脑还丹对痴呆模型小鼠行为学和海马区APP mRNA表达的影响

目的:观察脑还丹对β淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠行为学和海马区APP mRNA表达的影响。方法:将36只3月龄的APP/PS1双转基因雄性小鼠随机分为模型组、脑还丹组和多奈哌齐组,每组各12只,另设12只相同月龄、体质量、遗传背景的C57BL/6J小鼠为正常组。脑还丹组和多奈哌齐组分别以脑还丹浓缩液(质量分数1.25 g/mL)、多奈哌齐药液(质量分数0.24 mg/L)各1.0 mL灌胃,脑还丹的用量为41.6 mg/(g·d),盐酸多奈哌齐片用量为8.0μg/(g·d);正常组和模型组以同容积双蒸水灌胃。1 d 1次,连续5个月。5个月后进行Morris水迷宫实验行为学测试,采用反转录聚合酶链反应测定海马区APP mRNA表达水平。结果:与模型组对比,正常组逃避潜伏期明显缩短(P>0.05);从第3天开始,脑还丹组及多奈哌齐组的潜伏期较模型组明显缩短,差异有统计学意义(P<0.05);多奈哌齐组与脑还丹组对比,差异均无统计学意义(P>0.05)。与模型组对比,正常组、脑还丹组和多奈哌齐组小鼠在原平台象限停留时间明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);多奈哌齐组与脑还丹组对比差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组对比,正常组、脑还丹组及多奈哌齐组海马区APP mRNA表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);而脑还丹组和多奈哌齐组对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:脑还丹对APP/PS1双转基因小鼠学习记忆功能具有改善作用,这可能与其降低海马区APP mRNA的表达、降低APP蛋白的生成、减少Aβ沉积的作用有关。

补阳还五汤对AD大鼠海马区β-APP mRNA、IL-1β mRNA、IL-6mRNA、TNF-α mRNA表达影响的研究

目的:采用分子杂交技术观察补阳还五汤对Aβ1-40所致老年痴呆(AD)大鼠海马区β-APP mRNA、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA及TNF-αmRNA表达的影响,进一步探讨该组方治疗AD的机制,为其临床应用提供实验依据。方法:70只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、补阳还五汤组、补气组、活血组和脑复康组,每10只。采用注射Aβ1-40的方法制备AD模型,分子杂交技术检测大鼠海马区β-APP mRNA、IL-1βmRNA、IL-6 mRNA、TNF-αmRNA的表达。结果与结论:补阳还五汤能够明显降低AD大鼠海马区β-APP mRNA、IL-1βmRNA、IL-6mRNA和TNF-αmRNA的表达,从而改善大脑记忆障碍,达到防治AD的作用。

50 Hz磁场暴露对Neuro2a/APP(695)细胞基因转录的影响

目的研究50 Hz磁场暴露对Neuro2a/APP(695)细胞基因转录的影响。方法Neuro2a/APP(695)细胞简单随机分为假性辐照组和磁场暴露组(n=3)。暴露条件为1.0 mT 50 Hz正旋波磁场,4 h/d,连续3 d;假性辐照组细胞除无磁场暴露外,余同磁场暴露组。暴露结束后按标准方法送样,进行转录组测序检测,包括样品RNA提取、数据质量评价和数据分析等。结果50 Hz磁场暴露后Neuro2a/APP(695)细胞有141种定性的基因表达发生了明显的变化,其中有129种表达上调、12种表达下调。GO富集分析结果显示,Neuro2a/APP(695)细胞中62种上调差异表达基因涉及432类显著GO功能富集,其中涉及生物学过程337类、细胞组分16类、分子功能79类;3种下调差异表达基因共涉及275类显著GO功能富集,其中涉及生物学过程260类、细胞组分5类、分子功能10类。KEGG通路分析显示,这些差异基因可能参与了20条KEGG通路,其中2个下调差异表达基因通路,18个上调差异表达基因通路。结论50 Hz磁场暴露可能对Neuro2a/APP(695)细胞的黏附连接、Hippo信号通路、糖胺聚糖生物合成-硫酸软骨素/硫酸皮肤素、蛋白消化和吸收和甘露糖型O-聚糖生物合成等方面产生影响,以上通路可能是50 Hz磁场对Neuro2a/APP(695)细胞产生影响的主要途径。

辛伐他汀对铜和高胆固醇阿尔茨海默病家兔海马淀粉样肽前蛋白mRNA表达的影响

目的研究辛伐他汀对铜和高胆固醇诱导的阿尔茨海默病(AD)家兔海马淀粉样肽前蛋白(APP)mRNA表达的影响。方法采用Sparks方法复制铜和高胆固醇诱导的AD家兔模型。辛伐他汀(5mg·kg-1·d-1)灌胃3w,高效液相色谱法(HPLC)检测家兔海马胆固醇含量,实时定量RT-PCR法检测海马APP mRNA表达水平。分析海马胆固醇含量与海马APP mRNA表达的相关性。结果模型组海马胆固醇含量及APP mRNA表达水平显著高于正常组(P<0.05)。辛伐他汀组海马胆固醇含量及APP mRNA表达水平显著低于模型组(P<0.05);与正常组相无显著差别(P>0.05)。海马APP mRNA表达水平与海马胆固醇含量呈正相关(r=0.58,P<0.05)。结论辛伐他汀可通过降低海马胆固醇含量减少APP转录,这可能是辛伐他汀降低AD发病的机制。

