抗奥合剂通过p38 MAPK/NF-κB信号通路和ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解急性肺损伤研究

目的探讨抗奥合剂(KAHJ)治疗小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制,为其可能作为缓解新型冠状病毒(COVID-19)感染后症状的药物提供依据。方法采用网络药理学方法预测KAHJ治疗ALI的主要活性成分、潜在靶点和相关信号通路。将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、LPS组和LPS+KAHJ组。LPS+KAHJ组小鼠灌胃KAHJ(4.76 g·kg^(-1)·d^(-1),8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1)),其余组小鼠灌胃生理盐水(8.8 mL·kg^(-1)·d^(-1))。14 d后,腹腔注射LPS(5 mg·kg^(-1))诱导ALI模型。收集小鼠血清和肺组织,通过组织病理学观察肺组织的病理变化。采用Western blot、qPCR、ELISA和IHC等方法评估KAHJ对ALI的改善作用。结果通过网络药理学筛选出疾病和药物共同的70个核心靶基因,并显示与多个信号通路密切相关,如MAPK、NF-κB、Apoptosis、COVID-19和肾素-血管紧张素系统(Ras)信号通路等。此外,通过实验验证发现KAHJ能改善小鼠ALI后的炎症和细胞凋亡,减少肺损伤和肺水肿,抑制肺纤维化。同时,KAHJ的作用机制与p38 MAPK和NF-κB的磷酸化以及ACE2/Ang1-7/Mas轴的调控也有着密切关系。结论KAHJ可能通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路和调控ACE2/Ang1-7/Mas轴缓解ALI,为缓解COVID-19感染后症状提供了补充和替代药物。

酸性成纤维细胞生长因子调控Ang1/Tie2信号通路抑制炎症促进血管内皮细胞功能恢复

目的:探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)功能的影响,以及Ang1/Tie2通路在其中的作用。方法:培养HUVEC细胞,不同浓度脂多糖(LPS)和aFGF刺激HUVEC,CCK-8实验确定刺激浓度,并观察生长活性;细胞划痕实验检测aFGF对HUVEC迁移能力的影响;Westernblot实验检测增殖蛋白PCNA,凋亡蛋白Cleavedcaspase3、Bax,抗凋亡蛋白Bcl2,炎症相关蛋白NLRP3、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4和IL-10,血管生成相关蛋白CD31和通路相关蛋白Ang1、Tie2的表达水平;免疫荧光实验检测PCNA、Cleavedcaspase3、IL-6、IL-10以及CD31的荧光强度。分离小鼠主动脉,离体培养后进行免疫荧光实验,观察PCNA、Cleavedcaspase3、IL-6、IL-10以及CD31蛋白的荧光强度。结果:CCK-8实验显示LPS抑制HUVEC生长活性,5μg/mL为最适刺激浓度(P<0.01);aFGF促进HUVEC生长活性,其中100ng/mL为最适刺激浓度(P<0.01)。细胞划痕实验提示aFGF促进细胞迁移。Westernblot和免疫荧光实验结果显示,aFGF促进增殖蛋白和血管功能蛋白表达,抑制凋亡蛋白和炎症蛋白表达,上调Ang1/Tie2通路蛋白(P<0.05)。离体血管免疫荧光实验显示aFGF上调PCNA、IL-10以及CD31的荧光强度,下调Cleavedcaspase3和IL-6的荧光强度(P<0.05)。结论:aFGF增强HUVEC生长活性和迁移能力,促进其增殖,抑制其凋亡,并通过调控Ang1/Tie2通路抑制炎症反应,促进血管功能修复。

