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Detections of mefA, ermB, and mphA Macrolides Resistant Genes in Bacteria Isolated from Covid-19 Patients from Selected Health Facilities in Ibadan, Nigeria
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作者 Florence Bamigbola Toyosi Raheem +1 位作者 Muinat Fowora Felicia Adesina 《Advances in Microbiology》 CAS 2023年第2期106-117,共12页
Background: COVID-19 is a disease caused by Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Epidemiological data indicated that bacterial complications in COVID-19 would decrease clearance rate of the in... Background: COVID-19 is a disease caused by Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2 (SARS-CoV-2). Epidemiological data indicated that bacterial complications in COVID-19 would decrease clearance rate of the infecting agent and increase mortality rate. Macrolides such as Azithromycin are usually administered to COVID-19 patients as palliative treatments. Currently, a considerable number of bacterial strains have developed resistance to various antibiotics, especially macrolides. Resistance is reported to be due to possession of mefA, ermB, and mphA genes by Gram positive and Gram negative bacteria. Therefore, this study determined antibiotic resistance patterns and identify mefA, ermB and mphA macrolide-resistant genes in bacterial pathogens isolated from COVID-19 cases in Ibadan, Nigeria. Methods: 400 Nasopharyngeal samples were collected from symptomatic cases before antibiotic medication;structured questionnaires were administered to collect socio-demographic data of participants. Samples were cultured on Blood, Chocolate, MacConkey and Mannitol salt agar at 37°C for 48 hrs. Bacterial identification was performed using VITEK 2.0 ID cards and API 20E for Gram positive and negative bacteria respectively. Antibiotic Susceptibility Testing was performed using Kirby Bauer disc diffusion methods and VITEK 2.0 AST card kits. DNA of multidrug resistant bacterial isolates was extracted;resistant genes were determined using a polymerase chain reaction with specific primers. Amplified genes were detected using agarose gel electrophoresis. Results: 240 (60%) had bacterial growth and 97 (22.2%) yielded no growth. From the 240 bacterial isolates, 38 (15.83%) were multi-drug resistant including resistance to macrolides (Azithromycin) 20 (52.63%) of which were positive for either mefA or ermB, and none (0.0%) possess mphA gene;14 (36.8%) isolates had mefA gene, 10 (26.3%) isolates carried ermB gene. Conclusion: Multi-drug bacterial resistance including macrolides and quinolones was detected. Only mefA and ermB genes were detected in the bacterial isolates, especially in Gram positive organisms. The detection of mefA and ermB genes in the MDR bacterial isolates raised concern on the use of azithromycin as palliative treatment for COVID-19 symptomatic patients. 展开更多
关键词 SARS-CoV-2 Bacterial Co-Infection api 20E VITEK 2.0 and Resistant genes
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银腺杨转Cry I Ac和API双价抗虫基因的研究 被引量:9
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作者 李科友 樊军锋 +2 位作者 赵忠 李玲 朱海兰 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2007年第5期699-704,共6页
