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鸡chNHE1精准基因编辑细胞系的构建及其抗ALV-J感染的研究
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作者 张学富 陈运通 +6 位作者 范文瑞 张子博 于蒙蒙 王素艳 祁小乐 李留安 高玉龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5238-5246,共9页
旨在构建ALV-J受体分子chNHE1精准基因编辑细胞系,本研究利用荧光标记的CRISPR/Cas9系统,在DF-1细胞中将chNHE1介导ALV-J进入宿主细胞的关键氨基酸V33进行突变,W38进行缺失,同时将编码第34-37位氨基酸的密码子同义替换。通过流式细胞分... 旨在构建ALV-J受体分子chNHE1精准基因编辑细胞系,本研究利用荧光标记的CRISPR/Cas9系统,在DF-1细胞中将chNHE1介导ALV-J进入宿主细胞的关键氨基酸V33进行突变,W38进行缺失,同时将编码第34-37位氨基酸的密码子同义替换。通过流式细胞分选获得48株单克隆细胞系,PCR及测序分析结果显示,其中有14株单克隆细胞系的chNHE1成功发生V33突变、W38缺失以及34-37位氨基酸的密码子同义替换,基因编辑效率为29%。为了验证chNHE1基因编辑DF-1细胞系的遗传稳定性及增殖水平,对传至第25代的细胞系进行测序分析,结果显示,chNHE1基因未发生回复性突变;进一步细胞计数分析结果显示,chNHE1基因编辑细胞系增殖水平未受到影响;为了评价chNHE1基因编辑细胞系抗ALV-J感染的能力,分别利用ALV-J荧光报告病毒(ALV-J-GFP)及ALV-J原型毒株(HPRS-103)对其进行病毒感染试验,荧光观察结果及流式细胞分析结果显示,chNHE1基因编辑细胞系可完全抵抗0.1 MOI ALV-J-GFP的感染;进一步间接免疫荧光试验、PCR扩增试验以及病毒滴度测定试验结果显示,chNHE1基因编辑细胞系可完全抵抗0.1 MOI HPRS-103毒株及0.1 MOI JL08CH3-1毒株的感染。本研究利用荧光标记的CRISPR/Cas9系统结合流式细胞分选,成功构建了chNHE1基因编辑细胞系,其可完全抵抗ALV-J的感染,且该细胞系遗传稳定性及增殖活性良好,为建立抗ALV-J感染的新技术提供了理论支持及基因编辑靶点。 展开更多
关键词 DF-1 chNHE1 alv-J 基因编辑
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S100A9抑制ALV-J在HD11细胞中增殖
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作者 朱姝桐 朱治坚 +4 位作者 王陈君 郭旺 吴慧显 骆欢 胡序明 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期22-26,共5页
钙结合蛋白S100A9是损伤相关分子模式蛋白家族的重要成员,在调节细胞的免疫功能和抗病毒免疫中扮演着重要角色。然而,目前尚不清楚S100A9在家禽中是否具有抗病毒功能。本文首先通过定量PCR分析发现ALV-J感染鸡巨噬细胞系HD11后持续性下... 钙结合蛋白S100A9是损伤相关分子模式蛋白家族的重要成员,在调节细胞的免疫功能和抗病毒免疫中扮演着重要角色。然而,目前尚不清楚S100A9在家禽中是否具有抗病毒功能。本文首先通过定量PCR分析发现ALV-J感染鸡巨噬细胞系HD11后持续性下调S100A9基因表达。为了进一步探讨S100A9基因在鸡巨噬细胞中的抗病毒功能及其机制,成功构建了S100A9真核表达载体。最后,通过定量PCR和Western blot检测S100A9过表达对ALV-J复制水平和TLR3信号通路相关基因表达的影响。结果显示:与对照组相比,ALV-J在过表达S100A9的HD11中的增殖水平显著降低。机制上,S100A9显著上调TLR3基因及其下游信号基因(IRF7、IFN-α和IFN-β)在HD11细胞中表达。本研究揭示了鸡S100A9在巨噬细胞中抗病毒功能及其作用机制,为今后探索S100A9基因在ALV-J致病机理中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 S100A9 TLR3 alv-J 鸡巨噬细胞
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ALV-J感染对鸡脾脏巨噬细胞天然免疫因子的影响
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作者 张曦 谢婷婷 +1 位作者 冯敏 张细权 《中国家禽》 北大核心 2024年第3期44-50,共7页
