AQP1在黄芩苷调控肺腺癌细胞增殖、迁移、凋亡中的作用及其分子机制

目的通过观察AQP1在黄芩苷调控肺腺癌细胞增殖、迁移、凋亡中的作用探讨其分子机制。方法将人肺腺癌细胞株LTEP-A2分为对照组及黄芩苷组,对照组正常培养细胞,黄芩苷组采用黄芩苷处理48h。采用qRT-PCR法检测细胞中AQP1表达,以CCK-8法、划痕实验、流式细胞术分别观察细胞增殖、迁移能力及凋亡情况。将LTEP-A2细胞分为对照组、AQP1降表达组、AQP1过表达组,对照组不做处理,AQP1降表达组、AQP1过表达组分别转染AQP1小干扰siRNA及AQP1过表达载体,按照上法观察细胞增殖、迁移能力及凋亡情况。将转染AQP1过表达载体的AQP1过表达LTEP-A2细胞分为AQP1过表达组、AQP1过表达+黄芩苷组、AQP1过表达+LY294002组、AQP1过表达+wortmannin组,AQP1过表达组不做处理,余下各组分别采用黄芩苷、PI3Kα抑制剂LY294002、磷酸化PI3Kα(p-PI3Kα)抑制剂wortmannin处理;采用Western blotting法观察各组PI3K/Akt信号通路相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、苏氨酸激酶(p-Akt)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达。结果黄芩苷组AQP1表达、细胞增殖抑制率低于对照组,细胞迁移距离、细胞凋亡率高于对照组(P均<0.05)。细胞增殖抑制率AQP1过表达组>对照组>AQP1降表达组,细胞迁移距离、细胞凋亡率AQP1降表达组>对照组>AQP1过表达组(P均<0.05)。LTEP-A2细胞VEGF、IGF、mTOR、p-Akt、HIF-1α蛋白表达AQP1过表达组>AQP1过表达+黄芩苷组、AQP1过表达+LY294002组、AQP1过表达+wortmannin组(P均<0.05),过表达+黄芩苷组、AQP1过表达+LY294002组、AQP1过表达+wortmannin组各项蛋白表达差异均无统计学意义。结论黄芩苷通过下调AQP1表达抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移并诱导其凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路激活有关。

藏绵羊肺脏结构特点及HIF-1α和AQP1的表达特性

【背景】低氧诱导因子-1α (hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是细胞对缺氧应激做出适应性反应的关键因子之一,主要通过调节基因转录来维持细胞中氧的供需平衡。水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)是疏水性的跨膜转运蛋白,为机体水稳态平衡提供重要的系统调节。肺中,AQP1主要通过调节肺泡、肺间质和毛细血管间水转运从而保持肺内液体平衡。高原环境由于低氧、高寒、大风和强辐射等特点,能够适应并生存的物种相对较少,藏羊作为适应高海拔、高寒气候的特有物种,形成了独特的形态结构和生理功能适应。肺脏作为呼吸主要的执行器官,对低氧或缺氧等极为敏感。【目的】通过研究藏绵羊肺脏结构特点以及HIF-1α与AQP1在不同海拔藏绵羊肺脏中的表达特性,揭示其在藏绵羊高原环境适应性中所起的作用。【方法】选择不同生存海拔藏绵羊和小尾寒羊,断颈致死后快速采集肺组织,H.E染色、PAS染色、Masson染色等观察肺脏显微结构及弹性纤维分布,免疫组织化学SP法及实时荧光定量PCR法检测肺组织中HIF-1α与AQP1蛋白及基因的表达特点。【结果】藏绵羊肺脏被膜厚度为40.28μm,与小尾寒羊肺脏被膜厚度无显著差异,但其弹性纤维含量显著多于小尾寒羊(P<0.05);藏绵羊细支气管黏膜上皮单位面积内杯状细胞数量显著多于小尾寒羊(P<0.05),但小支气管及以上分支中两者无显著差异;藏绵羊终末细支气管黏膜上皮仍有少量散在分布的杯状细胞且其终末细支气管平滑肌厚度显著高于小尾寒羊(P<0.05);藏绵羊肺内微动脉(直径小于100μm)平滑肌占血管外径比例显著小于小尾寒羊;藏绵羊呼吸性细支气管平滑肌厚度及单位面积内毛细血管数量显著高于小尾寒羊。肺脏中HIF-1α蛋白主要表达于细支气管黏膜上皮、肺微血管内皮和肺泡隔中,主要表达于细胞质;高海拔藏绵羊和小尾寒羊肺组织中HIF-1α表达均显著高于低海拔绵羊,低海拔藏绵羊肺脏中HIF-1α的表达显著高于低海拔小尾寒羊。AQP1蛋白主要表达于肺泡上皮、肺泡隔及肺微血管内皮、细支气管平滑肌中,主要定位于细胞膜;高海拔藏绵羊肺组织中AQP1表达显著高于低海拔藏绵羊和小尾寒羊(P<0.05),但高海拔和低海拔小尾寒羊肺脏中AQP1的表达无显著差异(P>0.05)。【结论】藏绵羊肺被膜含有更多的弹性纤维,微血管平滑肌含量较少,但呼吸性细支气管上皮杯状细胞数量及平滑肌含量较多;藏绵羊肺脏中HIF-1α和AQP1的表达均显著高于小尾寒羊,且其表达均随海拔升高而增强。

