AG825对乳腺癌细胞的辐射增敏作用

目的:通过体外实验观察酪氨酸蛋白激酶抑制剂AG825对人类表皮生长因子受体2(ERBB-2)高表达乳腺癌细胞的生长抑制作用和辐射增敏作用,并从DNA双链断裂(Double strand break,DSB)损伤修复的角度初步探讨AG825辐射增敏机制。方法:首先通过MTT比色法观察了不同浓度AG825对ERBB-2高表达乳腺癌细胞系MDA-MB-453生长抑制作用。然后将细胞设为空白对照组,单纯放射组,AG825预处理组。通过克隆形成实验观察AG825预处理组和单纯辐射组乳腺癌细胞辐射后生存分数(Survivial fraction,SF)的差异。并且通过单细胞中性凝胶电泳分析了AG825预处理对辐射诱导的DSB的影响。同时用免疫印记法分析AG825预处理后MDA-MB-453细胞在辐射后不同时间DSB修复的关键激酶DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA dependent protein kinase catalytic sub-unit,DNA-PKcs)蛋白的表达情况。结果:MTT比色法显示AG825对MDA-MB-453生长抑制作用随AG825浓度增高而增加。辐射后单纯放射组MDA-MB-453细胞生存分数较空白对照组明显下降。AG825预处理组辐射后生存分数较单纯放射组进一步下降,同时DSB较单纯放射组增加。免疫印记显示单纯放射组DNA-PKcs蛋白表达在辐射后较空白对照组增加,而AG825预处理组DNA-PKcs表达较单纯放射组下降。结论:AG825对ERBB2高表达乳腺癌细胞具有生长抑制作用。并且其对ERBB2高表达乳腺癌细胞具有辐射增敏作用,其辐射增敏机制可能与AG825抑制DNA-PKcs蛋白表达而减少辐射后DSB修复有关。但还需进一步的体内实验来评价AG825辐射增敏作用。

ErbB2受体抑制剂AG825对ErbB2非过表达乳腺癌细胞增殖的作用及意义

目的:探讨在ErbB2非过表达乳腺癌细胞中是否存在NRGs/ErbB2这种配体作用方式的信号通路活化,进而研究神经调节因子(Neuregulins’NRGs)对ErbB2受体信号转导活化和细胞增殖生长的作用。方法:以ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7为研究对象,台盼蓝拒染法检测细胞生长曲线;免疫细胞化学法和Western blot法检测细胞中NRG的表达。应用ErbB2受体功能抑制剂AG825处理两株细胞,MTT法检测比较两株细胞的增殖抑制作用,求出AG825作用MDA-MB-231细胞48h的IC50。40μmol/LAG825处理MDA-MB-231细胞48h,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果:与MCF-7细胞比较,MDA-MB-231细胞具有较强的增殖生长能力。NRG在MDA-MB-231细胞内呈显著表达,MCF-7细胞中无NRG的表达。Western blot实验检测MDA-MB-231细胞可见分子量44kD的NRG抗体阳性反应条带。应用ErbB2受体功能抑制剂AG825后,MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用明显,AG825作用MDA-MB-231细胞48h的IC50为56.59μmol/L。40μmol/LAG825处理MDA-MB-231细胞48h后,细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);细胞凋亡增加(P<0.01)。结论:ErbB2非过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231可能通过NRGs自分泌或旁分泌作用方式使ErbB2受体信号转导处于激活状态,这与其高增殖、低凋亡恶性行为有关。

AG825 increases radiosensitivity of breast cancer cell

Objective:To observe the radiosensitivity effect of AG825 on breast cancer cell line with high expression of ERBB2 in vitro.Methods:MTT and clone formation assay were used to observe the effect of AG825 on proliferation and radiosensitivity of breast cancer line MDA-MB-453.After MDA-MB-453 was exposed to AG825 and radiation,comet assay and Western blotting were applied to detect double strand break and expressions DNA-PKcs protein,respectively.Results:AG825 inhibited proliferation rate and decrease survival fraction of MDA-MB-453.After radiation,compared with control group,expression of DNA-PKcs was lower in group with AG825 presence but double strand break was higher.Conclusion:AG825 could increase radiosensitivity of breast cancer cell line MDA-MB-453,and it may associate with its inhibition of radiation induced expression of DNA-PKcs and double strand break repair.

酪氨酸激酶抑制剂AG825对喉癌细胞的影响

目的:通过体外实验检测酪氨酸酶抑制剂AG825对Hep-2细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:通过MTT法观察酪氨酸酶抑制剂AG825在不同浓度及时间时对Hep-2细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测其早期凋亡率;Western blot技术检测细胞内信号传导分子的表达水平的变化。结果:不同浓度的AG825对Hep-2细胞增殖均具有抑制作用,并且随着药物浓度的增大及作用时间的延长,抑制作用逐渐增强。流式细胞学检测显示:AG825促进了Hep-2细胞的早期凋亡,并具有剂量依赖性。Western blot结果显示:AG825作用以后,表皮生长因子下游的信号传导蛋白因子p-Akt和p-MAPK表达水平明显降低,并且随着药物浓度的增大,下游的信号传导因子的表达水平依次下降。结论:酪氨酸激酶抑制剂AG825能有效的抑制Hep-2细胞的生长,并促进细胞的早期凋亡。

水飞蓟素对乳腺癌细胞系的作用及其机制研究

目的 研究水飞蓟素在体外对不同乳腺癌细胞系的作用 ,并进一步探讨其作用机制。方法 MTT实验测定水飞蓟素对乳腺癌细胞系 MCF- 7和 SK- BR- 3的半数抑制浓度 ( IC50 ) ;软琼脂克隆形成试验检测加药后两种细胞在软琼脂内的增殖能力。在此基础上 ,用 Her- 2抑制剂 AG82 5进行干预 ,对水飞蓟素的作用机制进行初步探讨。结果 水飞蓟素对两种乳腺癌细胞有不同程度的抑制作用 ,其中对 MCF- 7细胞的作用较强 ,IC50 ≤ 0 .0 2 %,而对SK- BR- 3的作用较弱。 Her- 2抑制剂 AG82 5可增加 SK- BR- 3细胞对药物的敏感性 ,抑制了水飞蓟素作用后该细胞在软琼脂中集落的形成。结论 水飞蓟素在体外对 MCF- 7细胞具有明显的抑制作用 ,而 AG82 5可增强 SK- BR-3细胞对药物的敏感性。因此 ,SK- BR- 3细胞中 Her- 2的高表达可能是该细胞对水飞蓟素敏感性差的原因 ,而水飞蓟素也可能通过 Her- 2调节某个或某几个下游分子起作用。