AO/EB染色观察华蟾素诱导体外肿瘤细胞凋亡

目的:观察华蟾素诱导肿瘤细胞凋亡的变化规律,找出最佳诱导剂量及最佳诱导时间.方法:采用人肝癌SMMC-7721和人胃癌MGC-80-3细胞株,以AO/EB染色对华赡素不同浓度及作用时间下细胞凋亡的形态变化进行观察,并定量计算出凋亡率.结果:在荧光显微镜下可区分早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞、活细胞及坏死细胞.华蟾素诱导细胞凋亡的最佳浓度为0.12μg/ml,最佳诱导时间为20 小时左右.结论:华蟾素具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用.运用AO/EB染色研究细胞凋亡,具有方便、准确、可靠、便宜等优点,并能区分凋亡细胞及坏死细胞,值得推广运用.

AO/EB染色法及流式细胞术检测DMF诱导人肝细胞凋亡

目的观察二甲基甲酰胺(DMF)诱导正常成人离体肝细胞凋亡情况。方法以50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L和200mmol/L剂量DMF对正常成人离体肝细胞染毒。采用AO/EB双重染色法进行形态学观察;流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果AO/EB染色可见:活细胞核染色质着绿色,死亡细胞核染色质着橘红色,晚期凋亡细胞核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状,早期凋亡细胞核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状。染毒组早期凋亡细胞多于阴性对照组,随剂量增高,晚期凋亡细胞和死亡细胞也增多。不同剂量组间染毒24小时后,流式细胞术散点图可见,随染毒剂量增加,活细胞率逐渐下降,以200mmol/L剂量组的活细胞率最低。经单因素方差分析,空白对照组和各剂量组间早期凋亡细胞占细胞总数的百分率差异有统计学意义(F=8.299,P<0.01),随染毒剂量增高,早期凋亡细胞率增加。结论一定浓度的DMF能诱导正常成人离体肝细胞发生凋亡,其早期凋亡率有随DMF浓度的增高而增高的趋势。

AO/EB双重荧光染色检测细胞凋亡的研究

目的：检测细胞培养中凋亡细胞的形态及数量。方法：取４℃环境下不同时间培养的小鼠胸腺细胞，用ＡＯ／ＥＢ染色后荧光镜观察。结果：荧光镜下早期凋亡细胞发绿色或暗绿色荧光，伴有核结构的变化，晚期凋亡细胞发橙红色荧光并伴有凋亡小体的形成。结论：ＡＯ和ＥＢ双重荧光染色后，荧光镜检在细胞凋亡检测中既可定性，又可定量。

预处理-水解酸化-AO工艺处理印染废水

常州某染织有限公司采用预处理 水解酸化 AO工艺处理棉布、棉纱印染废水。运行结果表明,该工艺处理效果良好,且适应多种水质的处理。出水水质达到《中华人民共和国综合排放标准》(GB8978 1996 )中的一级标准,废水处理站的运行成本为1 85 1元t。

印染废水的改性凹凸棒土强化AO系统处理工艺

针对工业园区印染废水难生物降解的特性,研究AO系统投加改性凹凸棒土(ATP)对生物处理的影响。结果表明AO系统投加2g/L改性ATP后,COD去除率平均提高8.2%,提高NH_4^+进水浓度至50 mg/L时NH_4^+去除率提升超过7%,抗冲击负荷能力增强;SV_(30)平均降低8.5%,MLVSS和SOUR分别提高411 mg/L和1.52 mg O_2/(g VSS·h);活性污泥具备更好的生物相。其证明投加改性ATP可以强化活性污泥污染物降解能力,改善污泥沉降性能,提高微生物种群数量及活性,增强污泥系统整体稳定性。

微电解/AO法处理铬金属络合染料废水

油溶性铬金属络合染料废水不仅污染负荷较大,而且含有较稳定的铬络合离子,传统的氢氧化物沉淀法去除效率低,出水很难达标。采用两级强化的微电解系统进行预处理,可去除99%以上的总铬。预处理出水接AO生化池处理后,出水水质达到《污水综合排放标准》(GB8978—1996)的一级标准。

两级AO工艺强化处理印染废水

某项目采用两级AO工艺处理水量为2400 m^(3)/d的浙江某印染企业废水,其初始COD、TP、NH_(3)-N、TN最高分别为4110 mg/L、2.3 mg/L、11.3 mg/L、21.2 mg/L。运行结果表明,该工艺的COD、TP、NH_(3)-N和TN的平均去除率分别达到97.9%、85.8%、49.6%和38.1%,出水水质达到《纺织染整工业水污染物排放标准》(GB 4287-2012)中的间接排放标准,其中出水量的50%经反渗透膜法深度处理后水质可满足《纺织染整工业回用水水质标准》(FZT 01107-2011)要求。

