hsa-miR-223通过靶向ARTN调控食管癌KYSE-150细胞的迁移和侵袭能力

目的:探讨hsa-miR-223对人食管癌细胞迁移和侵袭能力的影响,研究hsa-miR-223影响食管癌细胞功能改变的作用机制方法:通过Real-time PCR和Western blot检测hsa-miR-223和ARTN在人食管癌细胞系中的表达;建立了稳定过表达成熟miR-223的人食管癌KYSE-150细胞系,通过细胞划痕实验和Boyden chamber检测细胞迁移和侵袭能力的改变;在此基础上,通过报告基因分析和Western blot探讨hsa-miR-223引起食管癌细胞生物学功能改变的作用机制。结果:Real-time PCR结果表明hsa-miR-223在高转移潜能的人食管癌细胞KYSE-150中呈低表达,而ARTN在KYSE-150中呈高表达;在人食管癌细胞KYSE-150中过表达hsa-miR-223后降低细胞的迁移和侵袭能力双荧光素酶报告基因分析表明成熟的miR-223能够作用于ARTN的3'UTR区降低荧光素酶的活性,Western blot进一步证实了hsa-miR-223能够抑制内源性ARTN的表达。结论:hsa-miR-223在高转移能力的食管癌细胞KYSE-150中呈低表达,具有类似抑癌基因的作用调控ARTN的表达,降低了食管癌细胞KYSE-150的迁移和侵袭能力,ARTN是miR-223的靶基因,有可能成为肿瘤生物治疗的一个靶点。

ARTN、VEGF蛋白在胃癌组织中的表达及意义

目的探讨Artemin(ARTN)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在胃癌组织中的表达和意义。方法采用免疫组化方法,检测60例胃癌患者的癌组织及48例胃癌患者的癌旁良性组织中ARTN、VEGF蛋白的表达,并分析二者与胃癌患者临床病理特征和预后的关系。结果 ARTN、VEGF蛋白在癌旁良性组织中的阳性表达率分别为14.6%、12.5%,在胃癌组织中的阳性表达率分别为78.3%、70.0%。胃癌组织中的ARTN、VEGF蛋白阳性表达率均明显高于癌旁良性组织(P均<0.01)。ARTN蛋白表达与胃癌患者的肿瘤浸润程度、TNM分期及淋巴结转移有密切关系(P均<0.05),且ARTN蛋白与VEGF蛋白表达呈正相关(r=0.131,P<0.01)。结论胃癌组织中的ARTN蛋白表达与肿瘤的侵袭转移有密切关系,与VEGF蛋白表达呈正相关,可作为临床评价胃癌进展和患者预后的指标之一。

GDNF和ARTN及其受体与消化系统肿瘤嗜神经侵袭的关系

肿瘤嗜神经侵袭(PNI)被认为是一种新的恶性肿瘤转移方式,也是某些肿瘤病人术后复发率高和预后差的重要原因之一。研究发现,神经胶质源性神经生长因子(GDNF)和ARTN的表达与某些肿瘤的侵袭呈正相关,能够促进肿瘤组织与其周围神经的相互移行,在肿瘤PNI的发展进程中起着非常重要的作用。本文综述了GDNF和ARTN及其受体在消化系统肿瘤PNI中的表达和作用机制,以期为消化系统肿瘤的临床治疗以及预后判断提供新的研究思路。

食管鳞状细胞癌中ARTN、GFRα3的表达及临床意义

探讨ARTN和GFRα3在食管鳞状细胞癌组织中的表达及与临床病理参数之间的关系及意义。应用免疫组化SP两步法检测25例食管正常组织、17例高级别上皮内瘤变组织、114例食管鳞状细胞癌组织中ARTN、GFRα3蛋白的表达。结果表明:ARTN在正常食管黏膜、高级别上皮内瘤变组织和食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率分别为0、23.5%、80.7%,GFRα3阳性表达率分别为0、29.4%、76.3%,差异具有统计学意义(P<0.05),其与食管鳞状细胞癌浸润深度及临床分期有关,浸润深度T3、T4表达高于T1、T2(P<0.05);临床分期Ⅲ、Ⅳ期高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.01),ARTN与GFRα3在食管鳞癌中的表达呈正相关(r=0.198,P<0.05)。由此说明ARTN和GFRα3表达与鳞状细胞癌生物学密切相关,两者协同作用可能促进食管鳞状细胞癌浸润及进展。

