AO/EB染色法及流式细胞术检测DMF诱导人肝细胞凋亡

目的观察二甲基甲酰胺(DMF)诱导正常成人离体肝细胞凋亡情况。方法以50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L和200mmol/L剂量DMF对正常成人离体肝细胞染毒。采用AO/EB双重染色法进行形态学观察;流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果AO/EB染色可见:活细胞核染色质着绿色,死亡细胞核染色质着橘红色,晚期凋亡细胞核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状,早期凋亡细胞核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状。染毒组早期凋亡细胞多于阴性对照组,随剂量增高,晚期凋亡细胞和死亡细胞也增多。不同剂量组间染毒24小时后,流式细胞术散点图可见,随染毒剂量增加,活细胞率逐渐下降,以200mmol/L剂量组的活细胞率最低。经单因素方差分析,空白对照组和各剂量组间早期凋亡细胞占细胞总数的百分率差异有统计学意义(F=8.299,P<0.01),随染毒剂量增高,早期凋亡细胞率增加。结论一定浓度的DMF能诱导正常成人离体肝细胞发生凋亡,其早期凋亡率有随DMF浓度的增高而增高的趋势。

AO/EB双重荧光染色检测细胞凋亡的研究

目的：检测细胞培养中凋亡细胞的形态及数量。方法：取４℃环境下不同时间培养的小鼠胸腺细胞，用ＡＯ／ＥＢ染色后荧光镜观察。结果：荧光镜下早期凋亡细胞发绿色或暗绿色荧光，伴有核结构的变化，晚期凋亡细胞发橙红色荧光并伴有凋亡小体的形成。结论：ＡＯ和ＥＢ双重荧光染色后，荧光镜检在细胞凋亡检测中既可定性，又可定量。

牛黄天龙胶囊(含药血清)诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡及其机制

目的观察牛黄天龙胶囊(含药血清)对人子宫内膜癌HEC-B细胞能否诱导凋亡并对其抗癌机制进行探讨。方法实验组分低、中、高3个剂量组并设空白组和阳性对照组进行含药血清的制备;MTT法观察细胞毒作用;细胞排染法观察瘤细胞直接损害实验;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法及电镜(TEM)下观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡率并进行细胞周期分析,测定凋亡抑制蛋白survivin和凋亡效应蛋白Caspase-3的表达。结果MTT法:人子宫内膜癌HEC-B细胞经含药血清作用后细胞生长受到明显抑制且以低剂量组抑制率最高。细胞排染法:同一时间段内以低剂量组效果最好,不同时间段内(24、48h)细胞抑制率显著提高(P<0.01)。AO/EB和TEM:实验组均可见到典型细胞凋亡的形态学变化。FCM:实验组各组细胞凋亡率与空白组相比差异有显著性(P<0.01)且以低剂量组最高,细胞周期分析显示实验组G0/G1期细胞明显增多而S期细胞明显减少与空白组相比差异有显著性(P<0.01),Survivin蛋白表达在空白组最高,在实验组表达降低与空白组相比差异有显著性(P<0.01),Caspase-3表达则相反,在实验组表达最高与空白组相比差异有显著性(P<0.01)。结论复方中药“牛黄天龙胶囊”(含药血清)能够使人子宫内膜癌HEC-B细胞生长阻滞在G0/G1期并可诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡;并可降低凋亡抑制蛋白survivin表达同时可提高凋亡效应蛋白Caspase-3表达,这可能是其诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡的机制之一;对人子宫内膜癌HEC-B细胞的抗肿瘤作用并非浓度越大效果越好而有一最适剂量。

蟾酥注射液诱导人膀胱癌细胞T24、BIU-87凋亡的研究

目的验证蟾酥注射液的抗癌活性。方法将T24细胞、BIU-87细胞分别接种于RPMI1640培养液中37℃孵育，并在多个时间点取细胞悬液加入AO／EB染料染色，在荧光显微镜下观察。结果在0、3、6、12、24和48h时，T24细胞的凋亡率分别为3．0％、12．5％、59．5％、66，5％、70．O％和63．5％，BIU-87细胞的凋亡率分别为2．0％、13．5％、55．5％、62．5％、68．5％和64．0％。结论蟾酥注射液可显著诱导T24细胞、BIU-87细胞凋广，在体外具有抗癌活性。

连花清瘟胶囊对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制与诱导凋亡作用的观察

目的：研究连花清瘟胶囊抗肿瘤的药理作用。方法应用MTT法检测连花清瘟胶囊对乳腺癌 MCF－7细胞增殖的抑制程度，AO／EB双荧光染色法检测细胞凋亡形态，DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞 DNA 片段。结果在浓度为200～2667μg· mL －1内，连花清瘟胶囊对乳腺癌MCF－7细胞的增殖有显著的抑制作用，其抑制作用随药物浓度的增加而增强，对MCF－7细胞增殖抑制率由10．50％增加到43．83％，与对照组比较呈显著差异性（P＜0．05vs正常组）。连花清瘟胶囊明显影响乳腺癌MCF－7细胞的染色质，发生固缩等凋亡形态的变化及细胞凋亡的 DNA梯带形状。结论连花清瘟胶囊具有抑制乳腺癌细胞增殖和诱导其凋亡的抗肿瘤的药理作用。

不同粒径纳米氧化铝对体外培养神经细胞凋亡的影响

[目的]体外检测不同粒径纳米氧化铝颗粒对昆明乳鼠神经细胞凋亡的影响。[方法]透射电镜观察纳米氧化铝形态与尺寸,以10nm、50nm、10μm Al2O3同剂量对体外培养的昆明乳鼠进行染毒,运用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK-8)试剂检测细胞活力,用吖啶橙/溴化乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)双重染色法观察细胞死亡的形态学,采用Rhodamine123染色方法检测线粒体膜电位变化情况,间接反映早期凋亡变化,应用流式细胞仪测定各染毒组细胞凋亡。[结果]纳米粒子超声后,静置前后相比,电镜下可见纳米粒子均匀分布,且粒径小于100nm符合实验要求;AO/EB染色后,细胞形态学发生明显改变;罗丹明测线粒体膜电位,随着纳米氧化铝粒径的减小,膜电位逐渐降低;应用流式细胞术检测凋亡,随着纳米氧化铝粒径的减小,凋亡率逐渐增加。[结论]氧化铝颗粒能够引起原代培养的神经细胞凋亡,且粒径能够影响细胞凋亡率。