大鼠肝干细胞的分离培养

目的 分离大鼠胎肝细胞,观察人肝细胞生长肽(HGP)和小鼠白血病抑制因子(mLIF)对其生长和肝干细胞集落形成的影响。方法 从大鼠胚胎(12日龄)肝中分离肝细胞,采用MTT比色法、~3H-TdR掺入法和碱性磷酸酶(AKP)检测法。结果 人HGP能剂量依赖性地促进胎肝细胞的DNA合成和增殖,500～2000u/ml的mLIF能明显促进肝干细胞集落的生长和维持未分化状态。肝干细胞培养基的组成为:5％FBS(国产或进口),10％国产NCS,0.14mM的β-ME,40ng/ml伴白蛋白,10ng/ml的人bFGF,0.5μg～1.0μg/ml的HGP,1000u/ml mLIF,1％非必需氨基酸的高糖DMEM培养基。AKP染色阳性细胞在上述培养基中传至6代仍生长良好和保持未分化状态。结论 从胎鼠肝中能分离到肝干细胞,人HGP能促进鼠胎肝细胞的生长,而mLIF对促进肝干细胞生长和维持未分化是必要的。

大鼠仔鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养与鉴定

目的分离培养骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)并进行鉴定。方法取周龄大鼠骨髓用percoll分离液分离,DMEM(含20%胎牛血清)培养、传代,碱性磷酸酶和苏丹Ⅳ染色,流式细胞仪测MSCs表面标志CD44和CD45。结果碱性磷酸酶染色和苏丹Ⅳ染色阴性,CD44、CD45表达甚微。结论所分离培养的细胞为未分化的具有较强增殖能力的细胞,可认为是间充质干细胞。