ARTN在食管鳞状细胞癌中的表达及临床病理联系

目的:研究ARTN在食管鳞状细胞癌组织中的表达及与食管鳞癌患者临床病理特征及预后的联系。方法:采用免疫组化SP两步法检测ARTN蛋白在114例食管鳞状细胞癌组织、17例高级别上皮内瘤变组织、25例正常食管组织中的表达;Western blot法检测ARTN在12例新鲜食管鳞癌组织及配对的癌旁组织中的表达,分析ARTN表达与患者临床病理及预后的关系。结果:免疫组化:ARTN在食管正常组织、高级别上皮内瘤变组织、食管鳞癌组织中的阳性表达率分别为0%(0/25)、23.5%(6/17)、80.7%(92/114);Western blot:食管鳞癌组织中ARTN的表达高于癌旁正常组织。结论:ARTN表达与癌浸润深度、TNM分期及预后相关(P<0.01),可能成为判断患者浸润深度、临床分期及预后的指标。

ARTN在恶性肿瘤发生发展中的作用研究进展

ARTN(Artemin)又名ENOVIN,是胶质细胞源神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)配体家族成员之一,ARTN及其受体GFRα3(GDNF family receptor alpha-3,GFRα3)在一些恶性肿瘤中表达升高,并参与了某些恶性肿瘤的发生发展,研究ARTN及其受体GFRα3在恶性肿瘤中的作用,或许能发现恶性肿瘤新的靶点,为早期诊断和早期治疗提供帮助。本文就ARTN在恶性肿瘤中的研究进展做一综述。

靶向干扰ARTN对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖能力的影响

目的:通过RNA干扰技术靶向抑制ARTN基因在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达,探讨抑制ARTN基因对Ishikawa细胞增殖能力的影响。方法:体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,以p GPU6/GFP/Neo为载体构建ARTN基因的短发夹RNA(p GPU6/GFP/Neo-ARTN sh RNA)干扰质粒,利用脂质体法转染人子宫内膜癌Ishikawa细胞,荧光显微镜下观察转染效率,应用Western Blot法检测转染后细胞ARTN蛋白的表达情况,CCK法检测Ishikawa细胞的增殖活性。结果:p GPU6/GFP/Neo-ARTN sh RNA干扰质粒成功转染Ishikawa细胞,转染效率为80%;转染后48h,干扰组Ishikawa细胞ARTN蛋白的表达水平明显低于阴性对照组和正常组(P<0.05);转染后48h、72h、96h,干扰组Ishikawa细胞的增殖活性明显低于阴性对照组和正常组(P<0.05)。结论:靶向干扰ARTN基因可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖能力。

靶向干扰ARTN对体外培养Ishikawa细胞增殖及侵袭能力的影响

目的观察靶向抑制ARTN对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖及侵袭能力的影响。方法构建靶向干扰ARTN的短发夹RNA(pG PU6/GFP/Neo-ARTN shRNA),利用脂质体法转染Ishikawa细胞。采用qRT-PCR及Western blot法检测转染后ARTN mRNA及蛋白的表达。应用CCK法观察细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞侵袭能力的变化。结果qRT-PCR和Western blot结果显示,pshRNA-A干扰组与pshRNA-NC空载体对照组、空白对照组相比,其ARTN mRNA及蛋白相对表达量均明显减少(F=47.882,P<0.05;F=726.323,P<0.05)。CCK结果显示pshRNA-A干扰组细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。Transwell小室侵袭实验结果显示抑制ARTN表达后,pshRNA-A干扰组穿膜细胞数明显减少(F=55.609,P<0.05)。结论 ARTN的短发夹RNA可有效抑制ARTN在Ishikawa细胞中的表达,并显著减弱细胞增殖能力,降低细胞侵袭能力。干扰ARTN有望为子宫内膜癌的靶向治疗提供新的研究方向。

siRNA沉默artemin蛋白对食管癌TE11细胞侵袭能力的影响

目的:通过siRNA干扰技术沉默ARTN基因在人食管癌细胞TE11中的表达,研究其对人食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:设计并合成3条特异性针对ARTN基因的siRNA,构建了真核表达载体pSilencer2.1-ARTN-siRNA,转染到TE11细胞中,经Real-time PCR和Western blot检测ARTN在mRNA和蛋白水平的表达;通过MTT比色法、细胞划痕实验和Boyden小室侵袭实验观察转染pSilencer2.1-ARTN-siRNA后细胞增殖、迁移和侵袭能力的改变。结果:转染重组质粒pSilencer2.1-ARTN-siRNA后人食管癌细胞TE11中ARTN的mRNA表达受到抑制,蛋白表达降低;通过体外实验表明,细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力均减弱。结论:siRNA沉默ARTN基因的表达可降低人食管癌细胞TE11的增殖、迁移和侵袭能力,ARTN可能是食管癌的一个生物治疗靶点,有望成为治疗食管癌的新途径。