lncR-HOXA-AS3靶向miR-29a对前列腺癌细胞凋亡和自噬的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncR)HOXA-AS3和微小RNA-29a(miR-29a)对前列腺癌(PCa)细胞凋亡、自噬的影响。方法 体外培养人PCa细胞(DU-145、LNCaP、C4-2B)和人正常前列腺细胞RWPE-1,采用RT-qPCR法检测细胞中lncR-HOXA-AS3和miR-29a表达。应用双荧光素酶报告基因实验验证lncR-HOXA-AS3和miR-29a之间的靶向调控关系。取对数生长期LNCaP细胞,分为si-NC组、si-HOXA-AS3组、si-HOXA-AS3+anti-miR-NC组和si-HOXA-AS3+anti-miR-29a组,利用脂质体转染法分别将si-NC、si-HOXA-AS3、si-HOXA-AS3+anti-miR-NC、si-HOXA-AS3+anti-miR-29a转染至各组LNCaP细胞,应用RT-qPCR法检测各组细胞中lncR-HOXA-AS3和miR-29a表达,应用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,应用Western blotting法检测各组细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3及自噬相关蛋白LC3II、LC3I、Beclin 1表达。结果 与正常前列腺细胞相比,人PCa细胞中lncR-HOXA-AS3表达均明显升高(P均<0.05),而miR-29a表达均降低(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因显示lncR-HOXA-AS3能靶向miR-29a抑制荧光素酶活性(P<0.05)。与si-NC组比较,si-HOXA-AS3组LNCaP细胞lncR-HOXA-AS3表达降低(P<0.05),miR-29a表达升高(P<0.05),细胞凋亡率升高(P均<0.05),Caspase-3、LC3Ⅱ/LC3I及Beclin 1蛋白表达升高(P均<0.05)。与si-HOXA-AS3+anti-miR-NC组比较,si-HOXA-AS3+anti-miR-29a组LNCaP细胞miR-29a表达下降(P<0.05),细胞凋亡率降低(P<0.05),Caspase-3、LC3Ⅱ/LC3I及Beclin1蛋白表达下降(P均<0.05)。结论 抑制lncR-HOXA-AS3表达能靶向调控miR-29a基因促进PCa细胞凋亡和自噬。

lncRNA MAGI2-AS3靶向调控miR-130a-5p对柯萨奇病毒B3诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的影响

目的:探讨lncRNA MAGI2-AS3靶向miR-130a-5p调控柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的大鼠心肌细胞H9C2损伤的分子机制。方法:对照组,用不含药物、病毒的DMEM处理H9C2细胞48 h。CVB3组,用含有100倍半数组织培养感染剂量CVB3的DMEM处理H9C2细胞48 h(感染)。CVB3+sh-NC组,H9C2细胞转染sh-NC慢病毒后感染CVB3。CVB3+sh-MAGI2-AS3组,H9C2细胞转染sh-MAGI2-AS3慢病毒后感染CVB3。CVB3+miR-NC组,H9C2细胞转染miR-NC后感染CVB3。CVB3+miR-130a-5p组,H9C2细胞转染miR-130a-5p mimic后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-NC共转染H9C2细胞后感染CVB3。sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组,sh-MAGI2-AS3、抗miR-130a-5p共转染H9C2细胞后感染CVB3。qRT-PCR检测MAGI2-AS3、miR-130a-5p相对表达量;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;ELISA法检测TNF-α、IL-6分泌水平;双荧光素酶报告实验验证MAGI2-AS3与miR-130a-5p靶向关系;Western blot检测Bcl-2、Cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量。结果:与对照组比较,CVB3组MAGI2-AS3相对表达量、细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,而miR-130a-5p相对表达量、Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。分别与CVB3+sh-NC组、CVB3+miR-NC组相比,CVB3+sh-MAGI2-AS3组、CVB3+miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.05)。MAGI2-AS3可靶向调控miR-130a-5p表达。与sh-MAGI2-AS3+抗miR-NC组比较,sh-MAGI2-AS3+抗miR-130a-5p组细胞凋亡率、Cleaved-Caspase-3蛋白表达水平及TNF-α、IL-6分泌水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:沉默MAGI2-AS3可通过上调miR-130a-5p而抑制细胞凋亡、炎症反应,进而减轻CVB3诱导的H9C2细胞损伤。

抑制lncR-HOXA-AS3表达的人前列腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT相关蛋白表达变化

