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AO/EB染色观察华蟾素诱导体外肿瘤细胞凋亡 被引量:36
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作者 左小东 秦叔逵 +1 位作者 陈惠英 王锦鸿 《临床肿瘤学杂志》 CAS 1999年第3期35-39,共5页
目的:观察华蟾素诱导肿瘤细胞凋亡的变化规律,找出最佳诱导剂量及最佳诱导时间.方法:采用人肝癌SMMC-7721和人胃癌MGC-80-3细胞株,以AO/EB染色对华赡素不同浓度及作用时间下细胞凋亡的形态变化进行观察,并定量计算出凋亡率.结果:在荧光... 目的:观察华蟾素诱导肿瘤细胞凋亡的变化规律,找出最佳诱导剂量及最佳诱导时间.方法:采用人肝癌SMMC-7721和人胃癌MGC-80-3细胞株,以AO/EB染色对华赡素不同浓度及作用时间下细胞凋亡的形态变化进行观察,并定量计算出凋亡率.结果:在荧光显微镜下可区分早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞、活细胞及坏死细胞.华蟾素诱导细胞凋亡的最佳浓度为0.12μg/ml,最佳诱导时间为20 小时左右.结论:华蟾素具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用.运用AO/EB染色研究细胞凋亡,具有方便、准确、可靠、便宜等优点,并能区分凋亡细胞及坏死细胞,值得推广运用. 展开更多
关键词 染色法 华蟾素 肿瘤细胞 细胞凋亡 肝癌 胃癌 细胞培养
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AO/EB染色法及流式细胞术检测DMF诱导人肝细胞凋亡 被引量:15
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作者 路艳艳 杨锦蓉 王菁 《浙江预防医学》 2007年第6期11-14,共4页
目的观察二甲基甲酰胺(DMF)诱导正常成人离体肝细胞凋亡情况。方法以50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L和200mmol/L剂量DMF对正常成人离体肝细胞染毒。采用AO/EB双重染色法进行形态学观察;流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果AO/EB染色可... 目的观察二甲基甲酰胺(DMF)诱导正常成人离体肝细胞凋亡情况。方法以50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L和200mmol/L剂量DMF对正常成人离体肝细胞染毒。采用AO/EB双重染色法进行形态学观察;流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果AO/EB染色可见:活细胞核染色质着绿色,死亡细胞核染色质着橘红色,晚期凋亡细胞核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状,早期凋亡细胞核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状。染毒组早期凋亡细胞多于阴性对照组,随剂量增高,晚期凋亡细胞和死亡细胞也增多。不同剂量组间染毒24小时后,流式细胞术散点图可见,随染毒剂量增加,活细胞率逐渐下降,以200mmol/L剂量组的活细胞率最低。经单因素方差分析,空白对照组和各剂量组间早期凋亡细胞占细胞总数的百分率差异有统计学意义(F=8.299,P<0.01),随染毒剂量增高,早期凋亡细胞率增加。结论一定浓度的DMF能诱导正常成人离体肝细胞发生凋亡,其早期凋亡率有随DMF浓度的增高而增高的趋势。 展开更多
关键词 DMF染毒 肝细胞 凋亡 ao/eb染色 流式细胞术
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AO/EB双重荧光染色检测细胞凋亡的研究 被引量:5
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作者 熊琛 陈绪云 +1 位作者 郭怀兰 杨靖 《郧阳医学院学报》 1997年第2期68-69,共2页
目的:检测细胞培养中凋亡细胞的形态及数量。方法:取4℃环境下不同时间培养的小鼠胸腺细胞,用AO/EB染色后荧光镜观察。结果:荧光镜下早期凋亡细胞发绿色或暗绿色荧光,伴有核结构的变化,晚期凋亡细胞发橙红色荧光并伴有凋亡... 目的:检测细胞培养中凋亡细胞的形态及数量。方法:取4℃环境下不同时间培养的小鼠胸腺细胞,用AO/EB染色后荧光镜观察。结果:荧光镜下早期凋亡细胞发绿色或暗绿色荧光,伴有核结构的变化,晚期凋亡细胞发橙红色荧光并伴有凋亡小体的形成。结论:AO和EB双重荧光染色后,荧光镜检在细胞凋亡检测中既可定性,又可定量。 展开更多
关键词 荧光染色 细胞凋亡 双重荧光染色
全文增补中
牛黄天龙胶囊(含药血清)诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡及其机制 被引量:4
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作者 田彦玲 王玉花 +1 位作者 程建新 刘京生 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期417-421,475,共6页