为探究J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)对鸡脾脏巨噬细胞天然免疫反应的影响,试验利用密度梯度离心法和贴壁法,从鸡脾脏组织中分离得到单核细胞,并通过显微镜观察培养至24 h、72 h、120 h单核细胞的分化过程... 为探究J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)对鸡脾脏巨噬细胞天然免疫反应的影响,试验利用密度梯度离心法和贴壁法,从鸡脾脏组织中分离得到单核细胞,并通过显微镜观察培养至24 h、72 h、120 h单核细胞的分化过程;通过PCR扩增ALV-J特异性引物H5/H7,验证脾脏巨噬细胞对ALV-J的易感情况;同时,通过qPCR验证感染ALV-J后鸡原代脾脏巨噬细胞中炎性因子、干扰素及肿瘤抑制因子的表达。结果显示:单核细胞分化至第120 h形成形态正常的巨噬细胞,通过流式细胞技术检测鸡巨噬细胞表面特异性标记蛋白发现,84.9%的细胞为KUL01阳性细胞;鸡原代脾脏巨噬细胞对ALV-J易感,并且ALV-J可整合进鸡原代脾脏巨噬细胞基因组中;对感染ALV-J的鸡脾脏巨噬细胞进行形态观察,发现ALV-J感染导致鸡脾脏巨噬细胞形态逐渐萎缩直至死亡;ALV-J感染6 h、12 h、24 h及48 h可诱导鸡原代脾脏巨噬细胞炎性因子(IL-1β、IL-6)的表达显著上调,在ALV-J感染24 h、48 h诱导肿瘤抑制因子(TNF-α)的表达显著上调(P<0.05);并且在早期(感染3 h)诱导干扰素(IFN-β)及干扰素刺激基因(CH25H、STAT1、PKR)表达,后期(感染48 h)抑制部分干扰素刺激基因(OAS、STAT1、ZAP、Mx、PKR)的表达。研究表明ALV-J感染鸡原代脾脏巨噬细胞早期可诱发强烈的天然免疫反应,后期可能通过抑制IFN-β及部分干扰素刺激基因的表达实现免疫逃逸。 展开更多
关键词 鸡原代脾脏巨噬细胞 alv-J感染 天然免疫因子
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ALVE的筛查整合及其对坝上长尾鸡生产性能的影响
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作者 高启萌 董娇娇 +4 位作者 王涛 郭艳丽 冯凯迪 王茂森 李兰会 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第12期71-76,共6页
试验旨在研究禽内源性白血病毒(ALVE)在坝上长尾鸡中的分布及其对坝上长尾鸡生产性能的影响。利用分子进化遗传分析(MEGA)的邻位相连法构建禽白血病病毒(ALV)的系统进化树,最大似然法计算序列遗传距离。利用聚合酶链式反应(PCR)检测坝... 试验旨在研究禽内源性白血病毒(ALVE)在坝上长尾鸡中的分布及其对坝上长尾鸡生产性能的影响。利用分子进化遗传分析(MEGA)的邻位相连法构建禽白血病病毒(ALV)的系统进化树,最大似然法计算序列遗传距离。利用聚合酶链式反应(PCR)检测坝上长尾鸡中ALVE的整合,对ALVE-6和ALVE-B5整合与坝上长尾鸡产蛋、体重的关系进行双因素方差分析。配对卡方检验分析ALVE-6整合与ALV-p27抗原阳性的关联。结果发现:24条白血病病毒基因组分化为ALVE、禽外源性白血病病毒K亚群(ALVK)和ALVE与ALVK重组(ALVK+E/K)、禽外源性白血病病毒A亚群(ALVA)和ALVE与ALVA重组(ALVA+E/A)三大分支。病毒基因组的env区分化系数最高为0.641,3′UTR区分化系数最低为0.050,相对保守。4种ALVE在坝上长尾鸡基因组中有整合,ALVE-6的整合率最高,为87.63%。与ALVE-6阴性相比,ALVE-6阳性坝上长尾鸡的体重显著提高(P<0.05)。ALVE-6整合的PCR检测结果与ALV-p27抗原ELISA检测结果相互独立。研究表明,坝上长尾鸡具有较高的ALVE-6整合率,ALVE-6整合对坝上长尾鸡的生产性能有提升作用,且ALVE-6的整合不影响ALV-p27抗原检测结果,该研究结果为ALVE在选育生产性能优良的坝上长尾鸡中的应用提供了支持。 展开更多
关键词 禽内源性白血病病毒 坝上长尾鸡 alvE-6 生产性能
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ARG2基因在ALV-J感染DF-1细胞中的作用研究
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作者 赵永霞 赵昌滨 +1 位作者 梁锦萍 李红梅 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期74-80,共7页