在建立以银腺杨(84K)叶片为外植体的再生系统基础上,通过农杆菌介导法把CryⅠ4c和API双价抗虫基因导人银腺杨(84K)基因组中。转化杨树叶片,在含有卡那霉素的培养基上诱导不定芽和诱导生根,获得了400株卡那霉素抗性转化再生植株... 在建立以银腺杨(84K)叶片为外植体的再生系统基础上,通过农杆菌介导法把CryⅠ4c和API双价抗虫基因导人银腺杨(84K)基因组中。转化杨树叶片,在含有卡那霉素的培养基上诱导不定芽和诱导生根,获得了400株卡那霉素抗性转化再生植株。抗性植株经PCR检测,有70株呈阳性。通过Southern杂交和ELISA检测进一步证明CryⅠ4c和API双价抗虫基因已整合到银腺杨(84K)基因组中,拷贝数1~2个,并得到了表达。转化植株用杨扇舟蛾幼虫进行饲虫试验,结果表明昆虫幼虫的死亡率高达60.0%~80.0%。同时,存活幼虫的生长发育也受到了明显抑制。本研究结果为杨树抗虫育种提供了新的种质资源。 展开更多
关键词 银腺杨(84K) CryⅠ 4c和api基因 转化 抗虫性
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用花粉管通道法将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻获得转基因植株 被引量:5
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作者 王才林 朱镇 +8 位作者 赵凌 张亚东 林静 张所兵 陈涛 刘贤进 王冬兰 黄骏麒 龚蓁蓁 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期245-248,共4页
采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已... 采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已整合到受体植株的基因组中。遗传分析表明,API基因能在有性生殖过程中传递给后代,并于T4代分离出抗性纯合的株系。 展开更多
关键词 水稻 抗虫 慈姑蛋白酶抑制剂基因 转基因植株 花粉管通道法
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越冬初期和中期西方蜜蜂四个亚种的miRNA及其靶mRNA的比较分析
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作者 蒋海宾 杜亚丽 +8 位作者 冀全枝 何金明 孙智禹 吴鹰 王志 兰凤明 牛庆生 刘玉玲 徐凯 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期622-633,共12页
【目的】明确西方蜜蜂Apis mellifera微小RNA(microRNA,miRNA)在越冬期间的表达量变化,揭示miRNA及其靶mRNA与抗寒性的潜在关系,在miRNA组学层面进一步揭示西方蜜蜂抗寒性的分子机理。【方法】利用sRNA-seq技术鉴定西方蜜蜂4个亚种意大... 【目的】明确西方蜜蜂Apis mellifera微小RNA(microRNA,miRNA)在越冬期间的表达量变化,揭示miRNA及其靶mRNA与抗寒性的潜在关系,在miRNA组学层面进一步揭示西方蜜蜂抗寒性的分子机理。【方法】利用sRNA-seq技术鉴定西方蜜蜂4个亚种意大利蜜蜂A.m.ligustica、欧洲黑蜂A.m.mellifera、高加索蜂A.m.caucasica和卡尼鄂拉蜂A.m.carnica在越冬期初期和越冬中期的miRNA;根据P≤0.05且|log 2fold change|≥1标准筛选4个亚种在越冬不同时期的差异表达miRNA(differentially expressed miRNAs,DEmiRNAs)。利用相关生物信息学软件对筛选出的miRNA的靶mRNA进行预测,并对靶mRNA进行GO及KEGG数据库注释。根据靶向结合关系构建DEmiRNA和靶mRNA的调控网络,并利用Cytoscape进行可视化。随机选取ame-miR-263a-5p,ame-miR-184-3p,ame-miR-263b-5p,ame-miR-190-5p,ame-miR-6052-5p,ame-miR-9a-5p,ame-miR-100-5p和ame-miR-306-5p等8个DEmiRNA进行RT-qPCR验证。【结果】鉴定获得越冬期西方蜜蜂4个亚种210个miRNA,包括178个保守的miRNA和32个新的miRNA,长度介于18~30 nt,分布数量最多的长度为22和23 nt,首位碱基为U的miRNA数量最多。西方蜜蜂4个亚种在越冬初期和越冬中期表达量最高的DEmiRNAs为ame-miR-1-3p,ame-miR-276-3p和ame-miR-184-3p。意大利蜜蜂越冬初期vs越冬中期共筛选出22个DEmiRNA,可靶向调控394条mRNA,这些mRNA分别注释到161个GO功能条目和16条KEGG通路上;欧洲黑蜂越冬初期vs越冬中期共筛选出28个DEmiRNA,可靶向调控415条mRNA,这些mRNA分别注释到147个GO功能条目和15条KEGG通路上;高加索蜂越冬初期vs越冬中期共筛选67个DEmiRNA,可靶向调控1021条mRNA,这些mRNA分别注释到171个GO功能条目和21条KEGG通路上;卡尼鄂拉蜂越冬初期vs越冬中期共筛选18个DEmiRNA,可靶向调控330条mRNA,这些mRNA分别注释到147个GO功能条目和13条KEGG通路上。西方蜜蜂4个亚种DEmiRNA与靶mRNA之间形成较为复杂的调控网络。RT-qPCR结果显示8个DEmiRNA的表达趋势与测序数据一致,证实了本研究中测序数据的可靠性。【结论】本研究明确西方蜜蜂4个亚种越冬不同时期的miRNA表达量变化,筛选出多个潜在调控西方蜜蜂越冬期抗寒性的分子候选靶标miRNA,其中ame-miR-14-3p和ame-miR-3786-5p在欧洲黑蜂、高加索蜂和卡尼鄂拉蜂中负调控多个mRNA的表达,在意大利蜜蜂中并没有参与;miRNA通过调控靶基因的表达参与甘油磷酸脂代谢、MAPK信号通路和mTOR等关键信号通路参与西方蜜蜂的抗寒性。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 微小RNA 靶基因 越冬 抗寒 调控网络
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慈姑蛋白酶抑制剂(API)基因导入棉花获得转基因植株 被引量:4
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作者 黄骏麒 龚蓁蓁 +5 位作者 吴敬音 陈松 束春娥 谢伟军 周宝良 沈新莲 《江苏农业学报》 CSCD 2001年第2期65-68,共4页
通过花粉管通道技术将慈姑蛋白酶抑制剂API(ArrowheadProteinaseInhibitor)基因转入棉花 ,获得了转基因植株。经对棉铃虫抗虫性鉴定和PCR、RT PCR、Southernblotting分析 。
关键词 慈姑蛋白酶抑制剂 api基因 棉花 转基因植株
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芹菜过敏原蛋白Api g 1基因的克隆与表达分析 被引量:8
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作者 李梦瑶 王枫 +4 位作者 侯喜林 蒋倩 王镇 马静 熊爱生 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期13-19,共7页