槐角苷通过调控AQP1、AQP3表达对萎缩性阴道炎大鼠的保护作用

目的观察槐角苷对萎缩性阴道炎大鼠的保护作用。方法将50只大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组、赋型剂组、槐角苷组,切除卵巢进行造模,假手术组和模型组不给药,其余组连续阴道给药14 d后,观察用药前后大鼠一般体征变化(体质量、阴道pH、阴道健康状况、乳酸杆菌、内糖原),血清E2和FSH水平,阴道上皮黏膜中AQP1、AQP3蛋白和mRNA表达。结果与模型组比较,槐角苷组大鼠体质量、血清E2和FSH水平无明显变化(P>0.05),阴道健康评分、乳酸杆菌数量、上皮细胞数量、内糖原表达、AQP1、AQP3蛋白和mRNA表达升高(P<0.05),炎细胞数量、阴道pH降低(P<0.05)。结论槐角苷对萎缩性阴道炎大鼠具有保护作用,其机制与提高大鼠阴道上皮黏膜AQP1和AQP3表达有关。

水通道AQP1敲除小鼠肿瘤血管生成障碍及肿瘤生长减缓

血管生成是肿瘤生长、浸润和转移的必要步骤. 肿瘤血管生成涉及瘤旁组织血管内皮细胞增殖、向肿瘤细胞团内迁移以及管腔形成,目前机理尚不完全清楚. 水通道AQP1在多种肿瘤血管内皮高表达,提示其可能参与肿瘤血管的生成过程. 应用AQP1敲除小鼠荷瘤实验证实了AQP1在黑色素瘤生长和血管新生中的作用. 结果表明,皮下接种的黑色素瘤在AQP1敲除小鼠的生长较之在野生型小鼠延迟近30%(P< 0.01). 免疫组化与肿瘤病理形态学分析显示,AQP1在野生型小鼠黑色素瘤血管内皮细胞上高表达,而在AQP1敲除小鼠黑色素瘤血管内皮细胞呈阴性表达. 在病理结构上,黑色素瘤细胞围绕血管分支呈岛状分布. 野生型小鼠黑色素瘤内血管管腔较细小,而AQP1(-/-)小鼠黑色素瘤内血管床显著膨大. AQP1(-/-)小鼠肿瘤内平均微血管密度(47/mm2) 较之AQP1(+/+)肿瘤(142/mm2) 减少67%(P< 0.01). 围绕AQP1(-/-)肿瘤血管的肿瘤细胞岛周边坏死区域明显大于AQP1(+/+)肿瘤. 上述结果提出确切证据表明,AQP1缺失使肿瘤血管生成发生障碍,从而影响了肿瘤血液供应和肿瘤生长. AQP1参与肿瘤血管生成的机理值得深入研究.

