AG1109对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用

背景与目的:蛋白激酶CK2是一种高度进化保守性的丝/苏氨酸激酶,它的活性在人的多种癌症是上调的。CK2可作为一种癌基因起作用,它的靶向抑制可用于肿瘤的治疗。为了寻找特异性CK2抑制剂,本文观察Tyrphostin中的AG1109对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用,以探讨其酶动力学机制。方法:利用基因工程克隆、表达和纯化而获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的犤γ-32P犦ATP或犤γ-32P犦GTP的犤32P犦放射活度来检测。结果:重组人CK2是一种Ca2+、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致。AG1109对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,其IC50为9.7μmol/L,抑制作用稍大于已知的CK2抑制剂5,6-二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB)和N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3)。AG1109对重组人CK2的动力学研究表明,它与GTP呈以竞争性为主的混合型抑制作用,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论:AG1109是一种很强的重组人CK2抑制剂。重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。

三种Tyrphostin对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响

目的 :观察三种 Tyrphostins AG110 9、AG5 5 5和 AG1394对重组人蛋白激酶 CK2全酶的直接作用。方法 :利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶 CK2α和β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组 CK2全酶 ,在不同条件下测定 CK2的活性。 CK2活性通过测定转移到 CK2底物上的 [γ-3 2 P] ATP或 [γ-3 2 P] GTP的 [3 2 P]放射活度来检测。结果 :重组人 CK2是一种 Ca2 +、c AMP和 c GMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然 CK2的性质一致。 AG110 9对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用 ,IC50 为 9.7μmol/L ,抑制作用稍大于已知 CK2抑制剂 DRB和 A3。 AG5 5 5对重组人 CK2全酶具有一定的抑制作用 ,而 AG1394则对人 CK2全酶基本无影响。 AG110 9对重组人 CK2的动力学研究表明 :它与 GTP呈现以竞争性为主的混合型抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论 :AG110 9不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶 CK2的抑制剂。重组人蛋白激酶 CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的 CK2抑制剂的分子靶点。