以2个芹菜(Apium graveolens)品种‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料,分别克隆出过敏原蛋白Api g 1基因。序列分析表明,‘津南实芹’和‘美国西芹’中的过敏原蛋白基因Api g 1均含有1个480 bp的开放阅读框及1个148 bp的内含子,分别... 以2个芹菜(Apium graveolens)品种‘津南实芹’和‘美国西芹’为试验材料,分别克隆出过敏原蛋白Api g 1基因。序列分析表明,‘津南实芹’和‘美国西芹’中的过敏原蛋白基因Api g 1均含有1个480 bp的开放阅读框及1个148 bp的内含子,分别编码159个氨基酸,二者有2个核苷酸位点的差异,编码的氨基酸有1个位点差异。‘津南实芹’和‘美国西芹’的过敏原蛋白Api g 1与胡萝卜、欧芹等植物的过敏原蛋白相似度较高,在保守区域有7个甘氨酸残基,空间结构上由3个螺旋和7个折叠组成。实时定量PCR表达分析显示,该基因在主根中表达较高,茎其次,其他部位表达较弱,具有明显的组织特异性。 展开更多
关键词 芹菜 过敏原蛋白 api g 1基因 克隆 实时定量PCR 基因表达
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2个芹菜品种泛变应原Api g 4基因的克隆与分析 被引量:3
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作者 李梦瑶 王枫 +3 位作者 侯喜林 蒋倩 马静 熊爱生 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-7,共7页
从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘津南实芹’(‘Jinnanshiqin’)和‘美国西芹’(‘Meiguoxiqin’)中分别克隆获得泛变应原基因Api g 4;2个品种的Api g 4基因均包含1个长度为405 bp的开放阅读框,二者间有3个核苷酸位点的差异。2个... 从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘津南实芹’(‘Jinnanshiqin’)和‘美国西芹’(‘Meiguoxiqin’)中分别克隆获得泛变应原基因Api g 4;2个品种的Api g 4基因均包含1个长度为405 bp的开放阅读框,二者间有3个核苷酸位点的差异。2个品种的Api g 4基因均能编码134个氨基酸,但二者编码的氨基酸序列有2个位点的差异。多重比对以及进化树分析结果均表明:2个芹菜品种Api g 4基因编码的氨基酸序列与其他植物的泛变应原氨基酸序列同源性较高,氨基酸序列高度保守;与同科植物欧芹〔Petroselinum crispum(Miller)Nyman ex A.W.Hill〕和胡萝卜(Daucus carota Linn.)的泛变应原氨基酸序列的同源性均达到90%以上,在进化树上也归为同一支。2个品种的泛变应原Api g 4均为疏水性蛋白,具有相似的三维空间结构,均包含3个α螺旋和7个β折叠。实时定量PCR分析结果显示:Api g 4基因在‘津南实芹’和‘美国西芹’根中的表达水平均最高,在茎和茎尖分生组织中的表达水平相对较低,在叶中的表达水平很弱,且2个品种间同一组织的Api g 4基因表达水平也有差异,表明Api g 4基因的表达具有明显的组织特异性。 展开更多
关键词 芹菜 泛变应原 api g4基因 克隆 同源性 基因表达
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东方蜜蜂微孢子虫nce-miR-11248及其靶基因SGT1的生物信息学和表达谱研究 被引量:1
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作者 张凯遥 赵浩东 +7 位作者 张艺琼 赵萧 高旭泽 邹培缘 张奎昊 陈大福 郭睿 牛庆生 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2024年第2期32-39,共8页
【目的】对前期鉴定所获得的东方蜜蜂微孢子虫的nce-miR-11248进行表达和序列验证,预测、分析其靶基因,并检测nce-miR-11248及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中的表达谱,为进一步开展nce-miR-11248调控东方蜜蜂微孢... 【目的】对前期鉴定所获得的东方蜜蜂微孢子虫的nce-miR-11248进行表达和序列验证,预测、分析其靶基因,并检测nce-miR-11248及其靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中的表达谱,为进一步开展nce-miR-11248调控东方蜜蜂微孢子虫侵染的功能及作用机制研究提供参考。【方法】利用Stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证nce-miR-11248的真实性;利用相关生物信息学软件预测nce-miR-11248的靶基因,并分析其编码蛋白的分子特性;使用MEME和TBtools软件预测SGT1蛋白的保守基序和结构域,通过Mega 11.0软件进行氨基酸序列多重比对,采用邻接法构建系统进化树。采集东方蜜蜂微孢子虫孢子侵染1,2,4,6和8 d的意蜂工蜂中肠组织,采用RT-qPCR检测nce-miR-11248及其靶基因SGT1的表达谱。【结果】nce-miR-11248在东方蜜蜂微孢子虫孢子中真实存在,其序列长度为25 bp。nce-miR-11248的靶基因为SGT1。SGT1蛋白分子式为C_(765)H_(1213)N_(195)O_(241)S_(4),分子质量约为17.10 ku,脂溶系数为82.67,等电点为5.50,亲水系数为-0.709,不含典型的信号肽和跨膜结构域,可同时定位于细胞核、线粒体和过氧化物酶体。东方蜜蜂微孢子虫、家蚕微孢子虫、泛胞虫、肠脑炎微孢子虫和蚱蜢脑炎微孢子虫的SGT1中均含有4个保守基序(Motif 1、Motif 2、Motif 3和Motif 4)和1个结构域(SGT1超家族结构域)。东方蜜蜂微孢子虫、家蚕微孢子虫、肠脑炎微孢子虫和蚱蜢脑炎微孢子虫的SGT1聚为一支,且东方蜜蜂微孢子虫与家蚕微孢子虫的SGT1进化距离最近。相较于侵染东方蜜蜂微孢子虫后1 d,侵染后2,4,6和8 d nce-miR-11248的表达量均显著下调(P<0.05);侵染后2,4,6和8 d SGT1的表达量均下调,其中侵染后4,6和8 d的表达量与2 d的差异达显著水平(P<0.05)。【结论】nce-miR-11248在东方蜜蜂微孢子虫孢子中真实存在;东方蜜蜂微孢子虫与家蚕微孢子虫的SGT1亲缘关系最近;随着侵染时间的延长,nce-miR-11248及其靶基因SGT1在东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中的表达量均呈持续下降;nce-miR-11248和SGT1是潜在的参与调控微孢子虫侵染过程的因子。 展开更多
关键词 东方蜜蜂微孢子虫 意大利蜜蜂 nce-miR-11248 SGT1基因 表达谱
