ARIP2在小鼠巨噬细胞系RAW264.7中对IL-1β分泌的抑制作用

研究ARIP2在巨噬细胞中对IL-1β分泌的调节作用,探讨激活素A与巨噬细胞活化的可能关系及其作用机制。为了分析ARIP2在小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞中的表达及其生物学作用,实验采用RT-PCR方法检测RAW264.7细胞中ARIP2 mRNA的表达,ELISA方法观察过表达ARIP2对RAW264.7细胞分泌IL-1β的影响。RAW264.7细胞能够表达特异性ARIP2 mRNA,其RNA表达受激活素A刺激呈剂量依赖性增加。ELISA检测结果显示过表达ARIP2可以抑制RAW264.7细胞分泌IL-1β。上述资料提示ARIP2不仅具有抑制激活素诱导的特异基因转录活性,其自身也具有多种生物学活性,可能在激活素A抑制LPS活化巨噬细胞分泌IL-1方面,发挥关键性信号转导调控作用。

小鼠激活素受体相互作用蛋白2的原核表达及抗血清制备

[目的]克隆小鼠激活素受体相互作用蛋白2(ARIP2)cDNA序列,利用大肠杆菌表达ARIP2,制备兔抗小鼠ARIP2的多克隆抗血清。[方法]采用RT-PCR方法,将小鼠ARIP2基因克隆到pET-32a(+)质粒,构建ARIP2原核表达载体并转化到大肠杆菌,IPTG诱导融合蛋白的表达,经亲和层析纯化获得可溶性重组蛋白,免疫家兔后制备ARIP2抗血清,分别采用ELISA,Western blot检测抗体效价和特异性。[结果]测序结果表明重组质粒pET32a(+)-ARIP2构建成功;SDS-PAGE分析表明获得的重组蛋白为可溶蛋白;经过亲和层析后得到有效分离;Elisa法测定的抗血清效价为1∶50000;Western blot鉴定结果表明抗血清能与目的蛋白特异性结合。[结论]成功将ARIP2进行了原核表达并制备了高效价、高特异性的兔抗小鼠ARIP2抗血清,为进一步研究ARIP2功能提供了有力工具。