基于Ang1/Tie2信号通路研究周细胞调控腹膜血管新生的作用机制

目的:本研究旨在通过观察血管周细胞与血管内皮细胞间的相互作用,探讨周细胞调控腹膜血管新生的作用机制。方法:使用转化生长因子β1(TGF-β1)干预人微血管周细胞(HMPCs)24、48和96 h,Western blot检测HMPCs中血管生成素1(Ang1)的表达。收集TGF-β1干预HMPCs后的上清液作为条件培养基(T-HMPCs-CM),用T-HMPCs-CM处理人腹膜血管内皮细胞(HPVECs)构建间接共培养模式;将TGF-β1处理过的HMPCs与HPVECs共同接种于基质胶上,构建直接共培养模式;以未经TGF-β1处理的HMPCs作为阴性对照组,以外源性Ang1处理的HPVECs作为阳性对照组,以人血管生成素受体Tie2抑制剂处理的HPVECs作为抑制剂组。采用CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell实验、成管实验和细胞膜荧光探针染色法观察HPVECs增殖、迁移、血管生成情况,以及HPVECs与HMPCs共定位情况;Western blot检测HPVECs中Tie2蛋白及其磷酸化水平。结果:TGF-β1处理96 h,HMPCs中Ang1蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与阴性对照组相比,T-HMPCs-CM能够抑制HPVECs迁移、血管新生,并增加Tie2磷酸化以稳定血管状态,其作用类似于外源性Ang1;而使用Tie2抑制剂阻断Ang1/Tie2信号通路后,上述作用一定程度上被逆转。结论:TGF-β1可刺激HMPCs分泌Ang1,进而激活HPVECs的Tie2信号通路,从而抑制HPVECs血管新生,发挥维持腹膜血管稳定的作用。

寿胎丸对控制性超促排卵围着床期小鼠子宫内膜Ang1、Tie2表达的影响

目的通过观察小鼠围着床期子宫内膜促血管生成因子1(angiopoietins 1,Ang1)、酪氨酸蛋白激酶2(tyrosine kinase receptors 2,Tie2)的表达,研究寿胎丸改善控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation,COH)后围着床期小鼠子宫内膜容受性的作用机制。方法选取未孕小鼠,随机分成正常组、模型组、寿胎丸低剂量组、寿胎丸中剂量组、寿胎丸高剂量组,分别予以醋酸亮丙瑞林微球、尿促性腺激素(human menopausal gonadotropin,HMG)、人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotophin,HCG)注射造模。0.9%氯化钠溶液、不同浓度中药灌胃。造模成功后,各组分别与雄性小鼠合笼,于合笼成功第2天(D2)、第4天(D4)、第6天(D6)取小鼠子宫内膜组织,运用免疫组化法及Western blot法检测Ang1、Tie2蛋白的表达情况。结果与模型组比较,寿胎丸中、高剂量组小鼠子宫内膜Ang1、Tie2表达量增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论(1)COH减少围着床期小鼠子宫内膜Ang1、Tie2的表达,干扰子宫内膜血管生成,从而降低子宫内膜容受性。(2)寿胎丸可通过提高COH后小鼠围着床期Ang1、Tie2的表达,促进子宫内膜血管生成,改善子宫内膜容受性。

黄芪丹参配伍提取物经VEGF、Ang1/Tie2通路对心肌梗死大鼠血管新生的病理影响

为观察黄芪、丹参配伍提取物对心肌梗死大鼠VEGF(vascular endothelial growth factor)、血管生成素Ang1及其受体酪氨酸激酶Tie2信号通路的表达影响,对心肌梗死大鼠模型复制成功后分为假手术对照组、模型组、黄芪、丹参配伍提取物低、中、高剂量组,分别予以对应药物灌胃4周。观察大鼠一般生活状态,并分别采用HE染色和免疫组织化学染色测试大鼠心肌组织病理形态结构和VEGF、Ang1、Tie2的蛋白表达。结果表明:模型组心肌结构紊乱伴有炎性侵润,VEGF、Ang1和Tie2蛋白表达较假手术对照组有所增加(P<0.05);低、中、高剂量组的这些表达随着药物浓度梯度增加,心肌结构逐渐规整,内皮细胞完整、新生血管增多,与模型组比较差异显著(P<0.05或P<0.01)。可见黄芪、丹参配伍提取物可以上调心肌梗死大鼠VEGF、Ang1和Tie2的表达,促进血管新生。