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蜜蜂表皮蛋白apidermin(apd)基因家族3个新成员的特性鉴定及昆虫APD家族序列特征的分析 被引量:5
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作者 孙亮先 黄周英 +3 位作者 郑华军 葛清秀 龚丽萍 陈怀宇 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期12-23,共12页
Apidermin(APD)蛋白家族是一个新的昆虫结构性表皮蛋白家族。本研究结合生物信息学和RT-PCR扩增,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称"意蜂")的apd-1-like,apd-3-like和中华蜜蜂Apis cerena cerena(简称"中蜂&quo... Apidermin(APD)蛋白家族是一个新的昆虫结构性表皮蛋白家族。本研究结合生物信息学和RT-PCR扩增,对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica(简称"意蜂")的apd-1-like,apd-3-like和中华蜜蜂Apis cerena cerena(简称"中蜂")的apd-2等3个新的apd基因的结构特征和表达进行了分析,并分析了昆虫APD蛋白家族的序列特征。结果显示,在西方蜜蜂Apis mellifera(简称"西蜂")中,apd基因家族的6个成员串联排列在基因组序列第4号连锁群上,它们在A.m.ligustica雄蜂头部中的转录水平差异明显,且其启动子序列所含顺式元件也不同。中蜂apd-2和意蜂apd-1-like都含有3个外显子和2个内含子,而意蜂apd-3-like则由4个外显子和3个内含子组成。蛋白序列分析结果显示,目前已知的10条APD蛋白序列N末端均具有相似的信号肽序列,其成熟蛋白分子量为6.0~37.0kD,pI为6.2~10.8。其中西蜂的APD1-3、APD-like和东方蜜蜂Apiscerena的APD-2等5条较短的多肽中疏水氨基酸残基达52%~67%,且Ala含量最为丰富(占25%~34%);而丽蝇蛹集金小蜂Nasonia vitripennis的APD1-3和西蜂APD-1-like,APD-3-like等另外5条APD多肽富含Gly(21%~30%),其序列中疏水氨基酸残基含量为35%~41%。多肽序列多重比对和系统进化分析结果显示,APD家族可划分为2个亚家族。亚家族Ⅰ含有西蜂APD1-3和东方蜜蜂APD-2等4条较短的多肽序列,其N末端为一个长33aa的保守基序;亚家族Ⅱ由另外6条相对较长的多肽序列组成,其N末端保守基序长50aa,C末端保守基序长16aa。本文所描述的APD蛋白家族序列特征有助于以后从其他昆虫中鉴定新的apd基因。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 东方蜜蜂 表皮蛋白 apidermin基因 APD家族 序列分析 生物信息学分析
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东方蜜蜂微孢子虫侵染过程中nce-miR-26675及其靶基因NcSec24的研究
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作者 赵萧 荆欣 +5 位作者 冯佩林 张艺琼 任亚萍 姚雨彤 黄枳腱 郭睿 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期662-670,共9页
【目的】探明nce-miR-26675通过靶向调控蛋白转运体NcSec24基因的表达参与东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂的过程,为其侵染意大利蜜蜂工蜂的机制提供依据。【方法】联用RNAhybrid、miRanda和TargetScan软件预测nce-miR-26675的靶基... 【目的】探明nce-miR-26675通过靶向调控蛋白转运体NcSec24基因的表达参与东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂的过程,为其侵染意大利蜜蜂工蜂的机制提供依据。【方法】联用RNAhybrid、miRanda和TargetScan软件预测nce-miR-26675的靶基因,取交集作为靶基因集合。使用Blast工具将靶基因比对到基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库以获得相应的功能和通路注释。采用RT-qPCR检测东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中nce-miR-26675和NcSec24的表达谱。利用Expasy网站上的相关软件预测和分析NcSec24的理化性质和分子特性。分别使用MEME和TBtools软件鉴定东方蜜蜂微孢子虫和其他物种NcSec24蛋白的保守基序和结构域。通过Mega 11.0软件对东方蜜蜂微孢子虫和其他物种的NcSec24蛋白进行氨基酸序列多重比对,并采用邻接法构建了基于NcSec24蛋白的系统进化树。【结果】nce-miR-26675靶向NcSec24等13个基因,其中,10个靶基因可注释到GO中的37个功能条目,6个基因注释KEGG中的23条KEGG通路。与接种后1 d相比,nce-miR-26675的表达量在接种后2 d显著上调(P<0.05),在接种后3、4 d显著下调(P<0.05),呈现先上升再下降的趋势;NcSec24的表达量在接种后2、3、4 d均显著下调(P<0.05),表现出持续下降的趋势。NcSec24的分子质量约为80.419 ku,等电点为5.60,分子式为C3671H5653N897O1067S31,平均亲水系数为-0.035;NcSec24不含典型信号肽,可同时定位于细胞核和细胞质;NcSec24含4个结构域(Sec23_trunk、Sec23_helical、zf-Sec23_Sec24和Sec23_BS)与5个保守基序(motif1、motif2、motif3、motif4和motif5);东方蜜蜂微孢子虫、家蚕微孢子虫、颗粒病微孢子虫、泰氏康罗汉孢虫的NcSec24聚为一支。【结论】nce-miR-26675通过靶向调控NcSec24的表达参与东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂的过程。NcSec24是潜在的亲水性蛋白和胞内蛋白,东方蜜蜂微孢子虫、家蚕微孢子虫、颗粒病微孢子虫和泰氏康罗汉孢虫的Nc-Sec24同源性较高。 展开更多
关键词 蜜蜂 西方蜜蜂 东方蜜蜂微孢子虫 微小RNA 靶基因 调控网络
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生长激素诱导的跨膜蛋白基因(GHITM)在东方蜜蜂(Apis cerana)幼虫不同发育阶段的相对表达分析 被引量:1
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作者 龚志文 樊莹 +2 位作者 杨明华 董霞 李亚辉 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2016年第1期81-86,共6页
