鸭肝炎Ⅰ型琼脂扩散试验的研究

本试验用不同的鸭肝炎病料 ,通过氯仿去脂和反透析法进行病毒的提纯浓缩 ,研究鸭肝炎的琼脂扩散试验。结果显示用抗原检测抗体或用抗体 (血清 )检测病毒病原 ,均可达到 80 %的阳性检出率。试验中还发现 ,试验最佳的凝胶配方为 p H为 7.2 ,w(Na Cl)为 8%和琼脂糖的质量分数为 1 % ,病雏鸭肝浓缩抗原最为理想。

禽脑脊髓炎琼扩抗原的研制与应用

利用禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）ＶａｎＲｏｅｋｅｌ株和山东野外分离株，分别脑内接种１日龄ＳＰＦ雏鸡，在隔离器中饲养，取典型发病鸡脑、胃肠和胰腺等制备琼扩抗原。通过特异性检查、效价测定、与进口抗原及血清对比、田间试验等证实，该方法所制备的抗原性能稳定、效价高、特异性强，可广泛用于ＡＥ抗体的普查。

“全胚双氟碳法”制备禽脑脊髓炎琼扩抗原的研究

用禽脑脊髓炎病毒 (AEV) Van Rockel毒株接种 6日龄 SPF鸡胚 ,感染 11d后 ,分别收集鸡胚、绒毛尿囊膜及尿囊液 ,鸡胚剔除羽毛、眼球、爪和喙后与绒毛尿囊膜一起 ,制成匀浆 ,反复冻融 3次。通过 2次氟碳 (三氯三氟乙烷 )从全胚匀浆中萃取制备 AE琼扩抗原 (AGP- Ag)。用进口标准 AE AGP试剂进行标化 ,结果发现 :制备的 AE AGP- Ag与标准阳性血清之间有清晰、致密的沉淀线 ,并与标准 AE AGP- Ag的沉淀线完全吻合 ,表明两者的沉淀反应一致 ,从而建立了 AE AGP- Ag制备新方法——“全胚双氟碳法”。其制备 AEAGP- Ag有如下特点 :1产量高 ,平均每 3个 SPF鸡胚可获得 1m L AE AGP- Ag;2特异 ,与类症阳性血清无交叉反应 ;3敏感 ,AGP试验中毋需重复加样 ,普通琼脂板即可出线 ;4稳定性好 ,保存期长 ;5与标准 AEAGP- Ag阳性检出符合率均达 10 0 %。本研究表明用“全胚双氟碳法”制备的 AEAGP- Ag达到了进口标准 AEAGP- Ag质量 ,可用于 SPF鸡 AE抗体的监测 ,且生产成本低 ,也可用于商品鸡

HVT免疫鸡羽毛根中病毒抗原的检测

１日龄非免疫鸡，ＨＶＴ常规剂量免疫后，于第３周起，每周采集一次羽毛根，分别作常规ＭＤＶ琼扩抗原的检测，结果显示：在免疫后第３～８周检测，均未观察到特异性ＡＧＰ沉淀线；若取较多数量的富含羽髓的羽毛根，经２ｍｌ磷酸缓冲液（ＰＢＳ）浸提、浓缩胶浓缩约４０倍后，再作上述检测，则分别于免疫接种后的第３～５周都有特异性的ＡＧＰ沉淀线出现，且与感染细胞上清中浓缩的ＨＶＴ及ＭＤＶ琼扩抗原所形成的沉淀线基本吻合，而第６周检测时，仅与ＨＶＴ阳性血清呈微弱阳性，用同样方法对免疫后第６周后的检测结果均表明为阴性。由此推断，免疫鸡羽毛根中含有较低水平的、并与致病性ＭＤＶ抗原具有交叉反应性的ＨＶＴ琼扩抗原，但采用常规ＡＧＰ法不能直接检测到。

改良的鸡IBDV琼扩抗原及高免血清的制备法

使用适应鸡胚成纤维细胞的IBDV血清Ⅰ型来制备IBD琼扩抗原 .将此细胞毒经PEG沉淀 ,取沉淀透析、灭活即为IBD琼扩抗原 .经琼扩试验和对流免疫电泳试验 ,表明所制抗原和高免血清的特异性、效价、敏感性及 2 0份待检鸡血清的检测结果与标准抗原和标准血清的基本一致 .且此制备方法简单、快速、安全 。

禽呼肠病毒琼扩抗原和血清的制备

以禽呼肠病毒S1133毒株尿囊腔接种10日龄无特定病原体(SPF)鸡胚,无菌收集24 h^120 h的死胚尿囊液,加1 mL/L的甲醛灭活,浓缩制得琼扩抗原;用该抗原制成灭活苗两次免疫SPF鸡,无菌采血分离制备阳性血清;选用SPF鸡无菌采血分离制备阴性血清。经过效价测定制备16单位琼扩抗原,8单位阳性血清;取免后的SPF鸡血样4个20~2-5稀释分别与1单位~8单位琼扩抗原做琼扩试验,确定了应该用4单位或8单位琼扩抗原做工作抗原;并以血清中和试验为参照证明琼扩试验在血清抗体监测中的可行性。本研究成功制备了禽呼肠病毒琼扩抗原与血清,为用琼扩试验定量检测禽呼肠病毒感染禽和疫苗免疫禽的抗体奠定了基础。

ELISA双抗夹心法检测IBDV抗原

采用IBD细胞毒油佐剂灭活苗多次免疫易感鸡，制取高免血清效价1：64，提纯IgG抗体并用HRP标记同一IgG抗体，建立一种检测IBDV的敏感性方法──ELISA双抗夹心法。实验用盐析法和离子交换层析法纯化IgG。酶标抗体E／IgGmol比1：43。方阵实验确定最佳反应条件；包被抗体50ug／ml，E－Ab2稀释度为1：120，Ag灵敏度为1：3200；取代反应，抗原阻断反应，无关病毒对照试验均为阴性，并与AGP法对照实验．灵敏度高200倍。以上结果表明：本实验敏感性高，特异性强，简单快速判定客观，对临床诊断IBD流行病有很好的使用价值和推广价值。