为了研究线粒体相关基因精氨酸酶2(arginase-2,ARG2)在J亚群禽白血病病毒(J subgroup leukosis virus,ALV-J)感染中的作用,试验采用qRT-PCR方法分别检测感染ALV-J后试验组鸡不同器官和DF-1细胞中ARG2基因的表达情况,分析ARG2基因和ALV-... 为了研究线粒体相关基因精氨酸酶2(arginase-2,ARG2)在J亚群禽白血病病毒(J subgroup leukosis virus,ALV-J)感染中的作用,试验采用qRT-PCR方法分别检测感染ALV-J后试验组鸡不同器官和DF-1细胞中ARG2基因的表达情况,分析ARG2基因和ALV-J感染之间是否有联系;设计ARG2基因的过表达载体(过表达ARG2组)和干扰片段(干扰ARG2组)转染DF-1细胞,并以pcDNA3.1或Si-NC为对照,采用qRT-PCR方法检测ARG2基因的过表达和干扰效率;采用qRT-PCR、Western-blot和间接免疫荧光试验检测过表达或干扰ARG2基因后感染ALV-J的DF-1细胞中gp85基因及Env蛋白表达情况,从而综合分析ARG2基因对ALV-J复制的影响。结果表明:与对照组相比,试验组鸡的脾脏、法氏囊中ARG2基因相对表达量极显著降低(P<0.01),而肾脏中ARG2基因相对表达量极显著升高(P<0.01)。同时在体外试验中,ARG2基因在感染后第6,12小时时相对表达量降低(P>0.05或P<0.05),而在第24,48,74,108小时相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组相比,过表达ARG2组ARG2基因相对表达量极显著升高(P<0.01),干扰ARG2组ARG2基因相对表达量降低(P>0.05或P<0.05),并选择干扰片段SI-ARG2-001进行后续试验。过表达ARG2基因后,与对照组相比,过表达ARG2组第12,24小时的gp85基因相对表达量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),Env蛋白表达量显著上调(P<0.05),Env免疫荧光信号强度增强;干扰ARG2基因后,与对照组相比,干扰ARG2组第6,12,48小时的gp85基因相对表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),Env蛋白表达量显著下调(P<0.05),Env免疫荧光信号强度减弱。说明ARG2基因可以促进ALV-J在DF-1细胞中的复制。 展开更多
关键词 线粒体相关基因 精氨酸酶2(ARG2) J亚群禽白血病病毒(alv-J) 病毒复制 DF-1细胞
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MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制解析
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作者 贾玉生 李易霖 +2 位作者 马露露 廖明 代曼曼 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3132-3142,共11页
MHC B2单倍型鸡对禽白血病病毒感染有较强抗性,这种抗病性可能与被MHC分子递呈的表位刺激活化的T细胞产生的免疫应答有关。本研究拟阐明MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制。利用凝胶过滤层析筛选出能与MHCⅠ稳定结合的肽... MHC B2单倍型鸡对禽白血病病毒感染有较强抗性,这种抗病性可能与被MHC分子递呈的表位刺激活化的T细胞产生的免疫应答有关。本研究拟阐明MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位结构和递呈机制。利用凝胶过滤层析筛选出能与MHCⅠ稳定结合的肽。利用晶体初筛试剂盒在体外培育肽和MHCⅠ的二元复合物晶体,并利用COOT、CCP4和PYMOL等软件对该晶体结构进行解析和分析。在这项研究中,作者发现二个与BF2*0201稳定结合的ALV-J CTL表位FVDFANRLI和SALQAFREV。得到一个优质晶体BF2*0201-SALQAFREV(SV9),其生长条件为1.0 mol·L^(-1)丁二酸(pH 7.0),0.1 mol·L^(-1)HEPES(pH 7.0),1%聚乙二醇单甲醚2000。解析高分辨率(1.72?)的BF2*0201-SV9复合物结构后发现BF2*0201抗原结合槽整体呈现弱负电性。保守的残基多位于抗原结合槽的两端,特异性氨基酸赋予BF2*0201中等大小的抗原结合槽。B、C和F口袋起着较重要的锚定作用,口袋残基和水分子与抗原多肽形成氢键作用,将其固定在抗原结合槽中。SV9表位构象中突出的P4-Gln和P7-Arg残基的构象特征表明该位点有被特异性TCR潜在识别的特性。BF2*0201-SV9复合物晶体结构特征有助于阐明B2单倍型MHCⅠ类分子BF2*0201递呈ALV-J表位的机制,有助于解释B2单倍型鸡对ALV存在抗性的原因,为抗病育种工作奠定理论基础。 展开更多
