ALDH1A2、MMP2和E-cadherin在结肠癌组织中的表达及相关性

目的:研究结肠癌组织中ALDH1A2、E-cadherin和MMP2的表达及与临床病理特征之间的关系.方法:应用免疫组织化学SP法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blot)检测52例结肠癌及癌旁组织中ALDH1A2、E-cadherin和MMP2蛋白的表达,分析其间的相关性以及与肿瘤临床病理特征之间的关系.结果:免疫组织化学测定显示ALDH1A2在52例结肠癌癌旁组织阳性率为67.31%;E-cadherin在52例结肠癌癌旁阳性率为90.38%;癌旁组织ALDH1A2、E-cadherin的表达率高于癌组织.MMP2在52例结肠癌组织中阳性率占86.54%,高于癌旁组织(P<0.05).逆转录-PCR及免疫印迹技术显示同样结果.ALDH1A2、MMP2及E-cadherin在结肠癌中的表达具有相关性.结论:结肠癌中ALDH1A2、E-cadherin表达低于癌旁组织,MMP2表达高于癌旁组织,ALDH1A2、MMP2及E-cadherin三者密切相关.

绵羊OSBPL11、PAEP、ALDH1A2基因多态性与胸椎数关联分析

为探究OSBPL11、PAEP、ALDH1A2基因多态性与胸椎数之间的关联性,筛选胸椎数相关重要分子标记,本研究利用Sequenom Mass ARRAY?SNP技术检测苏尼特羊和小尾寒羊与胸椎数相关的重要候选基因OSBPL11、PAEP、ALDH1A2的单核苷酸多态性(SNPs)位点,开展群体遗传学分析,并与胸椎数进行关联分析。结果显示,小尾寒羊和苏尼特羊群体中OSBPL11基因g.188064535A>G位点含有AA、AG和GG 3种基因型,PAEP基因g.3541777A>G位点含有AA、AG和GG3种基因型,ALDH1A2基因g.49249275G>A含有GG和AG 2种基因型。OSBPL11基因g.188064535A>G位点中小尾寒羊和苏尼特羊均为低度多态(PIC<0.25);PAEP基因g.3541777A>G位点中小尾寒羊和苏尼特羊均为中度多态(0.25A位点中小尾寒羊和苏尼特羊均为低度多态(PIC<0.25)。小尾寒羊和苏尼特羊3个候选基因的SNPs均处于哈代温伯格平衡状态(P>0.05)。关联分析结果表明,在苏尼特羊中ALDH1A2基因g.49249275G>A位点野生型(GG)的胸椎数显著低于杂合型(AG),其他位点在小尾寒羊和苏尼特羊中与胸椎数均没有显著关系。综上所述,ALDH1A2基因g.49249275G>A位点可作为潜在的绵羊多胸椎数分子标记。本研究结果为提高绵羊胸椎数、改良绵羊生长发育提供了理论基础。

下调miR-221-5p靶向ALDH1A2基因增强鼻咽癌细胞对顺铂的敏感性

目的研究miR-221-5p对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和顺铂敏感性的影响及潜在作用机制。方法以人鼻咽上皮细胞NP69为对照组(NP69组),qRT-PCR和Western blot检测鼻咽癌细胞系SUNE1、HNE1和CNE2中ALDH1A2 mRNA和miR-221-5p的表达,然后在SUNE1细胞中抑制miR-221-5p表达和过表达ALDH1A2确定两者对细胞的影响。MTT法测定SUNE1细胞存活率和对顺铂的敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞中ALDH1A2、CyclinD1、Cleave-caspase-3和MRP1蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-221-5p和ALDH1A2的调控关系。结果与NP69组相比,在鼻咽癌细胞SUNE1、HNE1和CNE2中,miR-221-5p高表达,ALDH1A2低表达;低表达miR-221-5p和高表达ALDH1A2均可抑制鼻咽癌细胞SUNE1增殖,诱导凋亡,增强对顺铂的敏感性;miR-221-5p靶向负调控ALDH1A2的表达;低表达ALDH1A2可部分逆转miR-221-5p低表达对SUNE1细胞增殖、凋亡以及顺铂敏感性的影响。结论下调miR-221-5p可靶向促进ALDH1A2表达增强鼻咽癌SUNE1细胞的顺铂敏感性,抑制癌细胞增殖并诱导凋亡;miR-221-5p有望成为鼻咽癌顺铂的增敏靶点。

