LC-MS/MS法同时测定大鼠组织中替格瑞洛及代谢物的质量浓度

目的建立LC-MS/MS法同时测定大鼠组织中替格瑞洛及其代谢物AR-C124910XX质量浓度的方法,并应用于替格瑞洛及其代谢物组织分布的研究。方法组织样品采用乙醚提取,Agilent XDB-C_(18)柱分离;流动相为甲醇-乙腈-体积分数0.1%甲酸水溶液(体积比50∶20∶30),流速为0.7 m L·min^(-1);质谱采用MRM多反应检测模式,正离子方式检测。结果替格瑞洛在0.1~50μg·g^(-1)内线性关系良好,日间、日内精密度RSD均不大于12.7%;AR-C124910XX在0.05~20μg·g^(-1)内呈良好线性关系,日间、日内精密度RSD均不大于10.7%。结论该法适合于测定大鼠组织中替格瑞洛及其代谢物的质量浓度,并为替格瑞洛的进一步临床研究奠定基础。

LC-MS/MS法测定人血浆中的替格瑞洛及其活性代谢物的质量浓度

目的建立一种快速、灵敏的液相色谱-串联质谱方法(LC-MS/MS)测定人血浆中的替格瑞洛及其主要活性代谢物AR-C124910XX的质量浓度,并研究其在健康受试者体内的药物动力学。方法血浆样品经过乙腈蛋白沉淀提取,以替格瑞洛-d7为内标,采用Dikma C18色谱柱(50 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈:醋酸铵(5 mmol·L^-1为流动相进行梯度洗脱;质谱采用电喷雾离子化源,多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)检测模式,负离子方式检测。结果人血浆中替格瑞洛及其活性代谢物AR-C124910XX在质量浓度为0.781~800μg·L^-1内线性关系良好,定量下限为0.781μg·L^-1。替格瑞洛及AR-C124910XX的日内、日间的精密度(RSD,%)均小于12.61%,准确度(RE,%)均在±7.88%内;替格瑞洛的基质效应在99.53%~108.73%内;AR-C124910XX的基质效应在99.34%~105.96%内。结论该方法简单、快速、灵敏度较高,适用于替格瑞洛和AR-C124910XX在健康受试者中的临床药动学研究。

替格瑞洛片在中国健康志愿者空腹和进食条件下的生物等效性

目的:评价国产替格瑞洛片与进口替格瑞洛片在中国健康志愿者空腹和进食条件下的生物等效性。方法:采用开放、均衡、单剂量、双周期、随机交叉设计,分为空腹和进食2种条件。每种条件下各有36名健康志愿者随机分为2组,单剂量口服替格瑞洛片受试制剂(T)或参比制剂(R)90 mg,用经过验证的高效液质联用(HPLC-MS/MS)法测定血浆中替格瑞洛及其代谢产物AR-C124910XX的浓度。应用Phoenix Win Nonlin软件6.4版,采用非房室模型计算药动学参数,评价生物等效性。结果:空腹条件下,替格瑞洛受试制剂与参比制剂的Cmax分别为(648±130)和(627±186)ng·m L^-1;Tmax分别为(1.50[0.67,3.00])和(2.00[1.00,4.00])h;t1/2分别为(8.23±1.12)和(8.20±1.25)h;AUC0-t分别为(4061±1097)和(3905±1049)ng·h·m L^-1;AUC0-∞分别为(4136±1147)和(3979±1102)ng·h·m L^-1;2种制剂的Cmax,AUC0-t,AUC0-∞经对数转换后90%可信区间分别为99.20%~113.15%,99.60%~107.66%和99.49%~107.63%,2种制剂的Tmax非参数法检验差异无统计学意义。进食条件下,替格瑞洛受试制剂与参比制剂的Cmax分别为(527±152)和(521±156)ng·m L^-1;Tmax分别为(4.00[1.00,6.00])和(3.00[1.00,6.00])h;t1/2分别为(8.57±1.19)和(8.37±1.11)h;AUC0-t分别为(4656±1474)和(4574±1261)ng·h·m L^-1;AUC0-∞分别为(4775±1562)和(4686±1332)ng·h·m L^-1;2种制剂的Cmax,AUC0-t和AUC0-∞经对数转换后90%可信区间分别为94.22%~108.93%,97.03%~104.63%和97.00%~104.73%,2种制剂的Tmax非参数法检验差异无统计学意义。结论:国产替格瑞洛片和进口替格瑞洛片在中国健康志愿者空腹和进食条件下均具有生物等效性。

犬血浆中替格瑞洛及其活性代谢产物的LC-MS/MS法测定

建立了液相色谱-串联质谱法同时测定犬血浆中的替格瑞洛（1）及其主要活性代谢产物AR-C124910XX （2）.使用C18色谱柱,以乙腈∶2 mmol/L乙酸铵溶液（70∶30）为流动相,地西泮为内标,采用TQ-MS检测器,电喷雾离子源（ESI）,以正离子多反应监测（MRM）方式进行定量分析,监测离子对m/z 523.3→m/z 127.1 （1）、m/z 479.3→m/z 153.1 （2）和m/z 284.9→m/z 193.0（内标）.1、2均在50～10 000 ng/ml范围内线性关系良好;提取回收率为109.8％～ 115.1％和109.3％～114.5％,日内RSD≤6.8％,日间RSD≤14.2％.