关键词 MHC BF2*0201 alv-J 递呈机制 晶体结构
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不同地方品种鸡ALV感染情况调查及其净化 被引量:3
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作者 蔡丙严 田其真 +2 位作者 戴建华 穆晓惠 白佑博 《畜禽业》 2021年第12期1-3,6,共4页
目的了解不同地方品种鸡中ALV的自然感染状态。方法采集扬州某种鸡场3个地方品种鸡(芦花鸡、苏禽绿壳鸡、新杨黑鸡)、2个时期(15周龄、25周龄)的泄殖腔棉拭子3600份和血清样品600份,分别采用p27抗原检测试纸条和ELISA检测试剂盒进行检测... 目的了解不同地方品种鸡中ALV的自然感染状态。方法采集扬州某种鸡场3个地方品种鸡(芦花鸡、苏禽绿壳鸡、新杨黑鸡)、2个时期(15周龄、25周龄)的泄殖腔棉拭子3600份和血清样品600份,分别采用p27抗原检测试纸条和ELISA检测试剂盒进行检测,同时,采集部分p27抗原检测阳性鸡的抗凝血,提取基因组,利用J亚群特异性引物进行PCR检测。结果15周龄时p27抗原检测试纸条与ELISA检测总阳性率分别为30.67%和31.38%;25周龄时总阳性率分别为11.20%和12.50%。ALV-J亚群PCR检测结果显示,阳性样品可扩增出特异性符合目的545 bp条带。结论我国地方品种鸡存在ALV的感染,且主要以ALV-J亚群为主。 展开更多
关键词 禽白血病(alv) P27抗原 alv-J亚群 感染
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用ALV-Jgp85单克隆抗体证明蛋鸡存在J亚群禽白血病 被引量:52
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作者 徐镔蕊 董卫星 +4 位作者 余春明 冯小宇 李宁 Lucy F.Lee Maoxiang Li 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期269-271,共3页
采用免疫组化法,对病理学初步诊断为蛋用型鸡 J亚群白血病的自然发病鸡的肿瘤、骨髓、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、心脏、胰脏、输卵管、卵巢、腺胃、骨骼肌、大脑、坐骨神经,用特异性抗 J亚群禽白血病病毒(ALV J)囊膜糖蛋白gp85的单克隆... 采用免疫组化法,对病理学初步诊断为蛋用型鸡 J亚群白血病的自然发病鸡的肿瘤、骨髓、肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、心脏、胰脏、输卵管、卵巢、腺胃、骨骼肌、大脑、坐骨神经,用特异性抗 J亚群禽白血病病毒(ALV J)囊膜糖蛋白gp85的单克隆抗体进行检测,待检的组织切片中均检出阳性抗原,免疫组化的研究结果与病理学诊断结果相一致。在国内外首次发现并报道蛋用型鸡 J亚群禽白血病的自然病例。 展开更多
关键词 单克隆抗体 诊断 肿瘤 首次发现 膜糖蛋白 检出 免疫组化法 J亚群禽白血病 alv-J 蛋用型
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考虑岸桥缓存区的ALV调度优化问题研究 被引量:10
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作者 汤鹏飞 梁承姬 +1 位作者 丁一 徐德洪 《广西大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2015年第6期1540-1550,共11页
为研究采用ALV作为水平运输设备进行集装箱转运和在岸桥下方设置岸桥缓存区,对减少集装箱码头装卸设备作业不协调现象的影响,在考虑岸桥缓存区容量限制的基础上,建立了以岸桥作业延迟时间、ALV总行驶时间及岸桥等待ALV的时间之和最小为... 为研究采用ALV作为水平运输设备进行集装箱转运和在岸桥下方设置岸桥缓存区,对减少集装箱码头装卸设备作业不协调现象的影响,在考虑岸桥缓存区容量限制的基础上,建立了以岸桥作业延迟时间、ALV总行驶时间及岸桥等待ALV的时间之和最小为目标的ALV调度混合整数规划模型,采用遗传算法进行求解,并给出了相应调度优化方案,进而讨论了不同缓存区容量和ALV数量时的设备等待时间,并给出最优缓存区数量和ALV数量等。结果表明:采用ALV作为水平运输设备和在岸桥下方设置缓存区对提高设备作业的连贯性和协调性,减少岸桥等待时间和提高港口作业效率有着重要作用。 展开更多
