉化疗栓塞后 2 4h、1月、2月平均表达水平分别为 (2 0 76 0± 4 2 3 8)、(1774 5±36 2 2 )和 (2 36 5 0 4± 4 82 7 6 )拷贝 μgRNA。 结论 肝动脉化疗栓塞可显著降低肝癌患者外周血AFPmRNA表达水平 ,AFPmRNA可作为评估肝动脉化疗栓塞效果的一个重要指标。

人外周血AFPmRNA的定性检测和原发性肝细胞癌转移的关系

目的 为探讨人外周血ＡＦＰｍ ＲＮＡ 与肝癌转移之间的关系。方法 采用分子生物学反转录—巢式ＰＣＲ 技术，检测了３８ 例不同肝病患者和９ 例非肝病患者外周血中的ＡＦＰｍ ＲＮＡ。结果 其检出结果分别为：对照组０／９ ；肝硬化组２／１１ ；肝癌未发生转移组２／７ ；局部转移组６／１２ ；远处转移组７／８ 。其中良性组与恶性组之间、肝癌无远处转移与远处转移组之间有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ．０１ 及 Ｐ＜ ０ ．０５） 。另外，肝癌患者中，直径＞ ５ ｃｍ 组外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 阳性率明显高于直径＜ ５ｃｍ 组（ Ｐ＜ ０ ．０５） 。肝癌患者血清ＡＦＰ＞ ４００ｎｇ／ｍｌ 组外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 阳性率具有明显高于ＡＦＰ＜ ４００ｎｇ／ｍｌ组（Ｐ＜ ０ ．０１） 。肝功能分级与外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 阳性率无关。结论 人外周血中ＡＦＰｍ ＲＮＡ 的检测具有重要的临床指导意义，可用于预测肝癌远处转移。

广西肝癌高发区人群外周血AFP-mRNA检测的初步研究

目的:探讨广西肝癌高发区人群中进行外周血AFP-mRNA检测的价值。方法:应用巢式RT-PCR检测117例当地人员外周血AFP-mRNA。HBsAg阴性者30例,HBsAg阳性及ALT正常者35例,HBsAg阳性及ALT异常者29例,HBsAg阳性及AFP异常者23例。结果:117例的外周血AFP-mRNA检测结果均为阴性。结论:利用巢式RT-PCR方法检测广西肝癌高发区人群外周血AFP-mRNA未能发现早期肝癌患者。