Tie2、Ang1和Ang2蛋白在血管瘤和血管畸形中的表达及临床意义

目的探讨Tie2、Ang1和Ang2蛋白在血管异常(血管瘤和血管畸形)中的表达。方法收集新疆医科大学附属肿瘤医院2005年至2012年血管畸形50例,皮肤增殖期血管瘤30例,正常组织20例,采用免疫组化SP法检测Tie2、Ang1和Ang2蛋白在血管异常中的表达。结果 Tie2在血管异常中的阳性表达率较高,而Ang1在血管异常中的阳性表达率较低,Tie2在血管瘤和血管畸形中的表达显著高于正常组织,Ang1在血管瘤和血管畸形中的表达显著低于正常组织,差异均具有统计学意义(均P<0.05);Tie2和Ang2在血管异常中的表达呈正相关关系(P<0.05)。结论Ang1蛋白表达降低可能破坏了血管的稳定性,有助于病变的发展,Tie2蛋白表达增高,其与Ang2结合对病变血管生成可能具有促进作用,Tie2、Ang1和Ang2表达失衡在血管异常的发病过程中可能起重要的调节作用。

从肝治心方促血管生成作用及其对缺血心肌血管内皮生长因子、Ang1蛋白表达的调节

目的:观察从肝治心方的促血管生成作用及其对急性心肌梗死大鼠缺血心肌血管内皮生长因子、Ang1蛋白表达的影响。方法:实验于2003-07/2004-01在北京大学心血管研究所完成。纳入清洁级雄性wistar大鼠32只。日本雄性大耳白兔18只,来航鸡白皮受精卵100只,受精1～2d。从肝治心方:由人参、柴胡、白芍、姜黄、熊胆、白芥子、九香虫共7味中药组成,北京同仁堂总店提供,由北京中医药大学中药制剂室制作成散剂,配成等体积11.13,22.26,44.52g/(kg·d)混悬液灌胃。通心络胶囊由石家庄以岭药业有限公司生产,批号030107;复方丹参滴丸由天津天士力制药股份有限公司,批号20021117;以上药物均临用前用生理盐水配制溶液。①大耳白兔以数字表法随机分为6组,即按照从肝治心方临床等效用量[22.26g/(kg·d)]的0.5,1,2倍分为从肝治心方11.13,22.26,44.52g/(kg·d)剂量组、通心络组、复方丹参组、正常对照组,每组3只。制备相应含药血清,与血管内皮生长因子165蛋白比较观察从肝治心方对鸡胚尿囊膜模型的促血管生成作用。②32只大鼠复制急性心肌梗死模型,随机分成2组,即从肝治心方治疗组、正常对照组,每组16只,再分别设造模后1,2周为实验终点(n=8)。于术前、术后7,14d用超声心动图测定从肝治心方对大鼠心脏功能的药效。③在从肝治心方组与正常对照组中1,2周两个实验终点检测心脏超声后,随机选取大鼠3只,免疫组织化学及Western-Blot方法检测从肝治心方对模型大鼠缺血心肌血管内皮生长因子、Ang1表达的影响。结果:实验大鼠32只,全部进入结果分析。纳入实验鸡胚100个,成活率74.82%,7组每组随机挑选10只进入结果分析。①从肝治心方22.26g/(kg·d)剂量组一级血管数、二级血管数、总数与血管内皮生长因子165组血管生成数目相当(P>0.05),从肝治心方11.13g/(kg·d)剂量组血管生成数目较从肝治心方22.26g/(kg·d)剂量组少(P<0.01),但优于生理盐水及不同治法的中药对照组(P<0.01);而从肝治心方44.52g/(kg·d)剂量组对一级血管生成数目的影响较小(P<0.01)。②从肝治心方22.26g/(kg·d)剂量组对超声心动图所有左心室重构指标均较模型组有不同程度好转,某些指标甚至在术后14d恢复到接近正常水平。③从肝治心方22.26g/(kg·d)剂量组1,2周缺血心肌血管内皮生长因子、Ang1蛋白表达与对照组比较均显著上调(P<0.01)。结论:从肝治心方有较好的促血管生成作用,并能明显减弱实验性心肌梗死的左心室恶性重构,改善心脏功能,通过上调缺血心肌血管内皮生长因子、Ang1蛋白的表达可能是其重要作用机制。