DEHP致草鱼肝细胞凋亡的三种检测方法分析

为了验证邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)所致细胞凋亡的最佳检测方法,本文以对数生长期的草鱼肝细胞为实验对象,通过3种不同检测方法,即AO/EB染色、Hoechst 33342染色以及Rhodamine123染色来对比研究DEHP对草鱼肝细胞凋亡的影响并比较检测方法之间的优缺点。结果显示,在三种染色方法中均可见到草鱼肝细胞凋亡现象。AO/EO染色可区分四种细胞形态,但仅可在细胞悬液状态下使用且EB染料对人体有一定毒害作用。Hoechst 33342染色易区分正常细胞与凋亡细胞,但少数细胞的染色结果会与实际凋亡情况相反,因此该染色方法不应单独使用。Rhodamine123染色对细胞无任何毒性作用可在第一时间提示细胞凋亡的发生,但染色可能与线粒体能量状态无关,染色剂在细胞内保留性差,膜电位的变化也可能由其他因素导致,使测量结果没有指向性。综上所述,三种检测方法均表明DEHP可以诱导草鱼肝细胞凋亡,将对水生生物造成严重威胁。若要真正有效的反映细胞发生凋亡的情况,需结合多种染色方法综合分析。

天丝织物表面改性对活性染料喷墨印花的影响

天丝织物表面改性能够再次构建织物的表面特征,有利于抑制墨滴在纤维表面的铺展、扩散和固着。为了改善活性染料喷墨印花天丝织物得色较浅且清晰度较差的问题,采用海藻酸钠(SA)与α-烯基磺酸钠(AOS)对天丝织物改性后喷墨印花,分析SA和AOS改性对天丝织物的表观颜色深度、图案印花清晰度、色牢度和力学性能的影响。结果表明,与SA改性天丝织物相比,AOS改性天丝织物的喷墨印花颜色深度增加,图案清晰度提升,防渗化效果变好,耐湿摩擦色牢度和断裂强力变化不明显。

水解酸化-A/O-芬顿氧化-曝气生物滤池在印染废水处理中的应用

广东某印染园区污水处理厂总处理规模为6.0万m^(3)/d,回用水工程规模为3.0万m^(3)/d。采用水解酸化-A/O-芬顿氧化-曝气生物滤池组合工艺进行废水处理,出水执行《地表水环境质量标准》(GB3838-2002)V类水标准和广东地标《水污染物排放限值》(DB44/26-2001)第二时段一级排放标准的较严者(总氮除外,总氮执行《纺织染整工业水污染物排放标准》(GB4287-2012)及2015年修改单新建企业水污染物直接排放限值)。该工艺具有处理效果稳定,抗冲击性能强,运行费用低等特点。正式运营出水COD Cr、NH_(3)^(-)N、TN和TP长期稳定在:20.16~34.09、1.30~1.90、7.30~10.48、0.02~0.11 mg/L。系统实际运行成本低于设计值。

全脑缺血再灌注后神经元凋亡的时相和分布特征

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌注后神经元凋亡的时相和分布特征，为神经元损伤的早期干预和继发性脑损害的防治提供实验依据。方法 建立大鼠全脑缺血模型，采用TTC染色、原位细胞凋亡检测（原位末端标记法，TUNEL）及AO／EB荧光比色法观察脑缺血再灌后海马、皮层凋亡发生的数量和分布，用荧光指示剂Fura-2 AM标记，检测脑海马细胞内游离钙的浓度。结果 TUNEL显示再灌注3h海马部位即出现散在凋亡细胞，并向皮层区域扩展，24—48h达高峰；坏死细胞迟于凋亡出现，弥散分布于凋亡细胞周围，再灌注48h后坏死细胞增多，72h最多。AO／EB法显示海马、额叶和顶叶凋亡细胞总数分布在再灌注后24h和72h达高峰，并显著高于对照组（P〈0．05）。TTC染色证实全脑缺血再灌注后不出现梗死灶，而是在海马及大脑皮层有弥散性坏死。胞内[Ca^2＋];各时间点与对照相比匀显著升高（P〈0．01）。结论 全脑缺血再灌后受累神经元经历了由凋亡到死亡的过程，对缺血敏感的海马神经元首先受损，并向顶叶和额叶皮层扩展，细胞质内[Ca^2＋]i增加是主要原因。利用凋亡时间窗进行早期干预可能有益于保护和挽救凋亡前期神经元，减小继发性损害的严重程度。

