富勒烯赖氨酸衍生物对AHH-1细胞防护效应研究

本文研究了富勒烯赖氨酸衍生物C60-Lys对AHH-1细胞的辐射防护作用,并对其防护机理进行了初步研究。发现800mg/LC60-lys能提高辐照后AHH-1细胞存活率,在8Gy照射剂量时,给药组与对照组AHH-1细胞存活率分别为64.6%和41.3%。荧光凋亡实验发现,当C60-lys浓度为1200mg/L时,凋亡率为16.3%,这明显低于单纯辐照组的39.2%。在800mg/LC60-lys和4Gy辐照剂量时,给药时间对细胞存活率有显著影响,辐照前给药,AHH-1细胞平均存活率是85.6%,而辐照后给药则是64.1%。C60-lys降低4Gy辐射引起的AHH-1细胞的G2期阻滞及辐射对AHH-1细胞DNA损伤,尤其是减少8-羟基-2'脱氧鸟嘌呤核苷(8-OHdG)含量。

AHH-1复合剂去除青铜粉状锈及缓蚀性能研究

用自配含AMT的复合剂AHH-1处理带有粉状锈的青铜试片,结果表明,复合剂的除锈和缓蚀效果良好,有望用于青铜文物的保护。

富勒烯赖氨酸衍生物的合成及对AHH-1细胞的辐射防护效应

本研究通过富勒烯与赖氨酸直接反应,合成了一种富勒烯赖氨酸衍生物(C60-Lys),并通过元素分析、红外光谱、1H-NMR、13C-NMR等对其分子结构进行了表征。细胞毒性研究发现C60-Lys对人淋巴母细胞AHH-1的毒性较小,在1200mg/L浓度以下的细胞存活率和未用药对照组相比无明显差异。辐射生物效应研究发现400mg/L以上C60-Lys预处理能显著提高受照细胞的存活率,并降低辐射诱发的凋亡率,其辐射保护效应具有明显的剂量依赖性。说明C60-Lys预处理对受4Gyγ射线照射的AHH-1细胞具有一定的保护作用。

低剂量γ射线对人淋巴母细胞CCNG1基因表达的影响

目的观察低剂量γ射线对人淋巴母细胞（AHH1）细胞周期蛋白G1（CCNG1）基因表达的影响,探讨CCNG1基因用作低剂量范围辐射生物剂量计的可能性。方法采用0、0.1、0.2、0.5、0.8、1.0Gyγ射线照射AHH-1,分别于照射后4、24、48、72、168h提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测AHH-1中CCNG1基因的表达变化,分析该基因表达的时间及剂量效应关系。结果γ射线照射后AHH-1中CCNG1基因表达呈剂量依赖性上调,具有较好的剂量效应关系。时间效应曲线表明,CCNG1基因表达在照射后24h达峰值,之后开始下降,至168h恢复至照射前水平。结论CCNG1基因在低剂量范围（0~1.0Gy）具有较好的剂量效应和时间效应关系,是一种潜在的低剂量电离辐射生物剂量计。