关键词 集装箱装卸 岸桥缓存区 alv调度 遗传算法
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基于Dempster-Shafer证据推理理论的ALV视觉信息融合 被引量:7
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作者 张奇 顾伟康 刘济林 《计算机学报》 EI CSCD 北大核心 1999年第2期193-198,共6页
本文针对Dempster-Shafer(D-S)证据推理理论所存在的问题进行了新的推广,同时考虑证据的相关性与冲突性而修正了Dempster组合规则,并将推广后的D-S理论应用于ALV实际非结构化道路网环境中视觉信息... 本文针对Dempster-Shafer(D-S)证据推理理论所存在的问题进行了新的推广,同时考虑证据的相关性与冲突性而修正了Dempster组合规则,并将推广后的D-S理论应用于ALV实际非结构化道路网环境中视觉信息的融合,研究并探索了信息融合实际应用中诸多具有较大难度的问题,取得了有意义的结果. 展开更多
关键词 alv 多传感器融合 信息融合 D-S证据推理
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应用组织芯片免疫组化法检测ALV-J 被引量:8
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作者 张玲娟 刘杰 +3 位作者 成子强 王桂花 刁秀国 朱国 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期427-430,共4页
禽白血病J亚群(ALV-J)是英国的Payne和他的同事们在20世纪90年代初从肉鸡中分离出来的新亚群,主要引起肉鸡的骨髓瘤白血病。自1999年,我国一些肉用型种鸡场陆续发生了禽白血病J亚群。并且近几年来,ALV-J已从最初只引起肉种鸡发病开始向... 禽白血病J亚群(ALV-J)是英国的Payne和他的同事们在20世纪90年代初从肉鸡中分离出来的新亚群,主要引起肉鸡的骨髓瘤白血病。自1999年,我国一些肉用型种鸡场陆续发生了禽白血病J亚群。并且近几年来,ALV-J已从最初只引起肉种鸡发病开始向蛋鸡及中国地方种鸡蔓延。组织芯片技术是一种新型特殊的生物芯片技术,它能明显提高工作效率,减少实验误差。本研究将组织芯片技术和免疫组化染色结合起来,用特异性抗ALV-J囊膜蛋白gp85的单克隆抗体来检测发病鸡只的各组织器官的组织切片。在肝脏、脾脏、肾脏、卵巢、腺胃、骨髓、髓细胞瘤组织均检出病毒阳性抗原。结果表明组织芯片技术和免疫组化染色相结合为临床诊断ALV-J提供了一个高通量、敏感的检测方法。 展开更多
关键词 组织芯片 免疫组化 禽白血病J亚群(alv-J)
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REV与ALV-J共感染对肉鸡T淋巴细胞免疫功能与组织病理学的影响 被引量:4
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作者 李宏梅 成子强 +3 位作者 刘建柱 刘法孝 郭慧君 崔治中 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期3296-3304,共9页
【目的】研究致瘤性病毒REV、ALV-J单一感染和共感染肉鸡后血液和脾T淋巴细胞的免疫功能与脾组织病理学的变化。【方法】用一定剂量的REV和ALV-J单一感染及共感染1日龄肉鸡,取感染后不同日龄鸡的血液和脾组织,无菌分离淋巴细胞,用3H-Td... 【目的】研究致瘤性病毒REV、ALV-J单一感染和共感染肉鸡后血液和脾T淋巴细胞的免疫功能与脾组织病理学的变化。【方法】用一定剂量的REV和ALV-J单一感染及共感染1日龄肉鸡,取感染后不同日龄鸡的血液和脾组织,无菌分离淋巴细胞,用3H-TdR掺入法和MTT法分别检测T淋巴细胞增殖活性和细胞毒T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性,并对脾脏进行组织切片、H.E染色检测组织病理学变化,通过免疫荧光抗体结合试验(immunofluorescence assay,IFA)分析组织病毒感染量变化。【结果】感染REV和ALV-J的肉鸡血液和脾T淋巴细胞的增值活性和CTL杀伤活性在整个感染监测期出现降低,单一感染比,共感染两种病毒的肉鸡在某些阶段出现T淋巴细胞免疫功能抑制加重;检测感染后17d和37d的脾脏组织病理学变化表明感染病毒的脾脏组织出现间质稀疏,淋巴细胞数量减少,生发层被破坏或减少,17d较37d出现病理变化更为明显;同时采用荧光标记的单克隆抗体进行IFA检测发现脾内淋巴细胞含有大量病毒粒子,在共感染两种病毒的肉鸡脾细胞内均检测出两种病毒,且含有病毒数量明显多于单一感染一种病毒的肉鸡。【结论】REV和ALV-J共感染后肉鸡T淋巴细胞功能抑制更为严重,这可能与两种病毒在肉鸡体内数量积聚增加、互为促进有重要关系;同时这两种病毒感染后造成T免疫细胞增殖活性和对肿瘤细胞的杀伤活性降低,可能是病毒持续感染、增殖及组织病变、产生肿瘤细胞的前提,本研究为家禽临床生产中防治REV和ALV-J感染提供免疫学基础。 展开更多