去甲斑蝥素通过JAK-STAT3途径诱导结肠癌LS-174T细胞凋亡

目的探讨去甲斑蝥素(NCTD)诱导结肠癌LS-174T细胞的凋亡效应及其可能分子机制。方法应用MTT法检测NCTD对细胞生长的抑制作用,通过AO/EB染色、透射电子显微镜观察细胞形态及超微结构的变化,AnnexinV/PI染色检测细胞凋亡率,Western blot检测stat3、survivin、Mcl-1、bax蛋白的表达情况。结果去甲斑蝥素对结肠癌LS-174T细胞具有显著的生长抑制作用,并呈时间—剂量依赖性;40μg/ml作用72 h时达到最大抑制率(72.4±3.1)%;AO/EB染色及流式细胞术显示,随着NCTD浓度的增加,细胞凋亡率明显增加;透射电子显微镜观察发现,结肠癌LS-174T细胞出现明显凋亡超微结构变化;Western blot结果显示,stat3、survivin、Mcl-1表达明显下降,bax表达明显上升。结论去甲斑蝥素可以抑制结肠癌LS-174T细胞的生长并促进其凋亡,机制可能是通过抑制stat3途径实现的。

牛黄天龙胶囊(含药血清)诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡及其机制

目的观察牛黄天龙胶囊(含药血清)对人子宫内膜癌HEC-B细胞能否诱导凋亡并对其抗癌机制进行探讨。方法实验组分低、中、高3个剂量组并设空白组和阳性对照组进行含药血清的制备;MTT法观察细胞毒作用;细胞排染法观察瘤细胞直接损害实验;吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双荧光染色法及电镜(TEM)下观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡率并进行细胞周期分析,测定凋亡抑制蛋白survivin和凋亡效应蛋白Caspase-3的表达。结果MTT法:人子宫内膜癌HEC-B细胞经含药血清作用后细胞生长受到明显抑制且以低剂量组抑制率最高。细胞排染法:同一时间段内以低剂量组效果最好,不同时间段内(24、48h)细胞抑制率显著提高(P<0.01)。AO/EB和TEM:实验组均可见到典型细胞凋亡的形态学变化。FCM:实验组各组细胞凋亡率与空白组相比差异有显著性(P<0.01)且以低剂量组最高,细胞周期分析显示实验组G0/G1期细胞明显增多而S期细胞明显减少与空白组相比差异有显著性(P<0.01),Survivin蛋白表达在空白组最高,在实验组表达降低与空白组相比差异有显著性(P<0.01),Caspase-3表达则相反,在实验组表达最高与空白组相比差异有显著性(P<0.01)。结论复方中药“牛黄天龙胶囊”(含药血清)能够使人子宫内膜癌HEC-B细胞生长阻滞在G0/G1期并可诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡;并可降低凋亡抑制蛋白survivin表达同时可提高凋亡效应蛋白Caspase-3表达,这可能是其诱导人子宫内膜癌HEC-B细胞凋亡的机制之一;对人子宫内膜癌HEC-B细胞的抗肿瘤作用并非浓度越大效果越好而有一最适剂量。

HMC毒素诱导玉米同核C、N细胞质细胞凋亡的荧光显微观察

【目的】研究玉米小斑病菌C小种毒素(HMC-toxin)诱导同核异质体玉米的离体根冠细胞发生凋亡的差异性及凋亡规律。【方法】采用吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)荧光复染以及Hoechst 33258荧光染色的方法检测。【结果】HMC毒素诱导根冠细胞发生凋亡,出现凋亡小体与染色体边集形态特征。在3种毒素浓度、3种处理时间下,Mo17-C的根冠细胞死亡率均高于Mo17-N。采用AO与EB复染方法,在150μg.mL-1HMC毒素处理7 h时,Mo17-C细胞凋亡率达最高值,为68.7%,而Mo17-N仅为29%;经Hoechst 33258染色后,在150μg.mL-1HMC毒素处理下,Mo17-C也于7 h时达最大凋亡率,为57.3%,而Mo17-N为27.7%。【结论】在毒素"伤害"细胞致死过程中,C细胞质的细胞死亡率远高于N细胞质;在"诱导"细胞凋亡程序中,C细胞质的细胞凋亡率也远高于N细胞质的。凋亡率随诱导浓度和诱导时间的增加而增加。AO、EB复染与Hoechst 33258染色相比,两者细胞凋亡率接近,准确度均高,图像清晰,且费用相当,但前者可以区分早期和晚期凋亡细胞而后者不能区分。