富勒烯衍生物C3对AHH-1细胞电离辐射的防护效应

目的研究富勒烯衍生物C3（以下简称C3）对AHH-1细胞电离辐射的防护效应，探讨该类化合物作为新型辐射防护剂的发展前景。方法通过化学合成制备C3，用台盼兰拒染试验检测C3对AHH-1细胞的毒性作用。在此基础上于AHH-1细胞培养体系中加入不同浓度C3，以不同剂量60^Coγ射线照射细胞，通过台盼兰拒染试验检测C3化合物对细胞的毒性作用，用Annexin—V／PI染色、Facscalibur流式细胞术等，分析C3化合物对γ射线照射细胞增殖活力和细胞凋亡的变化。结果在细胞培养体系中，终浓度范围0～400mg／L的C3对培养的对数生长期AHH-1细胞活力几乎无影响，AHH-1细胞台盼兰拒染率无明显变化（P〉0．05）。C3对1～8Gyγ射线照射的AHH-1细胞具有良好的辐射防护效应，终浓度在10mg／L时即显示其对4Gy60Coγ照射的细胞有保护效应，且随浓度增加而增加；终浓度达200—400mg／L时，照射细胞存活率已接近未照射的正常细胞（P〉0．05），辐射诱导的细胞调亡率和细胞死亡率用药组均显著低于未用药的对照组（P〈0．01）。研究结果还显示，C3提高照射细胞存活率的作用还与给药时间有关，照前24h至照前即刻给药最为有效。结论C3对不同剂量60Coγ射线照射的AHH—1细胞具有较好的电离辐射防护作用，该防护效应与用药浓度有关，C3浓度越高，防护作用越好；且在本实验产生辐射防护作用的浓度范围内，C3对培养的对数生长期AHH-1细胞存活率几乎无影响，提示该类化合物有作为新型辐射防护剂的研究前景。

羧酸富勒烯C3对K562和AHH-1细胞的辐射生物效应研究

目的探讨羧酸富勒烯C3（C3）在辐射防护和辅助放疗方面的应用。方法以不同浓度C3与AHH-1、K562细胞共孵育，用CCK-8法、锥虫蓝试验检测C3对细胞活力和存活率的影响，用Annexin—V／PI染色、流式细胞分析法研究照射后细胞凋亡和细胞周期的变化。结果C3对AHH-1细胞活力几乎无影响（存活率大于95％），但600mg／L的C3使K562细胞存活率明显降低（82％）。100mg／LC3用药照射组与单纯照射组相比，4Gy照射后AHH-1细胞的存活率显著升高（71．3％、90．3％），细胞凋亡率明显下降（26．3％、12．6％）；而受照射24Gy的K562细胞存活率却呈现下降趋势（69．4％、66．1％），不同剂量照射后细胞凋亡率反而增加。细胞周期分析结果显示，C3处理组AHH-1细胞12Gy辐射后G2期阻滞（27．2％）与单纯照射组（40．8％）相比减轻；而K562受照细胞则反而加重。结论C3对AHH-1细胞具有较好的辐射防护作用，而对K562细胞则表现为抑制细胞增殖，促进辐射诱导的细胞凋亡并加重G2期阻滞。

四君子汤对受照小鼠体重及外周血象的影响

采用CCK-8试剂盒检测不同终浓度(0、5、25、50、250和500μg/m L)四君子汤及其单味组份作用48 h对AHH-1细胞的毒性作用,以及不同终浓度(0、0.4、2、10和50μg/m L)四君子汤及其单味组份预处理AHH-1细胞2 h后对经4 Gy60Coγ射线照射的细胞存活的影响。将BALB/c小鼠80只,雌雄各半,随机分为阴性对照组、照射对照组、四君子汤低剂量组(0.75 g/kg)、四君子汤中剂量组(2.25 g/kg)、四君子汤高剂量组(6.75 g/kg),检测各组照后3天和7天的外周血白细胞、红细胞、血红蛋白、血小板数量,以及照前7天至照后7天小鼠体重的变化,研究四君子汤对60Coγ射线照射引起的小鼠体重及外周血象的影响。结果显示,与对照细胞相比,5、25和50μg/m L四君子汤及其单味组份作用于AHH-1细胞48 h对细胞存活无明显影响(p>0.05),但50μg/m L四君子汤可显著提高受照后24 h AHH-1细胞的存活率(p<0.05)。四君子汤中剂量组小鼠外周血白细胞数与照射对照组相比显著升高(p<0.01),并且四君子汤中剂量组能明显减弱受照小鼠外周血血小板数的降低,同时四君子汤可以减轻辐射损伤所致的体重下降。上述研究结果表明,四君子汤对受照射AHH-1细胞具有一定的辐射损伤防护作用;四君子汤通过影响受照射后小鼠造血系统,促进体重恢复,减轻辐射所致损伤。