替格瑞洛的体外代谢及其与他汀类药物的相互作用研究

目的考察替格瑞洛在大鼠肝微粒体的酶动力学及其与CYP3A的底物药物辛伐他汀、洛伐他汀及阿托伐他汀的相互作用,以期为临床上替格瑞洛与他汀类药物的合理使用提供科学依据。方法将替格瑞洛与大鼠肝微粒体进行体外共孵育,孵育一定时间后用含有内标(地西泮,10 ng·mL^-1)的甲醇终止反应,并沉淀蛋白,14 000 r·min^-1离心10 min后取上清液进行分析,采用LC-MS/MS测定微粒体酶孵育体系中活性代谢产物AR-C124910XX的浓度,使用Prism 5软件计算主要的酶促动力学参数Km,Vmax与CLint。在得到Km后,反应体系中底物替格瑞洛的浓度选择为1/3Km^3Km内的3个浓度,辛伐他汀、洛伐他汀及阿托伐他汀的浓度范围为1~100μmol·L^-1,通过体外大鼠肝微粒体代谢实验研究其与替格瑞洛代谢性相互作用。使用SigmaPlot 12.3软件酶动力学模块,根据Dixon公式计算各他汀对替格瑞洛代谢的可逆性抑制常数Ki,并根据标准差值选择最符合的模型。结果替格瑞洛在大鼠肝微粒体的代谢符合米氏反应动力学,其转化生成AR-C124910XX的Km值为32.2μmol·L^-1,Vmax为149.0 pmol·min^-1·mg(pro)^-1。表观清除率CLint为4.63 nL·min^-1·mg(protein)^-1;辛伐他汀显著抑制替格瑞洛活性代谢产物的生成,其抑制符合混合抑制模型。抑制常数Ki为0.58μmol·L^-1,α值为7.5,β值为0.56。洛伐他汀及阿托伐他汀对替格瑞洛代谢呈现出中等强度的抑制作用,其抑制亦符合混合抑制模型,抑制常数Ki分别为2.9和7.5μmol·L^-1,α值分别为3和1.7,β值为0.34和0.29。结论替格瑞洛在大鼠肝微粒体的代谢符合米氏反应酶动力学;辛伐他汀对替格瑞洛有显著程度的代谢性抑制作用,洛伐他汀和阿托伐他汀对替格瑞洛有中等程度的抑制作用,临床上替格瑞洛与他汀类药物合用时可能需要考虑其与辛伐他汀的相互作用。

HPLC-MS/MS法同时测定人血浆中替格瑞洛和阿司匹林及其代谢物

目的:建立液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)法同时测定人血浆中替格瑞洛、AR-C124910XX、阿司匹林和水杨酸的浓度。方法:色谱柱:Diamonsil C_(18)(150.0 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相:乙腈(B)-0.2%甲酸水溶液(A),梯度洗脱;流速:0.8 mL·min^(-1);柱温:35℃;进样量:10μL;电喷雾电离源(ESI),多离子反应监测(MRM),负离子模式扫描。结果:替格瑞洛在10~875 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好(R^(2)=0.9958)定量下限10 ng·mL^(-1);AR-C124910XX在8~700 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好(R^(2)=0.9979),定量下限8 ng·mL^(-1);阿司匹林在10~875 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好(R^(2)=0.9982),定量下限10 ng·mL^(-1);水杨酸在20~1750 ng·mL^(-1)范围内线性关系良好(R^(2)=0.9932),定量下限20 ng·mL^(-1)。替格瑞洛、AR-C124910XX、阿司匹林及水杨酸的日内、日间精密度(RSD)都小于15%,提取回收率均在80%以上。稳定性良好,不受基质效应影响。结论:该方法简单、快速、灵敏度好,可用于双联抗血小板治疗的患者中稳态谷浓度的测定。

替格瑞洛在中国健康男性志愿者中的药动学及药效学研究

目的:研究替格瑞洛在中国健康志愿者中药动学及药效学,为其临床合理使用提供依据。方法:选14名健康男性志愿者,分别单次口服替格瑞洛180 mg,在不同时间点采集血样分别用于药动力学及药效学研究,其中药动学采样时间点为给药前、给药后0.5,1,1.5,2,3,4,5,6,8,12,16,24,36,48 h,药效学采样时间点为给药前他和给药后1,2,4,12,24,48 h,药动学血浆样品采用蛋白沉淀法处理,超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法测定原药、活性代谢产物浓度;药效学采用四通道血小板聚集仪测定ADP诱导的血小板聚集率,以血小板聚集抑制的变化程度作为替格瑞洛的药效学指标。用WinNonlin软件处理所得数据。结果:14例健康受试者口服180 mg替格瑞洛后,替格瑞洛原药、活性代谢产物AR-C124910XX在人体内平均tmax分别为(1.9±0.6)h和(2.1±0.6)h,平均t1/2分别为(8.3±1.1)h和(9.7±2.5)h,平均Cmax分别为(1 447.0±532.2)ng·mL^(-1)和(384.5±90.2)ng·mL^(-1),平均AUC0-last为(9 023.0±3 285.4)ng·mL^(-1)·h和(3 445.0±723.2)ng·mL-1·h,平均AUC0-∞为(9 208.7±3 437.6)ng·mL^(-1)·h和(3 594.4±827.0)ng·mL^(-1)·h。替格瑞洛对血小板抑制的达峰时间为4h,对血小板抑制的最大效应Emax为(75.9±11.9%)。替格瑞洛的抗血小板效应随替格瑞洛及AR-C124910XX降低而减弱。结论:本研究系统考察了14例健康志愿者服用替格瑞洛后的药动学及药效学,为临床使用替格瑞洛剂量调整、优化治疗方案提供了理论依据。