阳和平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织AQP1和AQP5表达的影响

目的通过研究阳和平喘颗粒对哮喘大鼠肺组织水通道蛋白1（AQP1）和水通道蛋白5（AQP5）表达的影响,旨在从水液代谢及气道黏液分泌的角度探讨阳和平喘颗粒治疗支气管哮喘的作用机制。方法 SD大鼠90只随机分为正常组（N）、模型组（M）、阳和平喘颗粒低、中、高剂量治疗组（YHPC-L、YHPC-M和YHPC-H）和地塞米松治疗组（DXM）,每组15只。其中,M、YHPC-L、YHPC-M、YHPC-H和DXM组采用卵蛋白（OVA）腹腔注射致敏及雾化吸入的方法建立哮喘大鼠模型,同时应用氢化可的松腹腔注射复制肾阳虚模型,N组则均使用生理盐水作为对照。采取HE染色检测各组大鼠肺组织形态学改变,应用Real-time PCR和Western blot检测各组大鼠肺组织AQP1和AQP5mRNA及蛋白表达水平的变化,采用免疫组化法检测AQP1和AQP5在肺组织的分布及表达水平变化。结果与N组相比,M组AQP1和AQP5在mRNA及蛋白表达水平均发生显著下降（P〈0.01）;与M组相比,YHPC-L、YHPC-M和YHPC-H组AQP1和AQP5的表达水平均显著上升（P〈0.05～0.01）,且具有一定的剂量依赖效应;与DXM相比,YHPC-L对AQP1和AQP5的作用效果低于DXM（P〈0.05）,而YHPC-M和YHPC-H则与之具有相当的作用效果（P〉0.05）。结论阳和平喘颗粒可通过上调AQP1和AQP5的表达而调控水液代谢平衡及气道黏液分泌,进而发挥其治疗支气管哮喘的作用。

六味地黄丸对甲亢型肾阴虚大鼠肾组织AQP1、AQP2含量的影响

[目的]观察六味地黄丸对甲亢型肾阴虚大鼠肾组织水通道蛋白1(AQP1)、水通道蛋白2(AQP2)含量变化的影响。[方法]30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、六味地黄丸组,采用甲状腺片制备肾阴虚模型,六味地黄丸给药观察,连续21天。给药前后记录各组大鼠体重、体温、饮水量、尿量等体征;动物处理后,检测大鼠皮肤含水量,ELISA法检测大鼠肾组织AQP1和AQP2含量。[结果]六味地黄丸组大鼠较模型组大鼠体温显著降低(P<0.01)、饮水量明显减少(P<0.05)、尿量和皮肤含水量均显著增多(P<0.01),肾组织AQP1、AQP2含量均显著降低(P<0.01),而与正常组相比无统计差异。六味地黄丸未能有效纠正模型大鼠体重的降低。[结论]六味地黄丸能有效改善甲亢型肾阴虚模型大鼠体温升高以及饮水量、尿量和皮肤含水量等水液代谢相关指标的紊乱,纠正其肾组织AQP1和AQP2含量的异常升高。