定心方经Ang1-Tie2通路干预人脐静脉内皮细胞血管生成的实验研究

目的探讨定心方(DXR)含药血清对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Angiopietin/Tie2(Ang1-Tie2)通路及血管形成的影响,研究DXR防治动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,采用OX-LDL 100 mg·m L-1损伤人脐静脉内皮细胞24 h,分别观察DXR含药血清对其迁移及其小管形成的影响。采用免疫印迹法(Western Blot)检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管紧张素(Angiotensin1,Ang1)以及Ang1受体Tie2的表达。采用鸡胚尿囊膜实验观察(Chick embryo chorioallantoic membrane)DXR对体外血管生成的影响。结果经DXR作用24 h后,DXR高剂量组(DXR1,30%浓度)、中剂量组(DXR2,15%浓度)、低剂量组(DXR3,5%浓度)、空白组HUVEC细胞迁移数目与模型组相比,DXR1和DXR2组与Model组相比迁移细胞数量减少,差异具有统计学意义(P<0.05),DXR3、DXR2、DXR1、空白组鸡胚尿囊膜实验中形成的一级和二级血管数目与Model组一、二级血管数目相比,DXR3、DXR2、DXR1与Model组相比,一级血管数量明显降低(P<0.05),二级血管数量明显降低(P<0.05)。Western Blot实验显示,与Model组比较,受DXR干预的HUVEC细胞中的Ang1蛋白和Tie2蛋白表达量上调,VEGF蛋白表达量下降。受DXR干预的HUVEC细胞形成小管密集程度明显低于Model组。结论体外实验结果表明,DXR具有抑制血管生成的作用,这种效应与其可以调控HUVEC细胞内与血管生成密切相关的Ang1,Tie2,VEGF有关联。

Ang1-Akt途径对大鼠体外血-脊髓屏障功能的调节

检测血管生成素1(angiopoietin1,Ang1)对体外培养脊髓微血管内皮细胞(spinal cord microvascular endothelial cell,SCMEC)屏障功能的调节机制。体外分离培养大鼠SCMEC及胶质细胞,通过双室培养系统建立体外血-脊髓屏障(blood-spinal cord barrier,BSCB)模型;分别用Ang1及Ang1+wortmannin(Akt抑制剂)处理培养细胞,Western-blot检测Akt及连接蛋白质的表达;放射自显影检测Akt激酶活性变化;测定跨内皮电阻(TEER)反映各组细胞屏障功能;细胞免疫荧光检测连接蛋白在细胞接触面的分布变化;免疫共沉淀实验分析连接蛋白之间的相互作用改变。结果显示,Ang1处理组细胞Akt活性及TEER值均有明显升高,Ang1处理后ZO-1及VE-cadherin在细胞连接处的分布增强,occludin/ZO-1、VE-cadherin/β-catenin之间的相互作用均较对照组显著增强,且以上Ang1处理所引起的SCMEC功能改变均可被wortmannin所拮抗。表明Ang1通过Akt活性调节SCMEC连接蛋白的分布及相互作用,从而影响体外BSCB的屏障功能。

软组织及椎体血管异常Tie2、Ang1、Ang2蛋白及mRNA的表达及临床意义

目的探讨Tie2、Ang1、Ang2蛋白及mRNA在软组织及椎体血管异常(血管瘤和血管畸形)中的表达及其意义。方法收集血管异常110例,运用RT-PCR和免疫组化SP法检测Tie2、Ang1和Ang2在血管瘤及血管畸形中表达的差异,并进一步了解Tie2基因突变是否影响三者mRNA的表达。结果 Tie2、Ang1和Ang2 mRNA在血管瘤中的表达显著高于血管畸形(P<0.01);在血管瘤、软组织及椎体血管畸形中Ang2蛋白和mRNA的表达显著高于Ang1(P<0.05);突变型Tie2 mRNA的表达水平显著高于野生型(P<0.05),但伴Tie2基因突变的血管畸形Ang1和Ang2 mRNA的表达低于野生型血管畸形(P<0.05)。结论血管瘤和血管畸形可能为基因学改变不同的两种病变;Tie2基因突变、Ang1和Ang2的表达失衡可能促进血管异常病变进展。