目的观察抑制长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncR)HOXA-AS3表达的人前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞系LNCaP增殖、迁移、侵袭能力及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达变化。方法本研究受试细胞为人PCa细胞系LNCaP。将对数生长期LNCaP细胞分为2组,分别转染lncRHOXA-AS3沉默质粒si-HOXA-AS3(观察组)和阴性对照质粒si-NC(对照组),转染48 h时采用qRT-PCR法检测lncR-HOXA-AS3,分别于转染24、48、72 h时采用CCK8实验测算细胞增殖活性(光密度OD值),转染48 h时采用细胞划痕实验观察细胞迁移能力,转染48 h时采用Transwell实验观察细胞侵袭能力,转染48 h时采用WESTERN Blotting法检测两组EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)。结果与RWPE-1相比,DU-145、LNCaP、C4-2B中lncR-HOXA-AS3相对表达量均升高(P均<0.05)。与对照组相比,转染48 h时观察组细胞lncR-HOXA-AS3相对表达量降低(P<0.05)。与对照组比较,转染24、48、72 h时观察组细胞OD值降低(P均<0.05)。与对照组比较,转染48 h时观察组划痕愈合率小、侵袭穿膜细胞数目少(P均<0.05)。与对照组比较,转染48 h时观察组LNCaP细胞E-cadherin蛋白相对表达量升高,Vimentin、Fibronectin蛋白相对表达量表达降低(P均<0.05)。结论沉默lncR-HOXA-AS3表达能抑制LNCaP细胞的增殖、迁移及侵袭,其机制可能为lncRHOXA-AS3促进LNCaP细胞E-cadherin蛋白表达、抑制Vimentin及Fibronectin蛋白表达。

lncRNA HOXB-AS3靶向miR-379-5p调节类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)同源盒蛋白B8基因反义RNA3(HOXB-AS3)对类风湿性关节炎(RA)滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响和分子机制。方法实时定量PCR(RT-qPCR)检测HOXB-AS3和miR-379-5p在健康对照者、RA患者滑膜组织中的表达。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证HOXB-AS3对miR-379-5p的靶向调控作用。将si-NC、si-HOXB-AS3、miR-NC、miR-379-5p mimics、si-HOXB-AS3+anti-miR-NC、si-HOXB-AS3+anti-miR-379-5p分别转染MH7A细胞。细胞技术试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活力;Transwell实验检测细胞迁移和迁移能力;蛋白质印记(Western blot)检测细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达。结果RA患者滑膜组织中HOXB-AS3呈高表达,miR-379-5p呈低表达。与si-NC组比较,si-HOXB-AS3组MH7A细胞活力、迁移侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达降低,p21蛋白表达增加(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-379-5p组MH7A细胞活力、迁移侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达降低,p21蛋白表达增加(P<0.05)。与si-HOXB-AS3+anti-miR-NC组比较,si-HOXB-AS3+anti-miR-379-5p组MH7A细胞活力、迁移侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白表达升高,p21蛋白表达降低(P<0.05)。结论RA患者滑膜组织中HOXB-AS3呈高表达。抑制HOXB-AS3通过靶向miR-379-5p可抑制RA滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭。

纯种米曲霉AS3.042制曲黄豆酱的后发酵条件优化

以黄豆为原料,通过纯种米曲霉AS3.042制曲,以氨基酸态氮含量为考察指标,采用响应面分析法优化黄豆酱的后发酵工艺条件。结果表明:黄豆酱后发酵期为40d的最适保持温度为40.28℃,添加盐水的最佳浓度为9.66%(质量百分数),该浓度盐水的最适添加量为74.70%(体积百分数)。采用该工艺条件发酵的黄豆酱,其氨基酸态氮含量为0.837 6g/kg,与理论值(0.841g/kg)接近。该工艺可运用于实际生产。

