加味二陈汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能及ASMCs作用的相关机制

目的探讨加味二陈汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能及平滑肌细胞(ASMCs)作用的相关机制。方法选择50只SPF级雄性大鼠,其中40只建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型,其余10只不做处理,分正常对照组、模型对照组、加味二陈汤5、10、20 g/kg组,苏木素-伊红(HE)染色观察慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织病理变化,记录气道平滑肌厚度及肺功能,RT-聚合酶链反应(PCR)、Western印迹检测ASMCs中Janus激酶(JAK)3、转录激活子(STAT)3 mRNA及蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型对照组肺功能显著降低,用力呼气量/用力肺活量(FEV0.3/FVC)、动态肺顺应性(Cdyn)值显著降低,呼吸指数(RI)明显升高(P<0.001);与模型对照组比较,加味二陈汤5、10、20 g/kg组肺功能均明显优于模型对照组,且加味二陈汤20 g/kg组肺功能改善最显著(均P<0.05)。与正常对照组比较,模型对照组气道平滑肌厚度显著提高(P<0.001);与模型对照组比较,加味二陈汤5、10、20 g/kg组气道平滑肌厚度明显降低,且加味二陈汤20 g/kg组气道平滑肌厚度降低最显著(P<0.05),提示慢性阻塞性肺疾病大鼠气道壁显著增厚。正常对照组肺泡结构完整,无毛细血管出血、水肿、炎性细胞出现;模型对照组肺泡结构不完整,大小不均,肺组织间有轻微毛细血管充血,肺间质轻微水肿,肺泡腔也存在炎性细胞;加味二陈汤组肺泡结构、毛细血管充血程度、肺间质水肿程度及炎性细胞浸润均有所改善。与正常对照组比较,模型对照组ASMCs中JAK3、STAT3 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.001);与模型对照组比较,加味二陈汤5、10、20 g/kg组ASMCs中JAK3、STAT3 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论加味二陈汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠有明显治疗作用,能显著提高大鼠肺功能,其作用机制与抑制ASMCs中JAK/STAT信号活性有关。

BDNF经TrkB-PKC-Ca^(2+)信号通路调控气道ASMC炎症反应

目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)经TrkB-PKC-Ca^(2+)信号影响气道细胞收缩及炎症反应的分子机制。方法:建立TNF-α诱导的气道平滑肌细胞(ASMC)炎症模型,采用BDNF-siRNA和BDNF重组蛋白对模型进行干预,测定各组ASMC炎症因子IL-17、Eotaxin水平及BDNF、TrkB浓度、PKC活性变化及Ca^(2+)、三磷酸肌醇(IP3)浓度变化。结果:与正常组相比,模型组细胞异常增殖,细胞内炎症因子IL-17、Eotaxin增加,BDNF、TrkB蛋白和转录水平明显升高,同时引起其下游PKCIP3-Ca^(2+)信号上调。结论:BDNF可能通过激活下游PKC信号通路诱发气道重塑,参与气道高反应形成。

淫羊藿与女贞子配伍对自噬激活状态ASMCs的影响

目的研究淫羊藿、女贞子配伍对自噬激活剂雷帕霉素(rapamycin,RAP)诱导的气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)自噬、凋亡及增殖活性的调节作用。方法培养大鼠原代ASMCs,随机分为正常组、RAP组、淫羊藿组、女贞子组、配伍组。根据分组分别加入正常大鼠血清或含药大鼠血清;除正常组外,其余各组同时加入RAP诱导的ASMCs,48h后进行检测。电镜观察细胞超微结构;MTT法检测细胞活力;免疫细胞化学法检测增殖蛋白ki-67蛋白表达,评价细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡活性;Western blot法和细胞免疫荧光法检测LC3、Beclin-1、mTOR、p-mTOR、Bax、Bcl-2、caspase-3及p53蛋白表达。结果淫羊藿、女贞子配伍能显著抑制RAP诱导的ASMCs自噬,下调LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(P<0.05)及Beclin-1蛋白表达(P<0.01);改善RAP诱导的细胞活力、增殖活性降低(P<0.01);抑制凋亡水平升高(P<0.01),且优于淫羊藿、女贞子单用组(P<0.05或P<0.01)。此外,配伍组能上调caspase-3蛋白表达(P<0.05),下调p53蛋白表达(P<0.01);但对mTOR及p-mTOR、Bax及Bcl-2蛋白表达无显著影响。结论淫羊藿、女贞子配伍能抑制RAP诱导的ASMCs的过度自噬/凋亡水平,恢复ASMCs的细胞活力及增殖活性,避免ASMCs过度损伤。