中药“龙泉复方”的不同配伍对肿瘤细胞系HepG-2和EC-1增殖的影响

通过MTT（四甲基偶氮唑盐）法绘制细胞增殖曲线观察药物对肝癌细胞系HepG-2和食管鳞癌细胞系EC-1细胞增殖的影响,用荧光染色法进一步确定＂龙泉复方＂有效成分诱导细胞凋亡的较佳配伍及其有效作用浓度范围.结果表明：对抑制HepG-2细胞增殖有效作用的浓度：七味单方（马钱子、山慈菇、喜树果、龙葵、石上柏、青黛、紫菀）浸膏混合物和龙葵单方浸膏均〈125μg/mL,七味药物复方总浸膏为250~1000μg/mL;对抑制EC-1细胞增殖有效作用的浓度：三味药物混合浸膏（马钱子,喜树果、青黛提取的浸膏的混合物）〈50μg/mL和150~400μg/mL,七味单方混合浸膏〈25μg/mL和50~400μg/mL,喜树果单方浸膏为25μg/mL和50~200μg/mL;3种浸膏促进EC-1细胞增殖的浓度依次为：50~100、25~50、25~50μg/mL.通过对EC-1荧光染色观察发现诱导细胞凋亡的有效作用浓度：七位单方浸膏混合物为5~10μg/mL,三味药复方混合浸膏为10~25μg/mL,喜树果约为50μg/mL.研究结果提示,药物浓度范围和细胞系的不同导致其效果也不尽相同,临床应据具体情况调整,使之用药少效果佳.

镉对体外培养成骨细胞增殖、凋亡、分化及矿化的影响

目的探讨镉对体外培养成骨细胞(osteoblast,OB)增殖、凋亡、分化及矿化的影响。方法用混合酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养;成骨细胞与不同浓度的Cd2+作用后,MTT法测定细胞增殖;AO/EB双染法进行凋亡形态学观察;PNPP法检测碱性磷酸酶活性;矿化结节计数和面积测量分析镉对成骨细胞矿化能力的影响。结果各剂量组氯化镉均可抑制成骨细胞增殖,其中2.0μmol/L以上剂量组与对照组相比差异有统计学显著意义(P<0.01);16.0μmol/L、32.0μmol/L剂量组OB可见较多凋亡细胞;各时点、各剂量组氯化镉均能抑制ALP活性,尤其是48h以上影响作用更明显(P<0.01);0.5μmol/L、1.0μmol/L浓度的氯化镉可明显抑制成骨细胞矿化能力。结论镉离子可以抑制成骨细胞增殖、分化及矿化能力,促进成骨细胞凋亡,对成骨细胞的骨形成能力有明显抑制作用。

南蛇藤提取物体外抑瘤作用研究

目的:探讨南蛇藤提取物体外抗肿瘤作用及诱导细胞凋亡作用。方法:MTT法对南蛇藤提取物的分离成分进行初步筛选,在此基础上用吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双重荧光染色法观察南蛇藤乙酸乙酯提取物诱导SGC-7901细胞凋亡作用。结果:南蛇藤乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物有较强的抗肿瘤作用。南蛇藤乙酸乙酯提取物40 mg/L对SGC-7901细胞有明显诱导凋亡作用。

植物甾醇抑制SGC-7901胃癌细胞生长和诱导DNA损伤的研究

为确定和评价植物甾醇对胃癌细胞SGC-7901生长的影响,采用MTT法检测植物甾醇对SGC-7901细胞生长的抑制作用,AO/EB和DAPI染色观察细胞形态的变化,单细胞凝胶电泳检测植物甾醇对SGC-7901细胞DNA的损伤。试验结果表明,植物甾醇对SGC-7901细胞生长具有抑制作用,并呈现时间-效应关系,不呈现剂量-效应关系;植物甾醇处理5d后,细胞出现皱缩、密度变小等变化;AO/EB荧光染色后,细胞核成固缩状,出现凋亡小体等凋亡细胞形态;DAPI染色后,可见细胞核边缘不整等凋亡细胞形态;单细胞凝胶电泳实验结果表明,植物甾醇混合物处理5d的细胞出现了彗星现象。植物甾醇对SGC-7901细胞生长具有抑制作用,诱导SGC-7901细胞DNA的损伤。

姜黄素对人白血病K562细胞凋亡的影响

Ｋ５６２细胞对多种化疗药物诱导凋亡具有抗性，本文以ＡＯ／ＥＢ染色法、细胞分光光度术、ＤＮＡ凝胶电泳及电镜观察等方法，发现姜黄素可显著诱导Ｋ５６２细胞凋亡，提示该药对治疗慢性粒细胞性白血病可能有价值。