ALDH1A2基因过表达对结肠癌LoVo细胞增殖、侵袭及黏附能力的影响

目的观察ALDH1A2基因过表达对LoVo细胞增殖、侵袭及黏附能力的影响。方法将携带有人外源性ALDH1A2基凶的真核表达质粒转染人结肠癌细胞株LoVo细胞，分别应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法从mRNA及蛋白水平测定3组细胞中ALDH1A2水平变化，通过噻唑蓝（MTF）、Matrige!体外侵袭实验、平板克隆形成实验、黏附实验测定不同组别细胞增殖能力、侵袭转移能力、克隆形成能力及黏附能力的变化。结果RT—PCR及Westernblot结果显示，与空质粒转染组及空白对照组细胞比较，转染pEGFP—NI—ALDH1A2的细胞其内源性ALDHlA2mRNA及蛋白表达水平显著增加（P〈0．05）；MTY及平板克隆实验显示转染pEGFP-N1-ALDH1A2质粒的LoVo增殖能力显著下降；Matrigel体外侵袭实验证实，转染pEGFP—N1-ALDH1A2质粒的LoVo穿膜细胞数为（21．4±3．1）个，显著低于转染空质粒及空白组，LoVo穿膜细胞数为（71．9±7．27、78．3±9．35）个，差异有统计学意义（P〈0．05），黏附实验结果显示，转染pEGFP—N1-ALDHIA2质粒的LoVo黏附能力显著降低（P〈0．05），提示转染pSUPER—TF-1质粒的LoVo细胞侵袭、黏附能力显著下降。结论ALDH1A2基因过表达可以明显降低LoVo细胞增殖能力、体外侵袭黏附能力。

ALDH1A2基因过表达对结肠癌移植瘤生长的影响

目的:采用转染的细胞构建裸鼠移植瘤,研究ALDH1A2过表达对异种移植瘤的影响。方法:利用不同组别的LOVO细胞接种裸鼠构建移植瘤模型,观察成瘤时间、瘤体平均体积,平均瘤重,探讨ALDH1A2在体内对结肠癌的影响。结果:ALDH1A2组及ATRA组裸鼠成瘤时间较对照组有显著延长,瘤体体积较对照组显著减少,瘤重也较对照组显著减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功地建立了人结肠癌细胞裸鼠移植瘤模型,AL-DH1A2组裸鼠成瘤时间短,瘤重低,ALDH1A2过表达可抑制LOVO细胞的增殖。

5-氮杂脱氧胞苷与曲古抑菌素A对膀胱癌细胞株ALDHla2基因表达及凋亡的影响

目的探讨5-氮杂脱氧胞苷（5-Aza—dC）与曲古抑菌素A（TSA）对膀胱癌细胞中抑癌基因ALDHla2启动子甲基化状态和基因表达及细胞凋亡的影响。方法使用5-Aza—dC、TSA处理RT-4、253J、5637、BIU-87和T24后，应用甲基化特异性PCR（MSP）法、逆转录PCR（RT—PCR）法、Western blot法分别检测这5株膀胱癌细胞经药物干预前后ALDHla2甲基化状态及基因表达情况，应用流式细胞学检测干预前后5株膀胱癌细胞株的凋亡情况。结果在5株膀胱癌细胞中，ALDHla2基因表现为高甲基化表达受到抑制，TSA不影响甲基化状态，5-Aza—dC可逆转高甲基化状态并恢复基因表达，联合给予5-Aza—dC和TSA的作用和单独给予5-Aza．dC相似；TSA和5-Aza—dC均可诱导膀胱癌细胞株凋亡，早期凋亡是膀胱癌细胞株死亡的主要方式，5-Aza—dC和TSA有协同作用，3个实验组与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论在5株膀胱癌细胞株中，ALDHla2基因启动子甲基化可能是导致其基因失活的主要原因；5-Aza．dC单独作用和5-Aza—dC及TSA联合应用效果相似，均能恢复基因重新表达进而诱导膀胱癌细胞株的早期凋亡。