目的观察牛黄天龙胶囊(含药血清)对人子宫内膜癌HEC-B细胞能否诱导凋亡并对其抗癌机制进行探讨。方法实验组分低、中、高3个剂量组并设空白组和阳性对照组进行含药血清的制备;MTT法观察细胞毒作用;细胞排染法观察瘤细胞直接损害实验;吖... 目的观察牛黄天龙胶囊(含药血清)对人子宫内膜癌HEC-B细胞能否诱导凋亡并对其抗癌机制进行探讨。方法实验组分低、中、高3个剂量组并设空白组和阳性对照组进行含药血清的制备;MTT法观察细胞毒作用;细胞排染法观察瘤细胞直接损害实验;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法及电镜(TEM)下观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡率并进行细胞周期分析,测定凋亡抑制蛋白survivin和凋亡效应蛋白Caspase-3的表达。结果MTT法:人子宫内膜癌HEC-B细胞经含药血清作用后细胞生长受到明显抑制且以低剂量组抑制率最高。细胞排染法:同一时间段内以低剂量组效果最好,不同时间段内(24、48h)细胞抑制率显著提高(P<0.01)。AO/EB和TEM:实验组均可见到典型细胞凋亡的形态学变化。FCM:实验组各组细胞凋亡率与空白组相比差异有显著性(P<0.01)且以低剂量组最高,细胞周期分析显示实验组G0/G1期细胞明显增多而S期细胞明显减少与空白组相比差异有显著性(P<0.01),Survivin蛋白表达在空白组最高,在实验组表达降低与空白组相比差异有显著性(P<0.01),Caspase-3表达则相反,在实验组表达最高与空白组相比差异有显著性(P<0.01)。结论复方中药“牛黄天龙胶囊”(含药血清)能够使人子宫内膜癌HEC-B细胞生长阻滞在G0/G1期并可诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡;并可降低凋亡抑制蛋白survivin表达同时可提高凋亡效应蛋白Caspase-3表达,这可能是其诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡的机制之一;对人子宫内膜癌HEC-B细胞的抗肿瘤作用并非浓度越大效果越好而有一最适剂量。 展开更多
关键词 血清药理学 细胞凋亡 ao/eb双荧光染色法 TEM FCM
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中药“龙泉复方”的不同配伍对肿瘤细胞系HepG-2和EC-1增殖的影响 被引量:2
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作者 李劲 邓志芳 +6 位作者 高雯琪 胡文娟 刘莹 姚品芳 李广灿 陈焕朝 梅之南 《中南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2011年第1期46-49,共4页
通过MTT(四甲基偶氮唑盐)法绘制细胞增殖曲线观察药物对肝癌细胞系HepG-2和食管鳞癌细胞系EC-1细胞增殖的影响,用荧光染色法进一步确定"龙泉复方"有效成分诱导细胞凋亡的较佳配伍及其有效作用浓度范围.结果表明:对抑制HepG-2细胞... 通过MTT(四甲基偶氮唑盐)法绘制细胞增殖曲线观察药物对肝癌细胞系HepG-2和食管鳞癌细胞系EC-1细胞增殖的影响,用荧光染色法进一步确定"龙泉复方"有效成分诱导细胞凋亡的较佳配伍及其有效作用浓度范围.结果表明:对抑制HepG-2细胞增殖有效作用的浓度:七味单方(马钱子、山慈菇、喜树果、龙葵、石上柏、青黛、紫菀)浸膏混合物和龙葵单方浸膏均〈125μg/mL,七味药物复方总浸膏为250~1000μg/mL;对抑制EC-1细胞增殖有效作用的浓度:三味药物混合浸膏(马钱子,喜树果、青黛提取的浸膏的混合物)〈50μg/mL和150~400μg/mL,七味单方混合浸膏〈25μg/mL和50~400μg/mL,喜树果单方浸膏为25μg/mL和50~200μg/mL;3种浸膏促进EC-1细胞增殖的浓度依次为:50~100、25~50、25~50μg/mL.通过对EC-1荧光染色观察发现诱导细胞凋亡的有效作用浓度:七位单方浸膏混合物为5~10μg/mL,三味药复方混合浸膏为10~25μg/mL,喜树果约为50μg/mL.研究结果提示,药物浓度范围和细胞系的不同导致其效果也不尽相同,临床应据具体情况调整,使之用药少效果佳. 展开更多
关键词 龙泉复方 配伍 药物浓度 肿瘤细胞 MTT(四甲基偶氮唑盐)法 ao/eb染色法
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体外扩增CIK细胞对结肠癌SW480细胞株杀伤作用的研究 被引量:2
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作者 池小钜 刘汉锋 蓝东 《广西医科大学学报》 CAS 2014年第3期372-377,共6页