基于水通道蛋白AQP1/AQP3的表达探讨石膏对急性软组织损伤大鼠模型的影响

目的研究生石膏和煅石膏对急性软组织损伤大鼠模型水通道蛋白AQP1、AQP3表达的影响,对石膏消肿的作用机制进行初步研究。方法采用砝码自由落体运动制备急性软组织损伤大鼠模型,造模成功后将动物随机分为模型组,阳性药组(双氯芬酸0.75 g/kg),煅石膏高、中、低剂量组(1.0、0.5、0.25 g/kg)、生石膏高、中、低剂量组(1.0、0.5、0.25 g/kg),另设空白对照组,每组10只。除模型组与空白对照组外,其余各组均给予相应药物,每天换药1次,连续7 d。采用Western blotting和免疫组化法检测各组大鼠损伤组织中AQP1/AQP3表达变化。结果与空白对照组比较,模型组大鼠损伤骨骼肌中AQP1/AQP3表达明显下降(P<0.01);与模型组比较,煅石膏高、中、低剂量组和阳性药组大鼠损伤骨骼肌中AQP1/AQP3表达明显增加(P<0.01),生石膏组无明显差异。结论石膏煅制后可能通过调节急性软组织损伤模型骨骼肌中AQP1/AQP3的表达从而发挥消肿的作用。

增液汤干预干燥综合征模型鼠AQP1/AQP8的表达规律研究

目的:观察增液汤干预下干燥综合征(Sjogren's Syndrome,SS)模型小鼠肺及结肠组织中水通道蛋白AQP1(aquaporin1)、AQP8(aquaporin8)的表达规律。方法:选用BALB/c小鼠,各组10只,免疫诱导法建立干燥综合征小鼠模型,产生SS特异性临床表现和病理改变,采用免疫组化和Western blot蛋白质印迹法观察增液汤对SS模型小鼠肺及结肠组织中AQP1/AQP8表达的影响。结果:增液汤可以增强肺及结肠组织中AQP1的蛋白表达(P<0.01),对AQP8无影响。结论:AQP1在干燥综合征模型鼠多组织中的表达下调,可能是干燥综合征水液代谢障碍,多脏器损伤的机制之一;增液汤恢复机体阴液,起到"增水"功效可能与上调AQP1蛋白表达有关。

AQP1、HPA和VEGF在非小细胞肺癌组织中的表达和临床意义

目的探讨水通道蛋白(AQP1)、乙酰肝素酶(HPA)和血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达和临床意义。方法采用免疫组织化学法检测手术切除的78例标本中AQP1、HPA和VEGF的表达,分析其表达与患者临床病理特征和预后之间的关系,并进一步探讨三者之间的相互关系。结果NSCLC组织中AQP1、HPA和VEGF的阳性表达率分别为:32.1%(25/78),60.3%(47/78)和73.1%(57/78)。AQP1在肺腺癌中表达最多,阳性率为57.5%(23/40)。HPA在肺腺癌中表达的阳性率明显高于肺鳞癌中的表达。VEGF的表达在不同的病理类型间无统计学差异。AQP1的表达与肺腺癌N分期、复发/转移和生存时间密切相关(P<0.05);HPA和VEGF的表达与肿瘤N分期、临床分期、复发/转移和生存时间密切相关(P<0.05)。肺腺癌组织中AQP1、HPA和VEGF的表达呈正相关(P<0.05)。结论NSCLC中存在AQP1、HPA和VEGF的表达;HPA调控下游VEGF的表达,肿瘤微环境中的HPA和VEGF共同调控肿瘤细胞AQP1的表达,促进肺腺癌的侵袭和转移。3者联合检测可作为判断NSCLC转移潜能和预后的指标,可能为NSCLC的治疗提供新的分子靶点和策略。

以丹参调节AQP1的特征表达验证“活血利水”法部分本质

目的观察外伤血瘀证模型大鼠AQP1表达特征及丹参的调节效应,验证"活血利水"法部分本质。方法用"定量打击"法制备血瘀证大鼠模型,观察丹参与醋甲唑胺对大鼠损伤局部肌肉与肾组织AQP1表达的影响。结果损伤局部肌肉和肾组织瘀血、水肿,损伤局部炎性细胞浸润;大鼠损伤局部肌肉与肾组织干湿重结果示模型组较正常组升高,丹参组、抑制组、干预组较模型组明显减低;AQP1表达显示模型组较正常组明显降低,丹参组较模型组明显升高。结论血瘀证大鼠AQP1表达降低,可能是瘀水关联的影响因素之一。丹参对AQP1有调节,减少水停积,可能是"活血利水"的机制。