关键词 网状内皮组织增生症病毒(REV) J亚群白血病病毒(alv-J) T淋巴细胞活性 组织病理学 肉鸡
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ALV-A p27基因的原核表达及其鼠源多克隆抗体的制备 被引量:7
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作者 徐丽 林汉卿 +7 位作者 温贵兰 李昌红 张升波 田浪 杨佰启 陈彦希 文明 龚新勇 《中国家禽》 北大核心 2019年第2期15-19,共5页
试验拟通过构建A亚群禽白血病病毒(ALV-A) p27基因原核表达载体,从而制备抗p27蛋白鼠源多克隆抗体。将感染ALV-A毒株的DF-1细胞反复冻融后提取RNA并反转录为cDNA,利用PCR扩增获得ALV-A p27基因,将目的基因克隆至pColdⅠ载体,并转化入大... 试验拟通过构建A亚群禽白血病病毒(ALV-A) p27基因原核表达载体,从而制备抗p27蛋白鼠源多克隆抗体。将感染ALV-A毒株的DF-1细胞反复冻融后提取RNA并反转录为cDNA,利用PCR扩增获得ALV-A p27基因,将目的基因克隆至pColdⅠ载体,并转化入大肠杆菌BL21(DE3)菌中进行诱导表达,经镍柱纯化后免疫28~32日龄的雌性小鼠,采用间接ELISA法测定抗体效价,Western blot检测抗体特异性。试验经PCR扩增出750 bp左右的特异性条带,并成功构建pColdⅠ-ALV-A-p27原核表达载体,加入终浓度为1 mmol/L的IPTG于18℃诱导表达18~24 h成功得到重组蛋白,该蛋白主要以包涵体形式存在。间接ELISA检测显示,制备的鼠源多克隆抗体血清抗体效价为1∶3 200;Western blot检测结果表明,制备的多克隆抗体能特异性识别原核表达的p27蛋白。试验结果在ALV的抗原分析、血清学诊断等方面有着重要的应用价值。 展开更多
关键词 alv-A P27 原核表达 鼠源多克隆抗体
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河北省蛋鸡群ALV p27抗原ELISA检测 被引量:5
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作者 张香斋 张艳英 +4 位作者 张召兴 史秋梅 贾青辉 李蕴玉 李佩国 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第12期46-47,共2页
禽白血病(Avian Leukusis,AL)是由反转录病毒科禽白血病/肉瘤病毒群病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的总称,可引起感染鸡免疫抑制和多组织器官发育迟缓、萎缩以及肿瘤等,造成鸡的生产性能下降甚至死亡,由鸡分离的ALV划分为A、B、C、D、E... 禽白血病(Avian Leukusis,AL)是由反转录病毒科禽白血病/肉瘤病毒群病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的总称,可引起感染鸡免疫抑制和多组织器官发育迟缓、萎缩以及肿瘤等,造成鸡的生产性能下降甚至死亡,由鸡分离的ALV划分为A、B、C、D、E、J六个亚群。自2002年蛋鸡群发现禽白血病以来,全国各地频发,特别是自2009年以来,湖北、山东等地鸡白血病疑似病例频发,鸡群ALV的感染率高达60%,病死率高达50%以上[1]。 展开更多
关键词 蛋鸡群 alv p27 ELISA检测 禽白血病 抗原检测 病毒群 反转录病毒科 感染鸡 肿瘤性疾病 器官发育
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ALV-A诱发蛋鸡髓细胞瘤和淋巴瘤混合型禽白血病自然病例初报 被引量:4
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作者 梁雄燕 刘兰 +3 位作者 李拓凡 方守国 杨玉莹 顾玉芳 《中国家禽》 北大核心 2017年第19期63-66,共4页