树鼩中APP基因特征描述及可变剪接体的分型鉴定

目的区分并鉴定树鼩中APP基因mRNA的多种可变剪接体,对APP基因特征进行描述,并确定其在各组织中的表达分布。方法参考已知人的和树鼩基因组预测的APP基因序列,设计树鼩APP基因mRNA剪切体外显子的共同特异性引物。分别从树鼩不同组织中提取总RNA,反转录为c DNA,利用高保真酶扩增目的剪切体DNA。根据PCR扩增产物电泳条带的有无和大小初步判断剪接体的型别,最后将PCR产物胶回收进行测序鉴定,对获得的基因进行特征描述,并结合定量PCR的结果确定了各剪接体在不同组织中分布情况。结果结果表明树鼩APP剪接体的全长为3514 bp,有一个109 bp的5’-UTR,1092bp的3’-UTP。APP基因在调查的9个物种中高度同源保守,显示树鼩与灵长类存在一个较近的亲缘关系。通过三维建模获得了树鼩和人的APP基因共同拥有的4个结构域。同时确认这4种通过外显子跳跃产生的APP可变剪接体在不同组织中的分布和表达。4种检测到的剪接体APP770,APP695,APP751,APP677均表达于肺、肾和肠,表达量最高的是肺、肌肉和睾丸。结论对树鼩APP基因可变剪接体的表达研究,有助于推动树鼩作为阿尔茨海默病模型深入研究疾病的发生机制和药物研发。

补肾填精方防治阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆损害的分子机制

目的探讨补肾填精方防治铝致阿尔茨海默病(AD)的分子机制。方法用长期腹腔注射AlCl3复制大鼠动物模型,用RT-PCR检测端脑皮质beta-淀粉样前体蛋白mRNA异构体-APP695mRNA水平,用Y电迷宫仪检测大鼠的学习记忆能力。结果模型组大鼠端脑皮质APP695mRNA的表达水平明显升高(P<0.05),学习记忆能力明显降低(P<0.05)。中药干预后,端脑皮质APP695mRNA表达较模型组明显降低(P<0.01),学习记忆能力明显提高(P<0.05)。结论端脑皮质APP695mRNA表达水平升高与学习记忆能力减低明显相关,通过抑制端脑皮质APP695mRNA的过量表达是补肾填精方防治AD模型大鼠学习记忆能力损害的机制之一。

氯化铝染毒对大鼠海马APP基因甲基化的影响

目的观察氯化铝（AlCl3）对大鼠海马淀粉样前体蛋白（APP）启动子区甲基化及β淀粉样蛋白（Aβ）含量的影响。方法健康6月龄雄性SPF级SD大鼠40只,分成4组（正常对照组和AlCl3低、中、高剂量组）,每组10只,各组分别腹腔注射AlCl30、10、20和30 mg/kg组,正常对照组注射相应体积生理盐水,连续5天,休息2天,共8周。甲基化特异性PCR法（MSP）检测海马APP启动子区的甲基化状态,实时荧光定量PCR（RT-PCR）测定APP mRNA表达水平,ELISA法测APP、Aβ（42）蛋白表达量。结果随着AlCl3浓度的增加,大鼠平均逃避潜伏期明显延长（P〈0.05）,AlCl3中、高剂量组穿越平台的次数明显减少（P〈0.05）;AlCl3染毒组海马APP启动子区甲基化检出率降低（χ^2=27.61,P〈0.05）,其中,高剂量组APP甲基化的检出率低于其余3组（P〈0.01）,APP甲基化的检出率随AlCl3染毒剂量增加而降低的趋势（趋势χ^2=19.08,P〈0.01）。各AlCl3染毒组APP mRNA的表达水平高于生理盐水组（F=8.973,P〈0.05）。与正常对照组比较,各AlCl3染毒组大鼠海马APP、Aβ（42）蛋白浓度均增高（F=11.14,P=0.032;F=17.82,P=0.018）。与低剂量组相比,中剂量组APP蛋白表达量增加,高剂量组APP、Aβ（42）蛋白表达量增加,差异均有统计学意义（P〈0.05）。Aβ（42）蛋白免疫组化法检测结果示,中、高剂量组海马神经细胞内外出现棕黄色物质,考虑有Aβ的沉积。结论氯化铝染毒可引起大鼠海马APP启动子甲基化水平降低,进而影响APP mRNA表达水平增高,海马组织APP表达量增多,从而导致Aβ产生增多而沉积。