HOXA-AS3通过调控HOXA6/7基因对人肺腺癌细胞增殖凋亡作用机制

目的研究HOXA-AS3通过调控HOXA6/7基因对人肺腺癌细胞增殖凋亡的作用机制。方法人肺腺癌细胞株经培养后随机分为LA组(单纯人肺腺癌细胞株)和EX组(HOXA-AS3转染的人肺腺癌细胞株)。使用TUNEL法、CCK-8法、划痕实验、Western blot法及RT-PCR法分析两组细胞凋亡、增殖、迁移能力、HOXA6/7蛋白表达及HOXA6/7 mRNA表达的差异。结果TUNEL法结果表明LA组细胞凋亡较EX组多且分布明显稀疏(P<0.05);CCK-8检测结果表明EX组细胞的增殖数量明显高于LA组(P<0.05);划痕实验显示,与EX组相比,LA组无细胞区域宽度较大,表明其细胞迁移能力较低;Western blot法对两组细胞内HOXA6/7蛋白的免疫印迹分析显示,EX组的HOXA6/7蛋白表达明显上升(P<0.05);RT-PCR结果显示,EX组的HOXA6/7 mRNA表达明显升高(P<0.05)。结论HOXA-AS3激活HOXA6/7基因的表达,加快人肺腺癌细胞的增殖、迁移,促进疾病发展。深入研究HOXB6/7基因对肺腺癌的作用机制可为控制肺腺癌的发展与转移提供临床帮助。

LncRNA HOXB-AS3在骨髓增生异常综合征中的表达及临床意义

目的检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者血清长链非编码RNA HOXB-AS3(LncRNA HOXB-AS3)水平,并探讨其与MDS的关系。方法选取2017年3月~2019年12月于本院门诊就诊或住院治疗的74例MDS患者作为MDS组,再将74例MDS患者按照国际预后积分系统(IPSS)重新分为低危组、中危Ⅰ组、中危Ⅱ组和高危组,同时按照WHO分级重新分为难治性贫血型(RA)组、难治性血细胞减少伴多系发育异常型(RCMD)组、难治性贫血伴原始细胞增多-Ⅰ型(RAEB-Ⅰ)组和难治性贫血伴原始细胞增多-Ⅱ型(RAEB-Ⅱ)组;同时选取同期68例健康体检人群作为对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清中LncRNA HOXB-AS3水平;分析血清HOXB-AS3 mRNA表达与IPSS评分的关系;分析血清HOXB-AS3 mRNA表达与WHO分级的关系;分析血清中HOXB-AS3 mRNA水平对MDS的诊断价值。结果MDS组血清中HOXB-AS3 mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.05);高危组血清中HOXB-AS3 mRNA表达水平显著高于低危组、中危Ⅰ组和中危Ⅱ组(P<0.05);RAEB-Ⅱ组血清中HOXB-AS3 mRNA表达水平显著高于RA组和RCMD组(P<0.05);HOXB-AS3 mRNA表达水平与IPSS评分、WHO分级均呈正相关(r=0.550、0.597,P均<0.05)。结论血清LncRNA HOXB-AS3表达可能对MDS的发生具有预测作用,对评估病情发展状况有重要意义,可为MDS的早期干预提供一定参考依据。

甘薯曲霉AS3.324在食醋酿造中的应用研究

采用甘薯曲霉AS3.324固态制麸曲、固态酒精发酵和固态醋酸发酵生产工艺,对在甘薯曲霉AS3.324食醋酿造中的应用进行了研究.结果表明:小试(曲盘曲)糖化酶活力达到897.1 u/g,生产用麸曲(发酵架曲)平均糖化力达到1 035.55 u/g,多批次食醋发酵结果其主料出醋率平均达到7.9 kg/kg(HAC 3.5%).

长链非编码RNA MAGI2-AS3在喉鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的探究长链非编码MAGI2反义链RNA3(MAGI2-AS3)在喉鳞状细胞癌中的表达情况及临床意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术检测喉鳞状细胞癌组织及相应癌旁正常黏膜组织中MAGI2-AS3表达情况,分析MAGI2-AS3表达与患者临床特征的关系;同时在喉鳞癌细胞Hep-2中过表达MAGI2-AS3,体外检测细胞的迁移及侵袭能力的变化。结果与癌旁正常黏膜组织相比,喉鳞状细胞癌组织中MAGI2-AS3的相对表达量明显降低,差异有统计学意义(P﹤0.01);声门上型、声门型、声门下型喉鳞状细胞癌患者的MAGI2-AS3表达水平比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);低分化喉鳞状细胞癌患者与高、中分化喉鳞状细胞癌患者的MAGI2-AS3表达水平比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);T_1+T_2期、无淋巴结转移的喉鳞状细胞癌患者的MAGI2-AS3相对表达量均高于T_3+T_4期、有淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Hep-2细胞过表达MAGI2-AS3后的迁移、侵袭能力是空载Hep-2细胞的(0.403±0.181)倍和(0.502±0.090)倍,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。TCGA公共数据库分析发现MAGI2-AS3在头颈部鳞癌组织中的相对转录水平低于癌旁正常黏膜组织,差异有统计学意义(P﹤0.05);MAGI2-AS3高表达患者的中位生存时间略长于MAGI2-AS3低表达患者,但差异无统计学意义(P﹥0.05)。结论 MAGI2-AS3表达与喉鳞状细胞癌的发生发展相关;体外过表达MAGI2-AS3不仅可明显抑制Hep-2迁移及侵袭能力,还可明显改变上皮细胞-间充质转化(EMT)相关标志物的表达水平,在喉鳞状细胞癌侵袭转移过程中可能发挥重要的生物学作用,有望成为新的分子治疗靶点。