Ang1-7对肥厚心肌CX43表达的影响

目的探讨血管紧张素1-7(angiotensin1-7,Ang1-7)对肥厚心肌总缝隙隙连接蛋白43(total connexin43,Total-CX43)和CX43丝氨酸残基368磷酸化位点(phosphorylation of serine residue 368-CX43,PS368-CX43)表达的影响。方法选择5只16周龄雄性WKY(normotensive wistar kyoto,WKY)大鼠作为正常血压组,10只16周龄自发性高血压大鼠(spontaneous hypertension rat,SHR)作为SHR组。然后将10只SHR随机分为安慰剂组(SHR+NS)和Ang1-7干预组(SHR+A),3组在干预前后分别测定尾动脉收缩压(systolic blood pressure,SBP)明确血压变化,干预28 d后行HE染色比较各组之间心肌肥厚程度,免疫组化及Western blot检测Total-CX43和PS368-CX43的表达。结果与WKY组相比,干预前SHR+NS组和SHR+A组血压均升高(P<0.01)。干预后与WKY组相比,SHR+NS组和SHR+A组大鼠血压均升高(P<0.01),与SHR+NS组相比,SHR+A组大鼠血压下降(P<0.01)。HE染色结果显示WKY组大鼠心肌排列整齐,组织结构清晰;SHR+NS组大鼠心肌排列紊乱,组织结构欠清晰;SHR+A组介于二者之间。免疫组化检测Total-CX43和PS368-CX43分布,与WKY组相比,SHR+NS和SHR+A组均降低(P<0.05);与SHR+NS组相比,SHR+A组增加(P<0.01)。Western blot结果显示,与WKY组相比,SHR+A组大鼠Total-CX43和PS368-CX43降低(P<0.01)。与SHR+NS组相比,SHR+A组大鼠Total-CX43和PS368-CX43升高(P<0.01)。结论在高血压大鼠模型中,Ang1-7可降压、影响肥厚心肌Total-CX43/PS368-CX43的表达。

阿利吉仑抑制糖尿病肾病大鼠血管紧张素Ⅱ/血管紧张素1-7(Ang Ⅱ/Ang1-7)信号途径

目的探讨阿利吉仑(AL)对于糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织局部血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)/血管紧张素1-7 (Ang1-7信号轴的调控作用。方法雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照组、糖尿病组(模型组)、AL处理组、缬沙坦(Val)处理组,每组10只。采用高脂饮食加小剂量链脲佐菌素方法建立DN模型,AL处理组给予50 mg/(kg·d) AL灌胃,Val处理组大鼠给予30 mg/(kg·d) Val灌胃。造模后2、4、6周,考马斯亮蓝比色法测定大鼠24 h尿蛋白变化,全自动生化分析仪检测血清肌酐,测定肾脏指数[肾脏质量(g)/体质量(kg)]; HE和PAS染色评估肾脏病变情况,免疫组织化学染色法检测血管紧张素Ⅰ转化酶2(ACE2)、Ang1-7受体(MAS受体)、1型血管紧张素受体(AT1R)及AT2R在肾组织的表达。结果成模后6周,各组间肌酐水平无显著差异;模型组、AL处理组、Val处理组大鼠造模后血糖显著增高,24 h尿蛋白、肾脏指数显著增加,与模型组相比,AL处理组、Val处理组大鼠24 h尿蛋白、肾脏指数有改善。与模型组及Val处理组相比,AL处理组AT2R和ACE2显著降低、MAS受体表达显著增加,AT1R表达显著高于对照组及Val处理组,与模型组无显著变化。结论 AL下调AT2R和ACE2的表达抑制AngⅡ/Ang1-7信号轴改善糖尿病大鼠症状。

Ang1-7与老年心力衰竭的相关性分析

目的探讨慢性心力衰竭(CHF)患者血Ang1-7与心功能严重程度相关性。方法选取本院收治的老年病科因失代偿心力衰竭住院患者40例为实验组,对照组为同期住院非心衰患者,性别、年龄、所患基础疾病与实验组相匹配。检测两组患者血Ang1-7的水平,收集两组患者BNP结果,运用彩色多普勒超声进行左室射血分数(LVEF)测定,并进行相关性分析。结果观察组Ang1-7显著高于对照组;且Ang1-7与LVEF呈负相关,差异有统计学意义(r=-0.273,P<0.05),与脑钠肽(BNP)呈正相关,差异有统计学意义(r=0.229,P<0.05)。结论 Ang1-7水平与心力衰竭患者严重程度呈相关性,可用于评估心力衰竭严重程度及预后的评估。

