SMYD2通过抑制APC2激活WNT/β-catenin通路影响结直肠癌细胞的迁移和侵袭

目的:探讨SET和MYND域包含蛋白质2(SET and MYND domaincontaining protein 2,SMYD2)调控结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞迁移和侵袭的机制。方法:从徐州医科大学附属医院收集2019年08月至2020年03月的24对结直肠癌及癌旁组织,进行实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析SMYD2的表达量。构建SMYD2和腺瘤性息肉病蛋白2(adenomatous polyposis coli 2,APC2)的小干扰RNA,使用Transwell和蛋白免疫印迹实验检测转染后结直肠癌细胞的迁移和侵袭能力。结果:癌组织中SMYD2的mRNA和蛋白表达量显著高于癌旁组织(P<0.001,P<0.05),且结直肠癌细胞系SW480和HCT116中SMYD2的表达量显著高于正常结直肠细胞系FHC(P<0.001)。在SW480和HCT116细胞中敲低SMYD2后细胞的迁移和侵袭能力减弱(P<0.01),同时E-cadherin的表达量升高(P<0.001),而N-cadherin和Vimentin的表达量降低(P<0.01)。生物信息学分析显示,SMYD2与APC2的表达呈负相关(P<0.001),且APC2可以抑制WNT/β-catenin通路。在SW480和HCT116细胞中敲低SMYD2后APC2的表达量增高(P<0.001),而WNT/β-catenin通路中的β-catenin、c-MYC和CyclinD1表达降低(P<0.01)。敲低APC2可以恢复SMYD2敲低引起的SW480和HCT116细胞的迁移和侵袭降低(P<0.001),E-cadherin升高(P<0.001)和N-cadherin、Vimentin、β-catenin、c-MYC、CyclinD1降低(P<0.01)。结论:在结直肠癌细胞中,SMYD2通过抑制APC2激活WNT/β-catenin通路促进结直肠癌细胞的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),从而影响细胞的迁移和侵袭能力。

miR-762对子宫内膜癌Ishikawa细胞放疗敏感性的影响及机制研究

目的:分析miR-762在子宫内膜癌(EC)患者癌组织中的表达水平及其对子宫内膜癌Ishikawa细胞放疗敏感性的影响及机制研究。方法:qRT-PCR检测54例EC癌组织和癌旁组织以及正常子宫内膜细胞ESC和EC细胞系中miR-762及腺瘤性结肠息肉2(APC2)mRNA表达水平。不同放射剂量处理Ishikawa细胞,qRT-PCR检测miR-762和APC2 mRNA表达水平。将Ishikawa细胞分为空白对照组(blank组)、Lv-NC组(感染miR-762 sponge阴性对照慢病毒),Lv-miR-762 SP组(感染miR-762 sponge慢病毒)、Lv-miR-762 SP+si-NC组和Lv-miR-762 SP+si-APC2组。qRT-PCR和Western blot检测miR-762和APC2表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-762和APC2的靶向关系。采用6 Gy射线照射各组Ishikawa细胞,克隆形成实验检测细胞放射敏感性;CCK-8检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中CyclinD1、p21、Bcl-2和Bax等蛋白表达水平。结果:在EC癌组织及细胞系中miR-762高表达,而APC2低表达。随着射线照射剂量的增加,Ishikawa细胞中miR-762表达水平逐渐升高(P<0.05),APC2 mRNA表达水平逐渐降低(P<0.05),呈剂量依赖性。双荧光素酶报告基因实验证实,APC2是miR-762靶基因。抑制miR-762可明显下调miR-762表达水平,上调APC2表达水平,增强细胞放射敏感性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,并下调CyclinD1和Bcl-2蛋白表达水平,上调p21和Bax蛋白表达水平(P<0.05)。此外,干扰APC2基因可显著逆转抑制miR-762表达对Ishikawa细胞放射敏感性的促进作用。结论:miR-762在EC癌组织及细胞系中高表达,抑制其表达可通过上调APC2表达从而增强Ishikawa细胞的放射敏感性。

APC/β-catenin/TCF通路在奥曲肽调控结肠癌SW480中的分子机制

目的:研究奥曲肽(Octrotide,OCT)对结肠癌SW480细胞中APC/β-catenin/TCF通路各热点分子在mRNA水平和蛋白水平表达量的影响,初步探讨OCT调控SW480细胞APC/β-catenin/TCF通路的分子靶点.方法:(1)mRNA检测:体外培养人结肠癌SW480细胞,分为对照组和OCT组(10-10mol/L),分别提取两组细胞的总RNA,以RT-PCR法检测APC2、AXIN、CK1α、CyclinD1、FZD7的mRNA,筛选出两组细胞5个基因mRNA的表达差异;(2)蛋白检测:体外培养人结肠癌SW480细胞,分为对照组和OCT1、2、3组(10-14、10-12、10-10mol/L),分别提取4组细胞的总蛋白,以Western blot法检测APC2、CK1α、CyclinD1的蛋白质,鉴定4组细胞中3个基因在蛋白水平的表达差异.结果:(1)mRNA检测:OCT组(10-10mol/L)中APC2、CK1α的mRNA表达上调(均P<0.05),CyclinD1的mRNA表达下调(P<0.05),AXIN和FZD7的mRNA改变无统计学意义(P>0.05);(2)蛋白检测:OCT1、2、3组中APC2、CK1α蛋白表达上调(P<0.05),CyclinD1蛋白表达下调(P<0.05),且呈浓度依赖性.结论:OCT通过强化APC2、CK1α"负反馈"调节作用,下调靶基因CyclinD1,负性调控结肠癌SW480中APC/β-catenin/TCF通路.