白藜芦醇衍生物白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇辐射防护作用研究

目的:研究白藜芦醇(resveratrol)衍生物白皮杉醇(piceatannol)和乙酰化白藜芦醇(acetylated resveratrol)对受照射淋巴母细胞AHH-1和小鼠的辐射防护作用。方法:运用CCK-8试剂盒检测不同浓度(0、10、20、50、100和500μmol/L)白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇作用72 h对AHH-1细胞的毒性作用,以及不同终浓度(0、10、20和50μmol/L)白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇预处理AHH-1细胞2 h后对经4 Gy ^(60)Coγ射线照射的细胞存活率的影响。并进一步观察白藜芦醇、白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇对^(60)Coγ射线辐射损伤模型小鼠外周血白细胞和受照后30 d内小鼠平均存活时间的影响。结果:与对照细胞(0μmol/L)相比,10、20和50μmol/L白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇作用AHH-1细胞72 h对细胞存活无明显影响(P>0.05),但可显著提高受照AHH-1细胞的存活率(P<0.05或P<0.01)。受照后24 h,乙酰化白藜芦醇中(100 mg/kg)、高(200 mg/kg)剂量组小鼠外周血白细胞数与照射对照组相比显著升高(P<0.05)。与正常对照组比较,照射对照组小鼠外周血白细胞数和受照30 d内小鼠平均存活时间显著降低(P<0.05);与照射对照组相比,白藜芦醇和乙酰化白藜芦醇高(100 mg/kg)剂量组小鼠受照后30 d内平均存活时间明显延长(P<0.05)。结论:白藜芦醇衍生物白皮杉醇和乙酰化白藜芦醇均对受照射淋巴母细胞AHH-1细胞具有一定的辐射防护作用;乙酰化白藜芦醇对受照射小鼠亦具有显著的辐射防护作用。

红景天中苷及其醇类化合物抗辐射有效活性成分体外筛选研究

目的比较研究红景天中6种苷及醇类化合物红景天苷、异槲皮苷、酪醇、洛塞琳、熊果苷、络塞维的体外抗辐射活性。方法给予人淋巴细胞10 Gy60Coγ射线一次性照射,构建辐射防护模型。以MTS法检测6种苷及醇类化合物对辐射损伤人淋巴细胞增殖的保护作用。结果与正常组比较,4、6、8、10 Gy60Coγ模型组人淋巴细胞存活率显著降低,其中10Gy60Coγ模型组存活率为(55.43±4.69)%。与模型组比较,异槲皮苷(12.5μg.ml-1)、红景天苷(12.5μg.ml-1)、络塞维(12.5μg.ml-1)、洛塞琳(25μg.ml-1)、熊果苷(12.5μg.ml-1)、酪醇(50μg.ml-1)给药组均能够显著提高辐射损伤人淋巴细胞的增殖活性。结论红景天中苷及醇类成分对60Coγ射线照射所致人淋巴细胞损伤具有一定的保护作用,其中浓度为25μg.ml-1的络塞维抗辐射作用最强。

羧酸富勒烯C_3的合成及其保护辐射损伤效应

通过Bingle环加成反应,利用富勒烯与丙二酸二乙酯催化合成羧酸富勒烯C3,经1H-NMR,13C-NMR以及MS-ESI确认其结构和分子量。通过芬顿体系检测了C3清除自由基的能力。利用CCK-8法和Annexin-V/PI染色和流式细胞分析法,分别检测C3对γ射线照射后AHH-1、HIEC细胞存活率,细胞凋亡和细胞周期变化的影响。结果表明,C3具有良好的清除自由基的能力,当芬顿体系中C3终浓度为1000mg/L时,清除效率高达93%左右。对1-12Gyγ射线照射的细胞,C3具有良好的辐射保护作用,表现为照后细胞存活率明显升高,细胞凋亡率显著降低;且对于较高剂量的照射,辐射防护效果较好。说明C3对γ射线照射的细胞具有较好的辐射防护作用,其机理可能主要与其清除自由基的作用有关。