Ang1-7对高血压心肌肥厚的影响

目的:探讨血管紧张素1-7(Ang1-7)对高血压心肌肥厚和纤维化的影响。方法:选择5只16周龄WKY大鼠(WKY)作为正常血压组,10只16周龄自发性高血压大鼠(SHR)作为SHR组。然后将10只SHR随机分为安慰剂组(SHR+NS)和Ang1-7干预组(SHR+A),干预28 d测血压、完善心脏彩超检查,后在麻醉下开胸取心,行Masso染色比较心肌纤维化变化。结果:①与同周龄WKY相比,20周龄SHR+NS组的血压明显增大(P<0.05);②与同周龄WKY相比,SHR+A组的心肌肥厚和纤维化程度明显增加(P<0.05);③与SHR+NS相比,SHR+A组的心肌肥厚和纤维化程度明显减轻(P<0.05)。结论:在高血压大鼠心肌肥厚模型中,Ang1-7具有逆转心肌肥厚和纤维化的作用。

当归挥发油对自发性高血压大鼠ACE2/Ang1-7/Mas受体轴的影响

目的:通过观察当归挥发油对自发性高血压大鼠(SHR)ACE2/[Ang(1-7)]/Mas受体轴表达的影响,探讨当归挥发油降压的作用机制。方法:将40只8周龄雄性SHR随机分为模型对照组、低剂量当归治疗组、高剂量当归治疗组、卡托普利治疗组,每组8只;并用同周龄的Wistar大鼠作为空白对照组。各组大鼠分别灌胃4周后,ELISA法检测血清中肾素、Ang(1-7)水平,QT-PCR法检测Mas mRNA表达量,Western blotting检测Mas蛋白的表达水平。结果:与模型对照组相比,低剂量当归治疗组、高剂量当归治疗组血清肾素水平均有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05),低剂量当归治疗组、高剂量当归治疗组Ang(1-7)表达水平均较模型对照组升高,但差异无统计学意义(P>0.05),低剂量当归治疗组、高剂量当归治疗组Mas受体mRNA及蛋白表达水平均较模型对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:当归挥发油对SHR血压有调节作用,可能通过ACE2/[Ang(1-7)]/Mas受体轴拮抗ACE系统发挥降压作用。

基于ACE/AngⅡ/AT1R通路探讨补肾降压方对盐敏感性高血压大鼠肾纤维化的作用机制

目的:探讨补肾降压方对盐敏感性高血压DS大鼠肾纤维化及肾素血管紧张素转换酶-血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体(ACE-AngⅡ-AT1R)信号通路的调节作用,探讨其防治高血压肾损害的作用机制。方法:选用盐敏感性高血压大鼠(Dahl salt-sensitve,DS)48只,随机数字表法分为低盐组、高盐组、缬沙坦组和补肾降压组,喂食以不同浓度钠盐饲料造模后,予药物干预8周。于干预前后测量血压。干预后酶联免疫吸附测定(ELISA)血清中血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))的含量。苏木精-伊红(HE)染色观察肾组织病理学改变情况,Masson染色观察肾纤维化程度。反转录PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹法分别检测肾脏血管紧张素转化酶(ACE)及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)mRNA及蛋白表达水平。结果:喂食3周不同浓度盐后,喂食高盐各组收缩压均较低盐组升高(P<0.01)。干预后,与低盐组比较,高盐组收缩压升高,Cr、BUN升高,血清AngⅡ及TGF-β_(1)水平升高,HE及Masson染色显示肾脏纤维化程度加重,肾脏ACE及AT1R蛋白及mRNA表达升高(P<0.01)。与高盐组比较,缬沙坦组及补肾降压组收缩压降低,Cr、BUN降低,血清AngⅡ及TGF-β_(1)水平降低,肾脏纤维化程度减轻,肾脏ACE及AT1R蛋白及mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾降压方有平稳降压,改善肾功能的作用,其作用机制可能与调节ACE/AngⅡ/AT1R轴进而抑制TGF-β_(1)达到延缓肾纤维化相关。