蜜蜂社会中,工蜂与蜂王基因型相同但由于基因的表达差异、表观遗传差异及营养控制等因素造成工蜂和蜂王表型有很大的不同。GHITM基因是参与家蚕蜕皮与变态发育的pgdr基因的直系同源物,但关于其在蜜蜂中的研究目前未见报道。本研究利用... 蜜蜂社会中,工蜂与蜂王基因型相同但由于基因的表达差异、表观遗传差异及营养控制等因素造成工蜂和蜂王表型有很大的不同。GHITM基因是参与家蚕蜕皮与变态发育的pgdr基因的直系同源物,但关于其在蜜蜂中的研究目前未见报道。本研究利用实时荧光定量PCR技术研究了此基因在东方蜜蜂工蜂蛹和幼年工蜂以及蜂王蛹期的mRNA相对表达量,目的是为了探究GHITM基因在东方蜜蜂级型分化分子机理及预测可能由该基因产生的蜜蜂成虫的行为。结果表明:在工蜂蛹及工蜂成虫中GHITM基因表达量随日龄而增加;在蜂王蛹中GHITM的表达量从封盖蛹到2日龄蛹中呈下降趋势,2日龄后表达量随日龄增加。本研究结果可为东西方蜜蜂基因表达差异及级型分化分子水平的研究和GHITM基因功能的研究提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 东方蜜蜂 实时荧光定量PCR 基因相对表达 功能预测
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东方蜜蜂微孢子虫侵染过程中nce-miR-15338及候选靶基因的表达谱
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作者 王思懿 高旭泽 +7 位作者 赵浩东 荆欣 刘小玉 冯佩林 宋宇轩 刘彩珍 陈大福 郭睿 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期89-95,共7页
【目的】本研究旨在为探究nce-miR-15338调控东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)侵染意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)工蜂的功能及作用机制提供参考和依据。【方法】采用Stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证nce-miR-15338的存在和表... 【目的】本研究旨在为探究nce-miR-15338调控东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)侵染意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)工蜂的功能及作用机制提供参考和依据。【方法】采用Stem-loop RT-PCR和Sanger测序验证nce-miR-15338的存在和表达。利用相关软件预测nce-miR-15338的靶基因并进行数据库注释。通过RT-qPCR检测nce-miR-15338及其候选靶基因在东方蜜蜂微孢子虫侵染过程中的表达谱。【结果】nce-miR-15338在东方蜜蜂微孢子虫孢子中真实存在和表达;nce-miR-15338共靶向LCFAL 2和20s PS等16个基因;分别有16、7、8、3个靶基因可注释到Nr、Swiss-Prot、GO和KEGG数据库;相较于接种后1 d,nce-miR-15338的表达量在2 d极显著上调,在4、6、8 d均极显著下调;LCFAL 2的表达量在接种2、4、6、8 d后皆为极显著下调;20s PS在接种2、4、6、8 d的表达水平均为极显著下调。【结论】研究结果证实了nce-miR-15338的真实存在和表达,并明确了东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂过程中nce-miR-15338及其候选靶基因LCFAL 2和20s PS的表达规律。 展开更多
关键词 东方蜜蜂微孢子虫 蜜蜂 意大利蜜蜂 nce-miR-15338 靶基因 表达谱
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Effects of H_2O_2 and NO on Flower Development and AP1 Gene Expression of Off-season Longan
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作者 Songgang LI Xinjun ZHANG +2 位作者 Lei ZHANG Jiwang HONG Yeyuan CHEN 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2016年第4期23-25,30,共4页
[Objective] This study aimed to investigate the effects of H2O2 and NO on flower development and 4P1 gene expression of off-season longan. [Meth-od ]Nine-year-old off-season Chuliang longan was sprayed wit... [Objective] This study aimed to investigate the effects of H2O2 and NO on flower development and 4P1 gene expression of off-season longan. [Meth-od ]Nine-year-old off-season Chuliang longan was sprayed with enhancers and blockers of H2O2 and NO to analyze dynamic changes of flower development and API expression. [ Result] The expression level of API gene in off-season longan was improved during flower development. SNP and MV treatments up-regulated the expression level of API gene in leaves and terminal buds to varying degrees during lateral primordium formation. Especially, SNP treatment exhibited the most remark-able effect. DMTU treatment significantly inhibited the expression of AP1 gene in leaves and terminal buds during lateral primordium formation. L-NNA treatment slightly inhibited the expression of API gene in leaves and exerted no significant effect on expression of AP1 gene in terminal buds. [ Conclusion] It can be specu-lated that the enhancement of NO and H2O2 signals is conducive to flower development of off-season longan, while blocking H2O2 signals may inhibit flower develop-ment of off-season longan. 展开更多