AQP1在慢传输型便秘发病过程中的作用机制探讨

目的:通过建立大鼠慢传输型便秘模型,探讨AQP1在慢传输型便秘发病过程的作用机制。方法:SD大鼠48只,随机分为4组:空白组,模型组,莫沙必利治疗组,麻仁丸治疗组。空白组大鼠用生理盐水灌胃,便秘模型组和治疗组大鼠分别用复方地芬诺酯灌胃,建立大鼠慢传输型便秘模型。模型建立后,治疗组大鼠分别用莫沙必利、麻仁丸灌胃,观察各组大鼠大便粒数及大便湿重。治疗结束后将大鼠集体处死,取大鼠近端结肠标本,用免疫组织化学的方法检测各组大鼠近端结肠AQP1的表达情况。采用彩色病理图像分析系统对阳性表达的平均光密度值进行半定量分析。结果:便秘组结肠AQP1的平均光密度(MD)值大于空白对照组、莫沙必利治疗组、麻仁丸治疗组的MD值(P<0.05),差异有统计学意义;莫沙必利治疗组和麻仁丸治疗组的MD值均大于空白对照组(P<0.05),差异有统计学意义。结论:大鼠近端结肠AQP1的表达增高使结肠对水分的吸收增加,从而引起大便干结,排便困难,导致慢传输便秘的发生。

真武汤和越婢汤对阿霉素肾病大鼠AQP1/AQP2的影响

目的:分别观察真武汤、越婢汤对阿霉素肾病大鼠肾组织AQP1、AQP2表达的影响,以探讨中医不同利水法的作用机制及差异。方法:选用雄性SD大鼠48只按随机数字表法分为空白组、模型组、真武组及越婢组,采用尾静脉注射阿霉素建立肾病模型,药物灌胃6周后生化检测各组大鼠24 h尿蛋白定量、肝功(ALB,ALT)、肾功(Scr,BUN)及血脂(CHOL,TG)等,HE染色观察大鼠肾脏病理,免疫组化检测肾组织AQP1、AQP2表达。结果:与模型组比较中药2组24 h尿蛋白定量、血脂均明显下降,白蛋白升高,肾脏病理均明显改善,肾组织AQP1、AQP2表达均明显升高,但中药2组比较差异无统计学意义。结论:真武汤和越婢汤均可上调阿霉素肾病大鼠肾组织AQP1、AQP2的表达,改善上述生化指标,减轻肾脏病理损害,但中药2组之间比较差异无统计学意义。

AQP1对中国人肺腺癌细胞分化影响

目的研究AQP1与中国人肺腺癌细胞分化的关系。方法取临床手术的肺癌标本进行HE染色和SP法免疫组织化学染色。结果高分化腺癌细胞膜和细胞质表达AQP1;低分化腺癌细胞膜表达AQP1;未分化腺癌细胞不表达AQP1,只要形成微小的腺泡,癌细胞就表达AQP1。结论AQP1参与肺腺癌细胞的分化和腺泡的形成。

中医引经药葛根对食管癌细胞系TE-1及ECA109 AQP1 mRNA表达的影响

目的探讨中医引经药葛根对食管癌细胞系TE-1及ECA109 AQP1 mRNA表达的影响。方法以5 g/L及10 g/L的葛根素注射液干预食管癌细胞系TE-1及ECA109,干预24 h后用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测AQP1 mRNA表达,观察表达结果。结果 AQP1在食管癌细胞系ECA109及TE-1中均有少量表达;葛根素可上调ECA109及TE-1细胞系AQP1表达。结论葛根素通过上调AQP1 mRNA的表达,从而影响食管癌细胞水转运。