Ang1、Ang2及其受体Tie2在血管瘤组织中的表达及意义

目的探讨血管瘤的血管生成与促血管生成素家族（Ang/Tie2）之间的关系。方法通过免疫组化SP法、RT-PCR检测增生期血管瘤17例、消退期血管瘤13例和小儿正常皮肤10例的组织中促血管生成素1（Ang1）、促血管生成素2（Ang2）及其受体Tie2的表达情况。结果增生期血管瘤组织Ang2、Tie2表达高于消退期血管瘤（P〈0.01）;Ang2、Tie2在小儿正常皮肤表达较弱或阴性;Ang1在血管瘤和小儿正常皮肤表达均较弱或阴性,二者比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论Ang/Tie2体系在血管瘤的增生和消退过程中可能起重要的作用。

奥司他韦对肺炎幼鼠ACE2/Ang(1-7)/Mas受体轴及肺损伤的影响

目的 研究奥司他韦对肺炎幼鼠ACE2/Ang(1-7)/Mas受体轴、肺损伤及炎症水平的影响。方法 SPF级SD雄性幼鼠50只随机抽取12只作为健康组,剩余38只幼鼠建立流感病毒模型。建模中意外死亡2只,随机数字表法将建模成功的36只幼鼠分为模型组、奥司他韦组及对照组,每组各12只。健康组与模型组幼鼠常规饲养,奥司他韦组幼鼠给予10 mg/kg奥司他韦灌胃,1次/d,持续5 d;对照组幼鼠经尾静脉注射75 mg/mL阿奇霉素,1次/d,持续1周。另取40只SPF级幼鼠建立病毒性肺炎模型后分为激动剂组、抑制剂组、激动剂+奥司他韦组、抑制剂+奥司他韦组,共诊治7 d,1次/d。ELISA检测各组IL-6、IL-8、TNF-α水平。小动物肺功能检测仪检测各组肺功能指标。HE染色观察各组肺炎幼鼠肺组织病理形态。TUNEL检测各组幼鼠肺组织细胞凋亡。免疫印迹检测各组幼鼠ACE2、Ang(1-7)、MasR、ACE、AngⅡ蛋白表达水平。结果 与健康组相比,模型组、奥司他韦组与对照组幼鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α、肺组织细胞凋亡率升高(P<0.05),在经过奥司他韦干预后IL-6、IL-8、TNF-α、肺组织细胞凋亡率均降低(P<0.05)。与健康组相比,模型组FEF50、FEF75、MMF、PEF水平降低(P<0.05),肺系数升高(P<0.05),在经过奥司他韦干预后FEF50、FEF75、MMF、PEF水平升高(P<0.05),肺系数降低(P<0.05)。各组肺组织病理形态对比明显。与健康组相比,模型组、奥司他韦组、对照组、抑制剂组、激动剂组、激动剂+奥司他韦组与抑制剂+奥司他韦组ACE2、Ang(1-7)、MasR水平降低(P<0.05),ACE、AngⅡ水平升高(P<0.05);与模型组相比,奥司他韦组、对照组、激动剂组、激动剂+奥司他韦组ACE2、Ang(1-7)、MasR水平升高(P<0.05),ACE、AngⅡ水平降低(P<0.05),抑制剂组ACE2、Ang(1-7)、MasR水平降低(P<0.05),ACE、AngⅡ水平升高(P<0.05);模型组与抑制剂+奥司他韦组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,奥司他韦组、激动剂组、激动剂+奥司他韦组ACE2、Ang(1-7)、MasR水平升高(P<0.05),ACE、AngⅡ水平降低(P<0.05);奥司他韦组与激动剂组各指标比较差异无统计学意义(P>0.05);与奥司他韦组相比,激动剂+奥司他韦组ACE2、Ang(1-7)、MasR水平升高(P<0.05),ACE、AngⅡ水平降低(P<0.05)。结论 奥司他韦通过提高ACE2/Ang(1-7)/Mas受体轴水平及降低炎症因子水平,改善肺炎幼鼠肺功能。