关键词 LONGAN Flower development Hydrogen peroxide (H2O2) Nitric oxide (NO) api gene
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中草药烟熏对西方蜜蜂抗氧化酶、解毒酶活性及其基因表达的影响
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作者 杨晨 颜幸超 +4 位作者 江武军 胡景华 史莹 黄张宁庆 何旭江 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期456-466,共11页
【目的】蜜蜂疾病是影响养蜂业发展的重要因素之一,可显著降低蜂群繁殖速度、蜂产品产量和品质,甚至造成蜜蜂大量死亡。旨在研究中草药烟熏对蜜蜂的抗氧化能力和解毒能力的影响,进而探究中草药烟熏对蜜蜂的影响,为探寻新型蜜蜂病虫害绿... 【目的】蜜蜂疾病是影响养蜂业发展的重要因素之一,可显著降低蜂群繁殖速度、蜂产品产量和品质,甚至造成蜜蜂大量死亡。旨在研究中草药烟熏对蜜蜂的抗氧化能力和解毒能力的影响,进而探究中草药烟熏对蜜蜂的影响,为探寻新型蜜蜂病虫害绿色防控方式提供科学依据。【方法】以西方蜜蜂(Apis mellifera)为研究对象,选用1260只健康1日龄西方蜜蜂工蜂,随机分成6组,每组3个生物学重复,每个重复70只蜜蜂。使用干稻草(对照组)、艾草、蒲公英、虎杖、忍冬藤、板蓝根6种干草作为烟熏燃料,从2日龄开始烟熏,每48 h烟熏1次。每天记录各组蜜蜂死亡率,第14天烟熏6 h后分别测定各组抗氧化酶活性和解毒酶活性,以及相关免疫基因和解毒基因表达。【结果】与对照组相比,中草药烟熏显著改变健康蜜蜂的存活率、抗氧化酶活性和解毒酶活性。蒲公英组的存活率显著降低(P<0.05),但其他组蜜蜂的存活率与对照组差异不显著(P>0.05)。与对照组相比,艾草组、蒲公英组和板蓝根组超氧化物歧化酶活性显著升高(P<0.05);艾草组、蒲公英组、忍冬藤组过氧化物酶活性显著升高(P<0.05);蒲公英组、虎杖组总抗氧化酶活性显著升高(P<0.05);艾草组、板蓝根组谷胱甘肽-S-转移酶活性显著升高(P<0.05);艾草组、蒲公英组、虎杖组乙酰胆碱酯酶活性显著升高;艾草组细胞色素P450活性显著升高(P<0.05)。对照组羧酸酯酶活性与中草药烟熏处理组无显著影响(P>0.05)。此外,艾草组显著上调Vg、Defensin2、AmNOS和PTP-99A基因表达(P<0.05)。【结论】以艾草、蒲公英、虎杖、忍冬藤、板蓝根作为烟熏燃料,可显著提高蜜蜂机体抗氧化和解毒能力,其中艾草对提高蜜蜂抗氧化酶和解毒酶活性以及免疫和解毒相关基因表达量的效果最佳。因此,利用中草药作蜜蜂烟熏材料在提高蜜蜂抵抗力的同时,不增加劳动力成本,不污染蜂产品,是解决养蜂疾病防控的简单而有效途径,对蜜蜂生态高效饲养和促进养蜂业发展具有重要意义。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 中草药 烟熏 抗氧化酶 解毒酶 免疫基因 解毒基因
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猪囊尾蚴API基因原核表达条件的优化 被引量:1
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作者 苏文强 胡鑫宇 +11 位作者 王秋霞 欧长波 郭爱疆 李辉 骆学农 余燕 张艳红 姜金庆 刘兴友 马金友 王松 才学鹏 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2017年第8期1-6,共6页
【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表... 【目的】获得猪囊尾蚴凋亡蛋白酶抑制剂(API)基因在大肠杆菌中的最佳表达条件,为API功能研究奠定基础。【方法】以表达载体pEGX-4T-1、pET-30a及猪囊尾蚴API基因的原核表达载体pEGX-4T-1/API-Flag、pET-30a/API为材料,对影响API蛋白表达的载体(pEGX-4T-1、pET-30a)、温度(25,30,37℃)、诱导时间(2,4,6,8h)、IPTG终浓度(0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mmol/L)和卡那霉素终浓度(100,200,300,400mmol/L)等条件进行优化,筛选重组蛋白最佳的表达条件。对在最佳条件下获取的目的蛋白进行超声处理,4℃、10 000r/min离心分别收集上清液和沉淀,对目的蛋白进行可溶性分析;SDS-PAGE后,将目的蛋白条带转印至硝酸纤维素膜上,与抗His标签抗体共孵育,检测目的蛋白的反应原性。【结果】当选择pET系列载体(pET-30a)时,API表达量高于其在pGEX系列(pGEX-4T-1)中的表达量。API融合蛋白最佳表达条件为:在含200mmol/L卡那霉素的LB培养基上于37℃培养3h后,加入终浓度为0.4mmol/L的IPTG,再于30℃诱导培养6h。SDS-PAGE结果表明,pET-30a/API融合蛋白分子质量约为53ku,与预期蛋白分子质量一致。Western-blot检测结果显示,重组蛋白pET-30a/API能够识别特异性抗体,显示获得了大量表达正确的目的蛋白。【结论】确定了API基因的最佳表达条件,获得了较大表达量的API融合蛋白。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 凋亡蛋白酶抑制基因 api蛋白 原核表达
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The Influence of Bt-Transgenic Maize Pollen on the Bacterial Diversity in the Midgut of Chinese Honeybees, Apis cerana cerana 被引量:5
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作者 JIANG Wei-yu GENG Li-li +6 位作者 DAI Ping-li LANG Zhi-hong SHU Chang-long LIN Yi ZHOU Ting SONG Fu-ping ZHANG Jie 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2013年第3期474-482,共9页