湖北某蛋鸡场发生肿瘤性疾病,剖检可见病鸡肝、肾、脾肿大,肝脏表面有大小不等的灰白色结节,其中2只(2/7)病鸡肠系膜明显增厚并布满大量灰白色结节。取病变组织制备石蜡切片,HE染色,部分病鸡(4/7)可见髓细胞瘤及淋巴细胞瘤。采集病变组... 湖北某蛋鸡场发生肿瘤性疾病,剖检可见病鸡肝、肾、脾肿大,肝脏表面有大小不等的灰白色结节,其中2只(2/7)病鸡肠系膜明显增厚并布满大量灰白色结节。取病变组织制备石蜡切片,HE染色,部分病鸡(4/7)可见髓细胞瘤及淋巴细胞瘤。采集病变组织进一步进行PCR、病毒分离和IFA等实验室检测,结果病料组织DNA中仅检测出A亚群禽白血病病毒(ALV-A)核酸序列,未检测出其他亚群ALV;用病料制备组织悬液接种的DF-1细胞,IFA呈ALV-A阳性、ALV-J阴性。将分离的病毒静脉接种无外源性ALV感染的13日胚龄蛋鸡鸡胚,可复制出与自然病例类似的肿瘤。结果表明,分离的病毒为ALV-A,病鸡确诊为由ALV-A引起的髓细胞瘤和淋巴细胞瘤混合型禽白血病。这是在国内首次发现ALV-A诱发蛋鸡髓细胞瘤和淋巴瘤混合型禽白血病的自然病例。 展开更多
关键词 alv—A 蛋鸡 髓细胞瘤 淋巴细胞瘤
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无磁钢20Mn23AlV保护渣液渣和渣圈性能变化对连铸的影响 被引量:13
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作者 闫威 陈伟庆 +1 位作者 Carsten Lippold 郑宏光 《特殊钢》 北大核心 2013年第1期45-48,共4页
对高铝无磁钢20Mn23AIV(/%:0.14~0.20C、21.50~25.00Mn、1.50~2.50Al、0.04~0.10V)200 mm板坯连铸过程结晶器保护渣液渣和渣圈的化学组成、理化性能和结晶矿相进行了对比分析。保护渣原渣组成为(/%):31.91CaO、30.30SiO_2、6.58Al_2... 对高铝无磁钢20Mn23AIV(/%:0.14~0.20C、21.50~25.00Mn、1.50~2.50Al、0.04~0.10V)200 mm板坯连铸过程结晶器保护渣液渣和渣圈的化学组成、理化性能和结晶矿相进行了对比分析。保护渣原渣组成为(/%):31.91CaO、30.30SiO_2、6.58Al_2O_3、1.12MgO、3.02MnO、7.73Na20、7.10F。结果表明,连铸开浇后15 min,液渣和渣圈中的SiO_2含量分别降低至22%和18%,Al_2O_3含量分别提高至20.5%和25.5%,其碱度由原渣的1.05分别提高至1.7和2.0。此时液渣及渣圈的熔化温度和粘度大幅度增加,转折温度大幅度降低;渣圈的化学成分及理化性能的变化幅度均大于液渣。连铸开浇15 min后液渣及渣圈的成分与性能均趋于稳定。高熔点相钙铝黄长石的析出是促使渣圈形成的重要原因。 展开更多
关键词 无磁钢20Mn23alv 板坯连铸 结晶器保护渣 渣圈 性能变化
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ALV 路径跟踪模糊控制及参数 GA 寻优 被引量:2
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作者 龙永新 叶秀清 顾伟康 《工程设计学报》 CSCD 1998年第1期24-26,共3页
本文分析和设计了一种适合于ALV(AutonomousLandVehicle地面自主车)路径跟踪的模糊控制器,并采用遗传算法(GeneticAlgorithms,简称GA)优化模糊规则及隶属函数的大量参数,从仿真研究... 本文分析和设计了一种适合于ALV(AutonomousLandVehicle地面自主车)路径跟踪的模糊控制器,并采用遗传算法(GeneticAlgorithms,简称GA)优化模糊规则及隶属函数的大量参数,从仿真研究的结果来看,提出的方法是有效的。 展开更多
关键词 模糊控制 alv 路径跟踪 车辆 视觉导航 GA优化 模糊控制器
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禽白血病病毒J亚群(ALV-J)的攻毒试验 被引量:4
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作者 成子强 赵振华 +1 位作者 张利 高娃 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期219-222,共4页