目的:观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)体外增值情况,了解其扩增后杀伤结肠癌SW480细胞株最佳比例及最有效的维持时间.方法:分离健康人外周血单个核细胞在体外诱导制备成CIK细胞,计数不同培养时间的CIK细胞,采用流式细胞仪检测... 目的:观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)体外增值情况,了解其扩增后杀伤结肠癌SW480细胞株最佳比例及最有效的维持时间.方法:分离健康人外周血单个核细胞在体外诱导制备成CIK细胞,计数不同培养时间的CIK细胞,采用流式细胞仪检测其表型特征.倒置显微镜下观察CIK细胞作用与SW480结肠癌细胞的形态学变化,采用HE染色、AO/EO荧光染色和MTT法检测CIK细胞对SW480结肠癌细胞株的杀伤活性.结果:CIK细胞在体外培养14 d细胞增殖倍数为(100.22±8.68)倍,培养21 d细胞增殖倍数为(300.86±10.13)倍,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);培养28 d细胞增殖倍数为(305.06±5.13)倍,与培养21 d的细胞增殖倍数比较差异无统计学意义(P>0.05).培养21 d的CIK细胞中CD3+、CD56+双阳性细胞的百分比为(45.3±5.1)%,与28 d相比较差异无统计学意义(P>0.05),第35天细胞增殖(212.50±4.25)倍,呈下降趋势.CIK细胞对结肠癌SW480细胞株有明显的杀伤作用,最高杀伤率为(68.21±1.31)%.结论:CIK细胞具有较强的抗结肠癌细胞活性,体外培养14~21 d具有较强的抗瘤活性,此时应用较为合适.CIK细胞作用于肿瘤细胞应达到一定数量并维持一定时间,可达到较好的抗瘤活性. 展开更多
关键词 CIK细胞 结肠癌SW480 HE染色 ao EO荧光染色 MTT法检测
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蟾酥注射液诱导人膀胱癌细胞T24、BIU-87凋亡的研究 被引量:1
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作者 吴江平 张展东 +2 位作者 江沂 苏宁 杨振淮 《国际医药卫生导报》 2014年第6期743-746,共4页
目的验证蟾酥注射液的抗癌活性。方法将T24细胞、BIU-87细胞分别接种于RPMI1640培养液中37℃孵育,并在多个时间点取细胞悬液加入AO/EB染料染色,在荧光显微镜下观察。结果在0、3、6、12、24和48h时,T24细胞的凋亡率分别为3.0%、12... 目的验证蟾酥注射液的抗癌活性。方法将T24细胞、BIU-87细胞分别接种于RPMI1640培养液中37℃孵育,并在多个时间点取细胞悬液加入AO/EB染料染色,在荧光显微镜下观察。结果在0、3、6、12、24和48h时,T24细胞的凋亡率分别为3.0%、12.5%、59.5%、66,5%、70.O%和63.5%,BIU-87细胞的凋亡率分别为2.0%、13.5%、55.5%、62.5%、68.5%和64.0%。结论蟾酥注射液可显著诱导T24细胞、BIU-87细胞凋广,在体外具有抗癌活性。 展开更多
关键词 ao eb双荧光染色法 蟾酥注射液 细胞凋亡
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阴极极化对金属电极表面微生物膜的影响 被引量:2
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作者 李相波 王佳 《装备环境工程》 CAS 2004年第3期27-31,共5页
阴极极化对不锈钢表面微生物膜的附着有一定的影响,通过荧光显微镜记数和细菌双染色方法(AO+PI),对在不同电位下极化过的不锈钢表面进行了观察,同时做了对比实验.实验证明在一定的范围内(-800mV~-1000mV),阴极极化对微生物向洁净金属... 阴极极化对不锈钢表面微生物膜的附着有一定的影响,通过荧光显微镜记数和细菌双染色方法(AO+PI),对在不同电位下极化过的不锈钢表面进行了观察,同时做了对比实验.实验证明在一定的范围内(-800mV~-1000mV),阴极极化对微生物向洁净金属表面的附着有一定的抑制作用,但是对已经附着的微生物膜不能够起到脱除或完全杀灭作用,只能杀死靠近金属表面的微生物.通过模拟膜实验,从侧面证明了只有微生物膜附着而无生物活性时,钝性金属的开路电位不会发生正移. 展开更多
关键词 阴极极化 双染色方法(ao+PI) 模拟膜 开路电位
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连花清瘟胶囊对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制与诱导凋亡作用的观察 被引量:1
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作者 文翔昊 李冲 +2 位作者 郭露 鲁启明 郭玉 《海峡药学》 2014年第12期235-238,共4页
目的:研究连花清瘟胶囊抗肿瘤的药理作用。方法应用MTT法检测连花清瘟胶囊对乳腺癌 MCF-7细胞增殖的抑制程度,AO/EB双荧光染色法检测细胞凋亡形态,DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞 DNA 片段。结果在浓度为200~2667μg· mL -1内... 目的:研究连花清瘟胶囊抗肿瘤的药理作用。方法应用MTT法检测连花清瘟胶囊对乳腺癌 MCF-7细胞增殖的抑制程度,AO/EB双荧光染色法检测细胞凋亡形态,DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞 DNA 片段。结果在浓度为200~2667μg· mL -1内,连花清瘟胶囊对乳腺癌MCF-7细胞的增殖有显著的抑制作用,其抑制作用随药物浓度的增加而增强,对MCF-7细胞增殖抑制率由10.50%增加到43.83%,与对照组比较呈显著差异性(P<0.05vs正常组)。连花清瘟胶囊明显影响乳腺癌MCF-7细胞的染色质,发生固缩等凋亡形态的变化及细胞凋亡的 DNA梯带形状。结论连花清瘟胶囊具有抑制乳腺癌细胞增殖和诱导其凋亡的抗肿瘤的药理作用。 展开更多