γ射线照射对IER5基因mRNA表达的影响

目的应用实时PCR技术分析^60Coγ射线照射正常人淋巴母细胞（AHH1）、宫颈癌细胞（HeLa）与接种人肿瘤细胞的裸鼠后IER5基因表达的影响。方法对于离体培养的AHH1、HeLa与BALB／c—nu裸鼠，按照不同剂量（0．5、2、4、6、10、15Gy）与照射后不同时间点（2、4、8、12、24h）进行分组进行提取mRNA、反转录与IER5基因表达量测试。结果在相同条件下AHH1对照射比HeLa更灵敏，其表达量的峰值对应的剂量比HeLa的要低。对于AHH1细胞，对2Gy低剂量的照射反应比10Gy的高剂量反应要快，而HeLa细胞，对于2Gy的低剂量与10Gy的高剂量的照射反应没有太大差异，在照射后2h都出现基因表达的最大值。此外，人肝肿瘤的IER5基因对照射比较敏感，而人肺与脑肿瘤的IER5基因不敏感。结论IER5基因有可能成为宫颈癌与肝肿瘤新的辐射损伤生物分子的一个标记物，对肝肿瘤放疗具有潜在的应用价值。

四物汤有效成分配伍组方对电离辐射所致氧化损伤的防护作用

目的观察四物汤有效成分配伍组方对电离辐射所致人淋巴母细胞AHH-1细胞氧化损伤的辐射防护作用，并初步探讨其作用机制。方法4．0Gy 60Coγ射线单次照射AHH-1细胞，造成电离辐射损伤。观察不同浓度的四物汤有效成分配伍组方（果糖、阿魏酸、芍药苷、川芎嗪质量比为9008：53：721：267）对于电离辐射损伤的AHH-1细胞活力、凋亡情况、活性氧（ROS）水平的影响，以及对pGL4-ARE报告基因载体的激活作用。结果四物汤有效成分配伍组方在10mg／L的浓度下抗辐射效果最为显著，可以减缓受照AHH-1细胞活力下降（t=-8．152，P〈0．05），缓解早期细胞凋亡（t=12．777，P〈0．05），降低ROS水平（t=3．465，P〈0．05），诱导报告基因pGIA．ARE荧光表达倍数提高（t=-19．752，P〈0．05）。结论四物汤有效成分配伍组方具有体外抗辐射活性，可能通过激活Nrf2-Keap1—ARE抗氧化通路、降低辐射所致氧化损伤，从而发挥辐射防护作用。