将禽白血病病毒 J亚群 (AL V- J)内蒙株 NM876 1和 NM9996人工接种于 1日龄爱维茵肉种鸡 ,通过眼观、病理组织学检查观察了攻毒鸡的病理学特征 ;通过 PCR和 EL ISA技术检测了病毒感染率、抗体变化规律以及病毒和抗体的相关性。结果显示 ... 将禽白血病病毒 J亚群 (AL V- J)内蒙株 NM876 1和 NM9996人工接种于 1日龄爱维茵肉种鸡 ,通过眼观、病理组织学检查观察了攻毒鸡的病理学特征 ;通过 PCR和 EL ISA技术检测了病毒感染率、抗体变化规律以及病毒和抗体的相关性。结果显示 ,攻毒鸡从第 3周开始即可检出病毒 ,NM876 1株和 NM9996株病毒感染率分别为 71.4 %和6 4 .3% ;从第 5周开始 ,出现较明显的病理学变化 ,病变特征以骨髓、肝脏、心脏、脾、卵巢等组织内髓细胞增生为主 ,而法氏囊、脑、坐骨神经无变化 ;攻毒鸡抗体消长变化有一定的规律 ,一般在 7~ 8周龄和 18~ 2 0周龄时分别出现 1次高峰 ,而在 4~ 6周龄、10周龄和 2 3周龄分别出现 1次低谷 ,提示鸡场进行 EL ISA检测时要避开这一时期 ;攻毒鸡产生耐受性病毒血症 ,即病毒阳性而抗体阴性 (V+A- )的比例较高 (7/14 ,9/14 )。通过以上的研究证明 ,AL V- J内蒙株疾病模型复制成功 ,NM876 1。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 J亚群 alv-J 感染率 抗体 病理学特征 攻毒试验
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黄芪多糖和甲砜霉素影响ALV-J对SPF鸡致病性的分析 被引量:2
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作者 王广文 吕林 +4 位作者 王超 张振东 程子龙 屈亚锦 刘思当 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1858-1866,共9页
为验证育雏早期应用黄芪多糖及甲砜霉素对ALV-J先天性感染雏鸡发病作用的影响,通过5日龄SPF鸡胚卵黄囊接种1 000TCID50ALV-J,鸡胚出壳后随机分为3组,两试验组分别定期口服黄芪多糖和甲砜霉素,一组作为病毒感染对照。对试验雏鸡泄殖腔排... 为验证育雏早期应用黄芪多糖及甲砜霉素对ALV-J先天性感染雏鸡发病作用的影响,通过5日龄SPF鸡胚卵黄囊接种1 000TCID50ALV-J,鸡胚出壳后随机分为3组,两试验组分别定期口服黄芪多糖和甲砜霉素,一组作为病毒感染对照。对试验雏鸡泄殖腔排毒规律、病毒血症、疫苗免疫水平、免疫器官指数、体重、肿瘤发生率、肿瘤类型等进行动态测定,评估黄芪多糖和甲砜霉素对雏鸡先天感染ALV-J发病作用的影响。结果表明,两种药物对ALV-J病毒血症、ALV-J抗体及疫苗免疫抗体的产生无显著影响。黄芪多糖组与病毒感染对照组体重差异不显著;甲砜霉素组早期体重明显高于其他两组,但后期体重却明显低于另外两组。甲砜霉素组育雏早期血液中白细胞和淋巴细胞的水平显著低于另外两组,60日龄后脾和法氏囊的免疫器官指数显著降低,与另外两组差异显著。肿瘤发生率以甲砜霉素组最高,达28.57%(10/35),其次是病毒感染对照组,为20%(7/35),黄芪多糖组最低,仅为11.43%(4/35)。另外,甲砜霉素组肿瘤类型多,出现血管瘤、髓样细胞瘤、淋巴肉瘤、纤维肉瘤和腺癌,并且肿瘤进展快,病变重。育雏早期应用甲砜霉素会导致雏鸡免疫抑制,促进ALV-J的致瘤作用,患病鸡肿瘤呈多样化特征。黄芪多糖对ALV-J的致病性有一定的抑制作用,但未发现对病毒血症的影响。两种药物对ALV-J的致病作用的影响机制有待于进一步研究探讨。 展开更多
关键词 黄芪多糖 甲砜霉素 药物预防 alv-J
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自动化码头ALV实时任务分配 被引量:2
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作者 宓为建 梁枭 +3 位作者 张晓华 夏孟珏 王郡娴 孙思韵 《上海海事大学学报》 北大核心 2016年第1期25-31,共7页
为弥补自动化集装箱码头自动装载车(Automated Lifting Vehicle,ALV)先到先服务(First Come First Service,FCFS)分配方式的缺陷,提出基于触发事件的ALV作业任务实时分配方式.设置一组触发事件触发ALV实时分配,以ALV到达任务作业点... 为弥补自动化集装箱码头自动装载车(Automated Lifting Vehicle,ALV)先到先服务(First Come First Service,FCFS)分配方式的缺陷,提出基于触发事件的ALV作业任务实时分配方式.设置一组触发事件触发ALV实时分配,以ALV到达任务作业点估计时间最短为目标,建立ALV实时分配模型,选用A^*算法对该模型进行求解.通过与贪婪算法的对比,验证A^*算法的优越性.对用A^*算法求解大型集装箱码头ALV实时分配问题的求解速度和稳定性进行实验测试,结果验证了选用A^*算法的可行性. 展开更多
关键词 自动化集装箱码头 alv实时分配 A*算法 触发事件
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