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Survivin shRNA和APC片段双基因的载体构建及其在HT-29细胞的表达 被引量:11
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作者 袁禧先 段厚羽 +4 位作者 曹锋 杜井峰 朱艳丽 程开 杨延涛 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第4期369-374,共6页
目的研究表明APC、Survivin 2种基因表达异常在结肠癌的发生发展中具有重要意义。构建Survivin shRNA、APC功能片段双基因共表达慢病毒载体并观察其能否于HT-29结肠癌细胞中成功表达,同时观察其是否能够对结肠癌细胞凋亡产生影响。方法... 目的研究表明APC、Survivin 2种基因表达异常在结肠癌的发生发展中具有重要意义。构建Survivin shRNA、APC功能片段双基因共表达慢病毒载体并观察其能否于HT-29结肠癌细胞中成功表达,同时观察其是否能够对结肠癌细胞凋亡产生影响。方法构建3对互补Survivin shRNA片段,从其中筛选出一条最佳干扰shRNA片段,与APC功能片段(aa1020-1698)相连接构建双基因共表达质粒载体。将HT-29细胞分为实验组、空载组、空白组3组,慢病毒对HT-29进行侵染,观察是否有绿色荧光表达及对转染细胞进行realtime PCR、Western blot检测Survivin、APC基因表达水平。通过检测Caspase-3活性来检测细胞凋亡情况。结果 1Real time PCR检测后显示对Survivin基因起到最佳干扰效果的片段为shRNA3序列。2构建出的shRNA载体经过送序验证比对后,3对shRNA序列与最初设计的序列完全相同。在HT-29细胞中可见绿色荧光,实验组Survivin相对含量(31.71±1.49)较空载组(100±0)、空白组(95.12±2.15)明显减少(P<0.05),APC mRNA表达水平较空载组(0±0)、空白组(0.51±0.15)明显增加(P<0.05)。实验组Survivin蛋白相对含量(0.18±0.01)较空白组(0.24±0.04)、空载组(0.22±0.03)明显减少,APC蛋白表达水平(0.147±0.016)较空白组(0.095±0.012)、空载组(0.108±0.015)明显升高(P<0.05)。3实验组凋亡相对比值(0.573±0.050)较空白组(0.390±0.040)、空载组(0.407±0.030)明显增加(P<0.05)。结论成功构建Survivin-shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体,并能够在HT-29结肠癌细胞中成功表达,该双基因共表达载体可为后续利用该载体进行基因治疗的基础实验提供材料。 展开更多
关键词 HT-29 SURVIVIN SHRNA apc有效片段 双基因 慢病毒
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新疆哈萨克族食管癌APC抑癌基因等位基因杂合缺失和点突变研究 被引量:2
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作者 库热西.玉努斯 王丽容 +5 位作者 赵学信 斯坎德尔.白克力 武贵臻 伊地力斯.阿吾提 库尔班.赛来 马尔哈巴.阿布都热依木 《新疆医科大学学报》 CAS 1999年第2期79-81,共3页
目的:探讨抑癌基因在哈萨克族(简称哈族)食管癌发生、发展中的作用,阐明哈族食管癌高发的机理,从分子水平提供依据。方法:应用PCR技术并配合限制性片段长度多态性(RFLP)分析和银染的单链构象多态性(SSCP)分析法对... 目的:探讨抑癌基因在哈萨克族(简称哈族)食管癌发生、发展中的作用,阐明哈族食管癌高发的机理,从分子水平提供依据。方法:应用PCR技术并配合限制性片段长度多态性(RFLP)分析和银染的单链构象多态性(SSCP)分析法对41 例新疆地区原发性食管癌及正常组织中家族性结肠腺瘤样息肉易感基因(APC)第11 外显子杂合缺失(LOH)及点突变进行检测。结果:31 例信息个体中13 例显示杂合缺失,杂合缺失率为41.9% ,其中哈族的杂合缺失率为50.0% (7/14),而汉族的杂合缺失率为35.3% (6/17)。点突变率为24.4% (10/41),其中哈族食管癌的点突变率为30.0% (6/20),汉族食管癌的点突变率为19.0% (4/21)。结论:APC抑癌基因第11 外显子的LOH 存在于食管癌的各个临床分期,LOH不是癌症发生的结果,可能是癌症发生的早期因素,且与食管癌的恶性程度有关。 展开更多
关键词 食管肿瘤 apc抑癌基因 等位基因 点突变
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慢病毒介导Survivin shRNA与结肠腺瘤息肉易感基因片段联合对HT-29细胞的影响 被引量:8
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作者 袁禧先 隋子奇 +5 位作者 孙理婷 杨延涛 张爽 薛鸿鹏 葛文松 王凤荣 《世界华人消化杂志》 CAS 2015年第14期2250-2255,共6页
目的:观察Survivin sh RNA、结肠腺瘤息肉易感基因(adenomatous polyposis coli,APC)片段联合对HT-29细胞Survivin表达及细胞增殖的影响.方法:构建Survivin sh RNA慢病毒载体、A P C有效片段慢病毒载体,对H T-29细胞分别采用单慢病毒载... 目的:观察Survivin sh RNA、结肠腺瘤息肉易感基因(adenomatous polyposis coli,APC)片段联合对HT-29细胞Survivin表达及细胞增殖的影响.方法:构建Survivin sh RNA慢病毒载体、A P C有效片段慢病毒载体,对H T-29细胞分别采用单慢病毒载体侵染及联合侵染.实验分阴性对照组、空载组、sh RNA组、APC组、sh RNA+APC联合组,对侵染48 h后的HT-29细胞进行real-time PCR、Western blot及CCK8细胞增殖检测,检测Survivin m RNA、蛋白表达水平及对细胞增殖的影响.结果:(1)sh RNA+APC联合组与其余各组相比,Survivin m RNA表达量显著下降(P<0.05);(2)s h R N A+A P C联合组与其余各组相比,其Survivin蛋白抑制率明显高于其余各组(P<0.05);(3)sh RNA+APC联合组与其余各组相比,细胞增殖速度低于其余各组(P<0.05).结论:Survivin sh RNA与APC片段联合能抑制HT-29细胞内Survivin m RNA及蛋白的表达,同时能够抑制细胞增殖能力,并且优于单个基因侵染. 展开更多
关键词 结肠癌 SURVIVIN SHRNA apc有效片段慢病毒载体
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