不同君药四君子汤辐射损伤防护作用的比较研究

目的研究不同君药四君子汤对受照人淋巴母细胞AHH-1及小鼠的辐射损伤防护作用,探讨不同君药及不同配比对四君子汤抗辐射活性的影响。方法使用CCK-8试剂盒检测不同终浓度的3种四君子汤作用48 h对AHH-1细胞的毒性作用,以及不同终浓度的四君子汤预处理AHH-1细胞2 h后对经4 Gy^(60)Coγ射线照射的细胞存活率的影响。使用6~8周的BALB/C小鼠120只,用随机数字表法分为阴性对照组、照射对照组以及人参四君子汤(10:9:9:6)组、人参四君子汤(2:2:2:1)组、党参四君子汤(2:2:2:1)组。3.5 Gy^(60)Coγ射线全身单次照射造成小鼠电离辐射损伤模型。照射后3 d和7 d,观察不同君药、不同配比的四君子汤对细胞、辐射损伤模型小鼠的体重、胸腺系数、脾脏系数、微核、脾细胞凋亡等活性指标的影响。结果 250μg/mL的党参四君子汤(2:2:2:1)可显著提高受照AHH-1的存活率(P<0.05);人参四君子汤(2:2:2:1)、党参四君子汤(2:2:2:1)能够有效促进照后3d小鼠体重的恢复(P<0.05);人参四君子汤(10:9:9:6)可显著提高照后7d小鼠的胸腺系数、显著降低照后3d的骨髓嗜多染红细胞微核率及照后3 d、7 d的脾细胞凋亡率。党参四君子汤(2:2:2:1)可显著降低照后3 d、7 d的脾细胞凋亡率及骨髓嗜多染红细胞微核率。人参四君子汤(2:2:2:1)可显著升高照后7d的胸腺、脾脏系数,显著降低照后3 d、7 d的脾细胞凋亡率及骨髓嗜多染红细胞微核率。结论相同配比下,人参作为君药,抗辐射药效优于党参;不同配比下,人参(2:2:2:1)抗辐射药效优于人参(10:9:9:6)。该实验结果验证了四君子汤方中人参作为君药以及药物配比为2:2:2:1的合理性,同时也验证了党参四君子汤及10:9:9:6的药物配比在辐射损伤防治方面也起到一定的作用。

雌二醇衍生物对人淋巴母细胞的辐射防护作用及相关机制

目的探讨雌二醇衍生物（E0703）对人淋巴母细胞（AHH-1）的辐射防护作用及其可能的作用机制。方法细胞分为未经任何处理（N）、3．0Gy、3．0Gy＋E0703（5、20、80和320nmol/L）6个组。Cell CountingKit-8试剂盒检测细胞活力，Annexin V—FITC细胞凋亡试剂盒及PI单染检测细胞凋亡及细胞周期，RT-PCR检测mRNA水平变化，Westernblot检测蛋白水平变化。结果AHH-1细胞受到3．0Gy^60Coγ射线照射以后，细胞活力显著下降，细胞周期明显阻滞，并伴有大量细胞坏死及凋亡。照射前12h给予E0703（5—320nmol/L）可提高受照细胞的活力、缓解细胞周期阻滞，但对细胞坏死、凋亡影响不显著。细胞受到3．0Gy照射以后，细胞周期阻滞相关分子Rb、MDM2水平明显升高，加入E0703以后其水平下调，Rb蛋白的磷酸化水平升高。结论E0703可能通过影响细胞周期和细胞增殖而发挥其辐射防护作用。

γ射线致旁效应细胞脆性组氨酸三联体的表达

目的研究^60Coγ射线照射后人淋巴母细胞（AHH-1）及其旁效应细胞中脆性组氨酸三联体（FHIT）基因的表达情况，探讨FHIT基因在电离辐射旁效应中的作用。方法旁效应细胞模型的制备：分别用不同剂量（0、2和5Gy）^60Coγ射线照射AHH-1细胞后，立即离心，将直接受照细胞与未受照细胞共同培养于Transwell中，此未受照细胞为旁效应1组；另将直接受照细胞培养液转移至未受照细胞培养瓶中形成旁效应2组。于照后0、6、12和24h收集细胞，抽提细胞总RNA及总蛋白，分别应用RT-PCR和Westernblot方法检测FHITmRNA及蛋白表达水平；并在照后即刻和24h收集细胞，应用流式细胞仪检测细胞周期，并应用细胞计数法观察细胞增殖变化。结果对照细胞、直接受照细胞、旁效应细胞中FHIT基因mRNA水平变化不明显，而FHIT蛋白表达在直接受照细胞及旁效应细胞中显著下调（F=102．45．P〈0．001）。细胞周期分析结果显示直接受照细胞及旁效应细胞G2期阻滞明显，且增殖能力明显下降。结论2、5Gy^60Coγ射线照射能导致直接照射AHH-1细胞及其旁效应细胞FHIT蛋白表达明显下调，提示FHIT基因在电离辐射旁效应中发挥一定作用。