关键词 连花清瘟胶囊 乳腺癌MCF-7细胞 MTT法 ao/eb双荧光染色法 DNA琼脂糖凝胶电泳
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茶多酚对Hep-G2细胞活性及形态的影响 被引量:2
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作者 孙警辉 伍春莲 +2 位作者 陈杨琼 耿文峰 张思楠 《西华师范大学学报(自然科学版)》 2011年第2期146-150,共5页
大量研究表明,长期饮茶尤其绿茶者,可大大降低各种癌变的发病率,而且对多种体内外肿瘤具有直接杀伤作用.作者通过采用不同浓度的茶多酚作用于体外培养的肝癌细胞株Hep-G2细胞,初步探讨茶多酚对Hep-G2细胞的凋亡作用.采用MTT法(噻唑蓝比... 大量研究表明,长期饮茶尤其绿茶者,可大大降低各种癌变的发病率,而且对多种体内外肿瘤具有直接杀伤作用.作者通过采用不同浓度的茶多酚作用于体外培养的肝癌细胞株Hep-G2细胞,初步探讨茶多酚对Hep-G2细胞的凋亡作用.采用MTT法(噻唑蓝比色法)和AO-PI(吖啶橙-碘化丙啶)双重荧光染色法研究了茶多酚诱导Hep-G2细胞株的凋亡作用.MTT法研究结果表明,在一定的浓度范围内,茶多酚对Hep-G2细胞有明显的抑制作用,且存在良好的剂量效应关系,随着茶多酚浓度的升高,其对Hep-G2细胞的抑制率也升高.Hep-G2细胞经茶多酚作用后,细胞形态发生明显的变化,可见凋亡小体,荧光强度增强,细胞呈现凋亡现象.茶多酚在体外对Hep-G2细胞的增殖具有抑制作用,诱导其发生凋亡.研究结果为茶多酚的进一步开发应用奠定理论基础. 展开更多
关键词 茶多酚 MTT ao/PI Hep-G2细胞 细胞凋亡
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H_2O_2对人肝癌细胞Hep-G2凋亡的影响
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作者 伍春莲 房守敏 +3 位作者 耿文峰 张思楠 孙警辉 李祥会 《西华师范大学学报(自然科学版)》 2010年第4期342-346,共5页
探讨不同浓度H2O2对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的影响.使用不同浓度(0.01、0.05、0.10、0.20、0.50mmol/L)的H2O2作用于Hep-G2细胞12h,通过丫啶橙-碘化丙啶(AO/PI)双重荧光染色法对Hep-G2细胞的形态变化进行观察;再进行DNA的提取和琼... 探讨不同浓度H2O2对人肝癌细胞株Hep-G2细胞凋亡的影响.使用不同浓度(0.01、0.05、0.10、0.20、0.50mmol/L)的H2O2作用于Hep-G2细胞12h,通过丫啶橙-碘化丙啶(AO/PI)双重荧光染色法对Hep-G2细胞的形态变化进行观察;再进行DNA的提取和琼脂糖凝胶电泳观察DNA断裂情况.结果表明:不同浓度的H2O2处理后在荧光显微镜下可以区分正常对照细胞(0mmol/L)、染色质凝聚的早期凋亡细胞(0.01、0.05mmol/L)、细胞质皱缩和细胞核解体的晚期凋亡细胞(0.10、0.20mmol/L)和降解细胞(0.50mmol/L),在一定时间内随H2O2浓度的增加而增大,呈现浓度依赖性.DNA电泳结果显示发生凋亡的细胞基因组DNA形成弥散条带,从而表现出体外细胞凋亡的特征.因此,H2O2可以诱导Hep-G2细胞凋亡. 展开更多
关键词 H2O2 Hep-G2细胞 ao/PI 细胞凋亡 DNA
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Identification and characterization of cell cultures with various embryogenic/regenerative potential in cotton based on morphological,cytochemical,and cytogenetical assessment
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作者 GUO Hui-hui WU Jian-fei +8 位作者 CHEN Cui-xia WANG Hong-mei ZHAO Yun-lei ZHANG Chao-jun JIA Yin-hua LIU Fang NING Tang-yuan CHU Zhao-hui ZENG Fan-chang 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2019年第1期1-8,共8页