Using culture-independent technique polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE) and conventional culture techniques, ecological risk of transgenic maize pollen on gut bacteria of the... Using culture-independent technique polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis (PCR-DGGE) and conventional culture techniques, ecological risk of transgenic maize pollen on gut bacteria of the Chinese honeybee, Apis cerana cerana, was assessed. Honeybees were fed with Bt-transgenic maize pollen, non-transgenic near isoline pollen, linear crylAh gene (800 ng mL^-1) and supercoiled plasmid DNA (800 ng mL^-1) under laboratory conditions. The DGGE profile showed that the number of DGGE bands varied from 10.7 to 14.7 per sample, and the Shannon's index ranged from 0.85 to 1.00. The similarity calculated by PAST was mostly above 92%, indicating no obvious changes among treatments or within replicates. 14 bacterial strains affiliated with Alphaproteobacteria, Gammaproteobacteria, Firmicutes, and Actinobacteria were isolated and characterized on media under aerobic and anaerobic conditions. These results demonstrated that transgenic crylAh maize pollen did not induce significant changes of the honeybee gut bacterial community composition under laboratory conditions. 展开更多
关键词 Bacillus thuringiensis intestinal bacteria horizontal gene transfer transgenic maize apis cerana BIOSAFETY
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Cloning and Sequence Analysis of cDNA Encoding MRJP3 of Apis cerana cerana
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作者 SU Song-kun ZHNEG Huo-qing +2 位作者 CHEN Sheng-lu ZHONG Bo-xiong Stefan Albert 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2005年第9期707-713,共7页
By screening the worker (Apis cerana cerana) heads cDNA library using a fragment of the mrjp3 gene of Apis cerana as probe, 120 positive clones were obtained. The clone containing A. cerana cerana MRJP3 (AccMRJP3)... By screening the worker (Apis cerana cerana) heads cDNA library using a fragment of the mrjp3 gene of Apis cerana as probe, 120 positive clones were obtained. The clone containing A. cerana cerana MRJP3 (AccMRJP3) cDNA was selected. Based on the sequencing of the inserts of the positive clone, a sequence of AccMRJP3 cDNA which is 1 887 bp long including a poly (A) tail was obtained. The AccMRJP3 cDNA encompassed an open-reading frame (ORF) with 1 779 bp encoding 593 amino acids. The un-translated regions (UTR) of the 5′ end and 3′end are 46 bp and 160 bp in length, respectively. Similar to AmMRJP3 and AdMRJP3, the putative AccMRJP3 also has a repetitive region. The comparison of the repetitive region of AccMRJP3, AmMRJP3 and AdMRJP3 shows some differences between them. 展开更多
关键词 apis cerana cerana MRJP3 gene cloning Sequence analysis
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Cloning and Sequence Analysis of Carbonic Anhydrase-related Protein 10-like in Apis mellifera
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作者 Zhaoying LI 《Agricultural Biotechnology》 CAS 2012年第4期46-48,53,共4页
