国内活禽市场新型环形病毒AGV2的发现

为了解国内鸡群是否存在新型环形病毒AGV2,研究对来自扬州的一个活禽市场的20份鸡羽囊样品进行了AGV2的PCR检测。通过对鸡羽囊DNA提取、PCR扩增以及序列分析,在20份样品中检测到4份阳性样品。测序比对发现,本研究检测到的国内AGV2序列与NCBI中发表的AGV2的同源性为95.7%~99.4%。并对一份阳性样品的PCR产物进行了TA克隆,测定了该PCR的灵敏度为2.7个拷贝数。这一结果不仅首次证明国内活禽市场存在AGV2,而且为进一步开展国内鸡群AGV2的分子流行病学及其致病性等研究奠定良好的基础。

新型环形病毒AGVAGV2衣壳蛋白VPVP1的原核表达

为建立AGV2血清学检测方法,利用p GEX-6P-1载体,对AGV2的衣壳蛋白VP1基因进行分段GST融合表达,成功构建了4个VP1分段GST融合表达载体,分别命名为VP1_1-462、VP1_463-924、VP1_925-1383以及VP1_735-1089。经IPTG诱导、SDS-PAGE以及Western blot分析发现,VP1_1-462以及VP1_925-1383的表达产物主要以包涵体形式表达,而VP1_463-924以及VP1_735-1089的表达产物具有可溶性,且VP1_925-1383的表达量最高。这些AGV2 VP1分段GST融合表达产物的获得为建立用于AGV2流行病学调查的血清学检测方法奠定理论基础。

新型环形病毒AGV2的VP3基因的克隆表达及多抗制备

新型环形病毒AGV2最早于2011年报道。为建立AGV2血清学诊断方法,并探究其VP 3基因功能,本研究对AGV2的VP3基因进行了克隆、表达及多抗制备。通过将AGV2 VP3基因克隆进pGEX-6p-1原核表达载体,获得了可溶性GST-VP3融合表达产物,并利用纯化的GST-VP3蛋白制备了小鼠抗GST-VP3多克隆抗体。同时构建获得了pcDNA3.1-VP3以及EGFP-VP3两个AGV2 VP 3基因真核表达载体。间接免疫荧光试验以及EGFP观察发现,AGV2的VP3蛋白及其EGFP融合蛋白EGFP-VP3在HCT116肿瘤细胞中的表达集中于细胞核,且呈散在点状分布,类似凋亡小体。这些AGV2 VP3表达载体的构建,表达产物、小鼠多克隆抗体的获得及其在肿瘤细胞中的表达分布,为进一步研制AGV2血清学诊断方法提供了材料,为深入探究AGV2 VP3的生物学功能打下了基础。