水通道蛋白亚型AQP1的研究进展

水是生命最基本的组成成分，机体的水平衡对动物的生命维持非常重要。长期以来．人们一直认为水跨生物膜的移动仅靠单纯扩散。但近10余年来大量研究证实机体内广泛存在着特异性的水通道家族（aquapofins，AQPs）。由于它们在生命活动中的重要性，对它们的结构、功能研究一直是近年来生物学界的热点。其中对水通道蛋白1（AQP1）的研究最深入．本文在此对其研究进展作一概述。

异丙酚对早期脓毒症大鼠肺AQP1基因表达及血清TNF-α浓度的影响

目的:研究异丙酚治疗早期脓毒症时肺水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)基因表达的差异和对TNF-α的影响。方法:按完全随机设计,分为正常组(N组),脂多糖组(L组),脂多糖+异丙酚组(LP组),每组20只(n=20)。每组再根据注射药物后1、2、4、8h的不同时间点,随机分为T1、T2、T4、T8亚组(n=5)。各组于相应时间点处死动物,留取肺标本,以RT-PCR及相关软件分析各组AQP1 mRNA表达;用ELISA法测血清TNF-α浓度。结果:脂多糖对肺AQP1 mRNA的表达有明显的抑制作用,尤其在注射1h后表达明显减少(P<0.05),2～8h逐渐上升,但仍低于对照组(P<0.05);异丙酚能使脓毒症大鼠AQP1基因上调(P<0.05),在早期(1h)差异有统计学意义(P<0.05)。血清TNF-α浓度,L组注射LPS后1hTNF-α血清水平骤然升高至峰值(P<0.05),至4h后渐趋平稳,但各时间点浓度水平均高于对照组(P<0.05),异丙酚治疗组各时间点TNF-α值较L组明显降低(P<0.05),于1h后渐升高,于4h达到峰值(P<0.05)。结论:注射LPS1h后可迅速下调肺组织AQP1基因的表达和使TNF-α血清水平骤然升高至峰值;异丙酚治疗脓毒症大鼠后,早期(1h后)肺组织AQP1mRNA表达明显上调,降低了TNF-α浓度。

恶性胸水与水通道蛋白AQP1之间相关性探讨

目的:拟阐明水通道蛋白AQP1与恶性胸水产生机制的相关性,给予临床治疗提供科学依据。方法:利用免疫组织化学法和荧光定量PCR方法检测AQP1、CD34和TNF-αmRNA表达水平,并探讨其与胸水之间的相关性。结果:免疫组织化学方法检测结果提示AQP1在正常肺近胸膜下的毛细血管内皮细胞中强阳性表达,间皮细胞中弱表达。荧光定量PCR结果有胸水的肺癌组织中CD34和TNF-αmRNA的表达量比对照组、无胸水肺癌组织和炎性胸水相比增多,差异有统计学意义(P<0.05)。CD34的表达与VEGF有着密切的正相关,但AQP1的表达与CD34不相关,伴有胸水的肺癌组织中AQP1表达相对减少。结论:NSCLC伴有胸水时其癌组织中TNF-α和VEGF高表达导致新生毛细血管增多,即CD34表达增多;肿瘤来源TNF-α导致血管通透性增高,导致胸腔内渗出液不断增多;新生血管大量出现但相应的AQP1并未同步增多,导致机体水的严重失衡最后形成恶性胸水,推测癌性胸水与AOP1具有潜在联系。

人AQP1基因的重组腺病毒构建及鉴定

目的 构建人AQP1(hAQP1)基因的重组腺病毒载体。方法 采用DNA重组与细菌内同源重组技术 ,构建含hAQP1的复制缺陷型重组腺病毒载体 (pAdEasy 1 hAQP1) ,并观察pAdEasy 1 hAQP1在ECV 3 0 4中的感染情况。PCR方法鉴定重组腺病毒载体 ,利用绿色荧光蛋白GFP检测病毒滴度和感染效率。结果 PCR及限制性内切酶酶切鉴定证明pAdEasy 1 hAQP1构建成功。