二脒那秦通过内源性激活ACE2抑制AngⅡ-TGF-β1通路缓解小鼠肺纤维化

本试验通过博来霉素诱导建立小鼠肺纤维化损伤模型,探究二脒那秦(diminazene aceturate,DIZE)内源性激活血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)对小鼠肺纤维化发生发展的缓解作用。将24只雄性ICR小鼠随机均分为对照组(CON组)、模型组(MOD组)和二脒那秦处理组(DIZE组)。除CON组外,其余2组小鼠一次性气管内注射博来霉素(5 mg·kg^(-1))建立肺纤维化损伤模型。造模1 d后,DIZE组小鼠给予DIZE[15 mg·(kg·d)^(-1)]灌胃处理,CON组和MOD组小鼠同等剂量灌胃生理盐水。连续灌胃28 d,采血后,处死所有小鼠,取肺组织,进行如下试验:(1)肺组织称重,计算小鼠肺系数;HE和Masson染色观察肺病理组织学变化;碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸的含量;(2)间接ELISA法检测血清中AngⅡ和Ang 1-7含量;(3)RT-qPCR及Western blot法检测肺组织中纤维化相关因子基因和蛋白等的表达水平。结果表明:(1)与CON组相比,MOD组小鼠肺系数及羟脯氨酸含量极显著或显著升高(P<0.01&P<0.05);肺组织出现明显病理变化,主要表现肺泡塌陷,炎性细胞浸润,肺泡间隔充血、增厚,有大量胶原纤维沉积。经DIZE处理后肺系数及羟脯氨酸含量显著或极显著降低(P<0.05&P<0.01);肺纤维化程度明显减轻;(2)与CON组相比,MOD组小鼠肺组织中ACE2蛋白表达下调,血清中AngⅡ含量极显著升高(P<0.01),Ang 1-7含量极显著降低(P<0.01);DIZE处理逆转了以上变化;(3)与CON组相比,MOD组小鼠肺组织中Col1a1和Col3a1基因表达极显著上调(P<0.01),α-SMA及TGF-β1基因和蛋白表达均极显著上调(P<0.01),上皮细胞的特征蛋白E-cadherin蛋白表达极显著下调(P<0.01);与MOD组相比,DIZE组缓解了以上变化。一次性气管内注射博来霉素,28 d后可成功诱导小鼠肺纤维化损伤,高水平的AngⅡ可能协同TGF-β1参与了小鼠的肺纤维化;DIZE可能通过内源性激活ACE2,降低AngⅡ的高水平,对小鼠的肺纤维化具有一定的缓解作用。

蛴螬提取物不同途径给药对激光诱导鼠眼CNV模型的影响

目的:研究蛴螬提取物不同途径给药对对激光诱导鼠眼CNV模型的影响及作用机制。方法:将BN大鼠32只随机分成空白组、模型组、口服组、滴眼组。采用激光诱导建立CNV活体模型,口服组、滴眼组分别予以蛴螬提取物口服和滴眼干预。分别在用药后1W、2W、3W、4W行眼底照相、FFA、OCT检查,观察CNV的形成情况,在2W、4W时对视网膜Ang1、HTRA1、VEGF进行检测。结果:两种给药方式均能有效减轻眼底视网膜血管荧光渗漏,促进瘢痕形成,稳定视网膜各层正常的结构及功能,减少激光对视网膜外屏障的损伤,减少新生血管形成,促进有效侧支循环的建立。新生血管形成率比较有统计学差异(P<0.05)。2W时,造模各组视网膜组织中Ang1、VEGF表达增强,模型组与其他三组比较均有统计学差异(P<0.01,P<0.05),口服组、滴眼组比较均无统计学差异(P>0.05)。HTRA1表达各组间比较均无统计学差异(P>0.05)。4W时,Ang1表达水平下降,各组间比较均无统计学差异(P>0.05),HTRA1、VEGF仍维持高表达。模型组与其他三组比较均有统计学差异(P<0.05),口服组与滴眼组比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:蛴螬提取物对激光诱导CNV活体模型不同时期Ang1、HTRA1、VEGF的高表达具有明显抑制作用。进而表明蛴螬提取物对激光诱导的CNV形成的早期及晚期均有抑制作用,且口服和滴眼效用一致。