Flash AS3实现拼图游戏

采用Flash AS3技术轻松实现拼图游戏。阐述了游戏地图、游戏规则的实现和制作图块影片剪辑元件等关键技术问题。

基于Flash AS3的动态无缝连接位图的设计与实现

无缝连接图是经过无缝化处理的位图图块,是一种非常特殊的位图.利用Flash AS3的位图处理代码,分析用代码生成无缝连接图的方法,设计了一个动态无缝连接图的实例,并且提供了将外部"照片"位图嵌入到无缝连接图中的方法,为无缝连接图的主题图案设计提供了方便、灵活的设计思路与方法.

Flash AS3版扫雷游戏

采用Flash AS3实现扫雷游戏,阐述了游戏中格子Grid类设计、无雷格子拓展、计算有雷格子的自动标示处理等关键问题。

基于AS3.0和XML的在线考试系统设计与实现

随着信息技术的发展，无纸化、标准化的在线考试有了很大需求，针对这种需求，设计了一个在线考试系统，在线考试系统使用AS3.0面向对象编程语言和XML数据存储技术，并使用Flash工具制作在线考试系统界面，同时给出了在线考试系统的实现方法。

lncRNA HOXB-AS3通过激活PI3 K-AKT通路加剧急性髓样白血病患者细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探究lncRNA HOXB-AS3对急性髓样白血病(acutemyeloidleukemia,AML)的增殖、调亡和侵袭的影响和机制。方法RT-qPCR检测AML患者骨髓单核细胞(BMMCs)和细胞系中lncRNA HOXBAS3相对表达量。慢病毒转染建立稳定表达shRNA-HOXB-AS3-01,shRNA-HOXB-AS3-02和shRNA-HOXBAS3-03的THP1和HL60细胞系。CCK-8实验、EdU实验、流式细胞术实验和Transwell实验分别检测THP1和HL60细胞活力、增殖、凋亡和侵袭能力,Western印迹检测蛋白相对表达量。建立裸鼠AML移植瘤模型,体内验证HOXB-AS3低表达对肿瘤生长的影响。结果lncRNA HOXB-AS3在AML患者BMMCs和细胞系中的表达量显著增加。在细胞实验中,HOXB-AS3低表达显著抑制THP1和HL60细胞活力、增殖和侵袭,增加细胞凋亡率,上调cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和E-cadherin蛋白的表达,下调N-cadherin、VECF、PI3Kp85α和p-AKT蛋白的表达。在体内实验中,HOXB-AS3低表达显著抑制肿瘤生长,下调PI3Kp85α和p-AKT蛋白表达。结论lncRNA HOXB-AS3通过激活PI3K-AKT通路加剧AML细胞的增殖、调亡和侵袭。