Somatic embryogenesis(SE) plays a vital role in genetic transformation and massive propagation of important agronomical and economical crops.Here,we conducted a systematic assessment of the morphological,cytochemical,... Somatic embryogenesis(SE) plays a vital role in genetic transformation and massive propagation of important agronomical and economical crops.Here,we conducted a systematic assessment of the morphological,cytochemical,and cytogenetical characteristics of six culture strains with various embryogenic/regenerative potential during SE process in cotton.Results indicated that the six cell culture strains had stable ploidy levels,and did not reveal any relationship between the cytogenetic state and their morphogenetic potential.Moreover,the six culture strains were compared via double staining with Evans blue and Acetocarmine to efficiently distinguish embryogenic and non-embryogenic cells and determine the embryogenic nature of the calli.In addition,the kind of auxins added in medium affected not only growth property,color,size of cell clumps but also ploidy level and regeneration ability.By combining analysis of morphological,cytochemical,and cytogenetical characteristics of the cell cultures,we are able to obtain and maintain homogeneous cell population with high morphogenic and regeneration ability and establish efficient somatic embryogenesis and regeneration system from short-term cell cultures in upland cotton,which highlight the application of biotechnological approaches in crop breeding,and above all,to better understand totipotency of cells in higher plants. 展开更多
关键词 COTTON SOMATIC EMBRYOGENESIS COTTON cell culture strains cytochemical eb-AC double staining cytogenetical PLOIDY stability embryogenic/regenerative potential morphology
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不同粒径纳米氧化铝对体外培养神经细胞凋亡的影响 被引量:8
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作者 葛翠翠 李伟庆 +1 位作者 张勤丽 牛侨 《环境与职业医学》 CAS 北大核心 2012年第2期72-76,共5页
[目的]体外检测不同粒径纳米氧化铝颗粒对昆明乳鼠神经细胞凋亡的影响。[方法]透射电镜观察纳米氧化铝形态与尺寸,以10nm、50nm、10μm Al2O3同剂量对体外培养的昆明乳鼠进行染毒,运用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK-8)试剂检测... [目的]体外检测不同粒径纳米氧化铝颗粒对昆明乳鼠神经细胞凋亡的影响。[方法]透射电镜观察纳米氧化铝形态与尺寸,以10nm、50nm、10μm Al2O3同剂量对体外培养的昆明乳鼠进行染毒,运用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK-8)试剂检测细胞活力,用吖啶橙/溴化乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)双重染色法观察细胞死亡的形态学,采用Rhodamine123染色方法检测线粒体膜电位变化情况,间接反映早期凋亡变化,应用流式细胞仪测定各染毒组细胞凋亡。[结果]纳米粒子超声后,静置前后相比,电镜下可见纳米粒子均匀分布,且粒径小于100nm符合实验要求;AO/EB染色后,细胞形态学发生明显改变;罗丹明测线粒体膜电位,随着纳米氧化铝粒径的减小,膜电位逐渐降低;应用流式细胞术检测凋亡,随着纳米氧化铝粒径的减小,凋亡率逐渐增加。[结论]氧化铝颗粒能够引起原代培养的神经细胞凋亡,且粒径能够影响细胞凋亡率。 展开更多
关键词 不同粒径纳米氧化铝 细胞凋亡 ao/eb双重染色 线粒体膜电位 流式细胞术
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