[ Objective ] This study aimed to clone and analyze the gene sequence encoding carbonic anhydrase-related protein lO-like ( CARP X) from Apis mellif era. [Method] The cDNA sequence of CARPX gene was cloned through R... [ Objective ] This study aimed to clone and analyze the gene sequence encoding carbonic anhydrase-related protein lO-like ( CARP X) from Apis mellif era. [Method] The cDNA sequence of CARPX gene was cloned through RT-PCR, and then analyzed with bioinformatic method. [Result] The full-length cDNA sequence of CARPX was 972 bp long and encoded 324 amino acid residues, including a signal peptide and two transmembrane domains. The predicted molecular mass was 37.1 kDa and the predicted isoeleetric point was 7.458. The CARP X from A. mellifera shared close relationship with proteins from Apisflorae, Bombtas impatiens, Bombus terrestris, Nasonia vitripennis and Acyrthosiphon pisum. The insect CARP X family may include two subfamilies. [ Conclusion] The results pro- vide basis for studying CARPs family. 展开更多
关键词 apis mellifera CARP X gene CLONING Sequence analysis Protein structure
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越冬西方蜜蜂4个亚种的转录组学差异分析 被引量:3
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作者 赵慧婷 赵淑果 +3 位作者 杜亚丽 刘苗苗 刘玉玲 徐凯 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期381-390,共10页
【目的】为进一步探讨西方蜜蜂Apis mellifera在越冬期基因表达模式的变化规律及抗寒机理,进而更好地指导蜂群越冬管理。【方法】利用转录组学鉴定和比较了西方蜜蜂4个亚种高加索蜂A.m.caucasica、欧洲黑蜂A.m.mellifera、意大利蜜蜂A.m... 【目的】为进一步探讨西方蜜蜂Apis mellifera在越冬期基因表达模式的变化规律及抗寒机理,进而更好地指导蜂群越冬管理。【方法】利用转录组学鉴定和比较了西方蜜蜂4个亚种高加索蜂A.m.caucasica、欧洲黑蜂A.m.mellifera、意大利蜜蜂A.m.ligustica和卡尼鄂拉蜂A.m.carnica在越冬期的差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs),并进行了GO和KEGG富集分析。利用qRT-PCR验证转录组测序结果的可靠性。【结果】西方蜜蜂4个亚种在越冬期DEGs的表达量变化各具特点,其中意大利蜜蜂在越冬初期到越冬中期DEGs表达量变化活跃,卡尼鄂拉蜂和欧洲黑蜂在越冬中期到越冬末期DEGs表达量变化活跃,高加索蜂在整个越冬期DEGs表达量相对稳定。越冬初期西方蜜蜂4个亚种的DEGs表达模式存在差异,高加索蜂和欧洲黑蜂中表皮蛋白22、卵黄原蛋白、气味结合蛋白14、热休克蛋白70和细胞色素P4509e2基因的表达量比意大利蜜蜂和卡尼鄂拉蜂的高,意大利蜜蜂中几丁质酶、防御素1、视黄醇脱氢酶和细胞色素b5基因的表达量较高,而卡尼鄂拉蜂中DEGs表达量均处于较低水平。从DEGs表达趋势来看,意大利蜜蜂和卡尼鄂拉蜂的热休克蛋白基因和ATP合酶亚基基因表达量在整个越冬期持续上调,同时高加索蜂和欧洲黑蜂的表皮蛋白22、卵黄原蛋白和细胞色素b/c1基因的表达量则呈连续下调趋势。GO与KEGG富集分析结果显示,意大利蜜蜂、卡尼鄂拉蜂和高加索蜂的DEGs在越冬初期到越冬中期富集在了氧化还原过程以及糖酵解/糖异生、氧化磷酸化和TCA循环代谢通路上,其中意大利蜜蜂和卡尼鄂拉蜂富集的DEGs是上调的,而高加索蜂富集的DEGs则是下调的;欧洲黑蜂在越冬期DEGs主要富集在了氨基酸代谢通路,另外还参与了Hippo, FoxO和Hedgehog信号通路。qRT-PCR验证结果与RNA-Seq的表达趋势相同,表明转录组测序数据可靠。【结论】本研究初步解析了4种西方蜜蜂亚种的抗寒机制,即意大利蜜蜂和卡尼鄂拉蜂在越冬期通过加强分解体内的糖原物质为机体供能,而高加索蜂越冬以前降低糖原物质分解速率,推测高加索蜂可能与欧洲黑蜂一样,通过在越冬以前积累体内抗寒物质,越冬期逐渐释放能量来抵御寒冷。 展开更多
关键词 西方蜜蜂 转录组 越冬 抗寒 差异表达基因 功能注释
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球囊菌侵染对意大利蜜蜂成年工蜂的影响
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作者 候梦赏 梁铖 +4 位作者 展江 秦加敏 邓尚靠 宗德琴 李志国 《河南农业科学》 北大核心 2023年第10期131-140,共10页
为了探究球囊菌侵染对意大利蜜蜂成年工蜂存活率、免疫基因、发育基因及肠道菌群的影响,将纯化培养的球囊菌孢子接种6日龄意大利蜜蜂成年工蜂,利用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测球囊菌侵染对意大利蜜蜂成年工蜂免疫基因、发育基因及肠道菌... 为了探究球囊菌侵染对意大利蜜蜂成年工蜂存活率、免疫基因、发育基因及肠道菌群的影响,将纯化培养的球囊菌孢子接种6日龄意大利蜜蜂成年工蜂,利用荧光定量PCR(qRT-PCR)检测球囊菌侵染对意大利蜜蜂成年工蜂免疫基因、发育基因及肠道菌群的影响。结果表明,连续3 d接种球囊菌孢子对意大利蜜蜂成年工蜂存活率无显著影响(χ2=0.133,P=0.715)。意大利蜜蜂工蜂中肠与后肠球囊菌孢子含量在接种球囊菌孢子4 d时分别显著高于接种8 d时(P<0.05)。与未接种组相比,接种球囊菌孢子4 d,意大利蜜蜂成年工蜂免疫相关基因abaecin、apidaecin、defensin-1、defensin-2、hymenoptaecin、GNBP-1和IMD均显著上调表达(P<0.05);接种球囊菌孢子8 d,意大利蜜蜂成年工蜂免疫相关基因相对表达量无显著差异(P>0.05);接种球囊菌孢子4 d和8 d,发育相关基因VGMC、usp、kr-h1、AMHex10869相对表达量无显著差异(P>0.05)。与未接种组相比,接种球囊菌孢子4 d,意大利蜜蜂成年工蜂肠道菌群Lactobacillus Firm-4与肠道菌总量U16S rRNA的含量显著上升(P<0.05);接种球囊菌孢子8 d后,肠道菌群Lactobacillus Firm-5的含量显著上升(P<0.05),肠道菌总量U16S rRNA的含量显著下调(P<0.05)。综上,球囊菌侵染不影响意大利蜜蜂成年工蜂的存活率,但会引起意大利蜜蜂成年工蜂的免疫应激反应,影响意大利蜜蜂成年工蜂肠道菌群的稳定及肠道核心菌群的含量。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 球囊菌 免疫基因 发育基因 肠道菌群
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