AS3在线污染监督,预警预报和溯源系统的开发及其对昆山市高新区颗粒物污染的应用测试

介绍了AS3在线污染监测,预警预报和溯源系统,及其在昆山市高新区的实测应用。自2013年开始,中国江苏天瑞仪器股份有限公司和法国ARIA科技有限公司结合各自在大气重金属监测仪器和大气环境模拟软件上的优势,共同研发了AS3系统,用于针对工业园区的大气颗粒物,尤其是重金属颗粒物的在线污染监测,预警预报和溯源。该系统包含仪器设备,信息处理,以及视图和结果分析3大模块。2015年6月在昆山市高新区的测试结果表明AS3系统能够实时有效地监测PM_(10),PM_(2.5),以及30种重金属元素。利用重金属元素示踪的方法对2015年6月11~13日,21日和24日天瑞仪器空气站监测到的浓度峰值进行源解析,分析得到这3个时间段分别可能受到沙尘、船只、以及工业生产或燃油的重要影响。利用系统中的扩散模型对混凝土生产排放和交通源排放进行模拟,结果显示,混凝土生产排放比交通源排放造成的颗粒物污染要多3个量级,影响范围可以达到3km以上。然而,由于局地气象条件变化的影响,混凝土生产排放的烟流扩散是不稳定的,随气象条件变化而不断变化。固定监测点没能捕捉最大污染烟流,因此,分散在几百米之外的监测点并不能够实时反映工业园区真实的大气污染情况。而大气环境模型的使用增加了空间污染监测的范围,提高了监测点位的实用性。上述结果表明,AS3系统这样的结合监测设备和污染模拟的系统的开发,对园区实时污染监管十分有利且必要。

用AS3和Java开发竞赛型多机游戏

采用C/S或B/S架构,由服务器产生游戏随机数据并发送到多个客户端,就可让玩家在完全公平的条件下竞赛。可用Flash AS3和Java分别开发多机游戏的客户端和服务器端。游戏可采用富客户端瘦服务器端的结构,需要解决服务器与客户端之间的Socket通信问题和安全问题。

基于Flash AS3的化工仿真实验开发

仿真实验是利用计算机创建一个模拟真实的实验环境,学生在进实验室前,先在计算机上进行仿真实验,熟悉实验操作步骤,理解实验原理,再进行真实实验,能提高效率,降低风险。Flash具有丰富的表现力和强大的交互功能,利用其开发简单易行,周期短。本文主要介绍在开发过程中的一些具体实现方法。

Flash AS3飞碟跳棋游戏

采用Flash AS3技术开发飞碟跳棋游戏,阐述游戏中地图设计、游戏步骤提示和游戏逻辑实现等关键问题。

Flash AS3实现黑白棋游戏

采用Flash AS3技术实现黑白棋游戏。阐述游戏中翻转对方的棋子、输赢判断等实现和制作棋子影片剪辑元件等关键问题。

lncRNA MAGI2-AS3调控Fas/FasL通路抑制神经母细胞瘤的生长

目的:探讨lncRNA MAGI2-AS3在神经母细胞瘤中的表达及对Fas/FasL通路的调控作用。方法:本研究选用2016年1月至2018年6月在本院接受治疗的23例神经母细胞瘤患者为研究对象,手术采集患者瘤组织和瘤旁正常组织进行qRT-PCR实验检测lncRNA MAGI2-AS3、Fas、FasL的mRNA的表达水平,并分析lncRNA MAGI2-AS3的表达与患者临床病理参数的关系;培养SH-SY5Y、SK-N-SH神经母细胞瘤细胞系,将其分为对照组(control)、LV-NC组、LV-MAGI2-AS3组,过表达lncRNA MAGI2-AS3,荧光显微镜检测慢病毒转染效率,qRT-PCR检测过表达后lncRNA MAGI2-AS3、Fas、FasL的mRNA的表达水平,CCK-8方法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:神经母细胞瘤患者组织中lncRNA MAGI2-AS3、Fas、FasL mRNA表达水平均显著低于正常组织(P<0.05);与神经母细胞瘤患者临床病理参数比较结果显示lncRNA MAGI2-AS3与临床分期、组织分化程度有关(P<0.05);荧光显微镜观察SK-N-SH、SH-SY5Y细胞的转染效率,结果发现LV-MAGI2-AS3组显著高于LV-NC组(P<0.05),qRT-PCR检测lncRNA MAGI2-AS3 mRNA表达水平显著高于LV-NC组和control组(P<0.05);过表达LncRNA MAGI2-AS3后,两个细胞系中Fas、FasL mRNA表达水平显著高于LV-NC组和control(P<0.05);CCK-8检测结果显示,感染LV-MAGI2-AS3后,两个细胞系增殖率均显著低于LV-NC组和control组(P<0.05),LV-NC组和control组无显著变化;细胞凋亡检测结果显示,过表达LV-MAGI2-AS3z细胞凋亡率显著高于LV-NC组和control组(P<0.05),LV-NC组和control组凋亡率比较无显著差异。结论:lncRNA MAGI2-AS3在神经母细胞瘤组织和细胞中表达减少,且调控细胞凋亡通路中Fas、FasL的表达,其可能是通过调控Fas/FasL通路抑制神经母细胞瘤的生长。