反义凝血酶受体基因的表达对人ASMC增殖的影响

介入治疗后再狭窄的发生严重降低了该治疗手段的最终疗效．为探讨再狭窄的发生机理、寻找有效的预防手段，利用反义ＲＮＡ技术构建了含有部分反义凝血酶受体（ＡＴＲ）ｃＤＮＡ片段的真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３／ＡＴＲ，并观察了其对培养的人主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）增殖的影响．结果表明ｐｃＤＮＡ３／ＡＴＲ的瞬时转染即能显著抑制人ＡＳＭＣ的３Ｈ－ＴｄＲ参入量，且该作用与导入的ＤＮＡ量呈剂量依赖性．

哮喘豚鼠气道平滑肌细胞内钙释放通道的变化

目的检测哮喘豚鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)内钙释放通道功能的改变,探讨与支气管哮喘的关系,同时,寻找传代培养ASMCs的方法。方法以Flou-3/AM为细胞内钙离子示踪剂,观察ASMCs在工具药作用下细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的改变。结果①在ASMCs外无钙情况下,不同浓度ryanodine(5×10-5,10-4,2×10-4mol·L-1)作用于原代培养正常与哮喘ASMCs,[Ca2+]i迅速升高,哮喘组明显高于正常组(P<0·01)。10-4mol·L-1的组织胺(hista-mine)作用于原代培养的正常组与哮喘组ASMCs,[Ca2+]i升高无差异(P>0·05)。②传代培养哮喘ASMCs在10-4、2×10-4mol·L-1ryanodine作用下,[Ca2+]i迅速升高,与原代细胞比较无差异(P>0·05)。在浓度为5×10-5mol·L-1时,原代明显高于传代(P<0.01)。哮喘组传代ASMCs对10-4mol·L-1的histamine反应不明显。结论哮喘豚鼠ASMCs内钙释放通道(RyRs)功能升高,特定条件下,哮喘传代细胞仍然保持原代细胞内钙释放通道的特性。

TLR4在气道上皮细胞诱导的哮喘气道平滑肌细胞迁移中的作用

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)的激活在气道上皮细胞诱导的哮喘气道平滑肌细胞(ASMCs)迁移中的作用。方法:细胞消化法培养原代哮喘ASMCs,TNF-α刺激上皮细胞系RTE细胞收集细胞培养上清液,检测上清液中IL-8和RANTES的含量,改良Boyden趋化小室检测哮喘ASMCs的跨膜迁移,以TLR4抗体作为工具药,观察其在上皮细胞诱导的哮喘ASMCs跨膜迁移中的作用。结果:各TNF-α组培养上清液中IL-8和RANTES水平均显著增高,20 ng/ml组较其他组显著增高(P<0.01)。各组哮喘ASMCs跨膜迁移较正常组均增加(P<0.01);哮喘组和TNF-α+TLR4抗体组哮喘ASMCs跨膜迁移数较TNF-α组显著减少(P<0.01)。TLR4抗体组哮喘ASMCs跨膜迁移数较哮喘组增加(P<0.05)。结论:气道上皮细胞可能通过分泌细胞因子激活哮喘ASMCs表面的TLR4,诱导增强ASMCs的跨膜迁移,在哮喘的气道重构中发挥一定的作用。

布地奈德吸入对哮喘气道重塑大鼠气道平滑肌细胞MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的探讨布地奈德气雾剂对哮喘气道重塑大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cell,ASMC)中MMP-9(金属基质蛋白-9)及TIMP-1mRNA(组织抑制因子-1)表达的影响。方法将60只wistar大鼠按照随机分组原则分为正常组、模型组及治疗组。模型组采用Wistar大鼠哮喘模型制作方法制作哮喘气道重塑大鼠模型;HE染色图像分析测量各组大鼠肺组织中气道壁面积(Wat)及平滑肌层面积(Was),并用气道基膜周长(Pbm)进行标准化;原代培养各组大鼠ASMC;实时定量PCR检测比较各组大鼠ASMC中MMP-9及TIMP-1mRNA表达含量,用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果模型组大鼠肺组织中Wat/Pbm及Was/Pbm明显较正常对照组增加,治疗组大鼠肺组织中Wat/Pbm及Was/Pbm较正常对照组增加,但较模型组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠ASMC中MMP-9mRNA表达较正常对照组增加,差异有统计学意义(P<0.05);但治疗组大鼠ASMC中MMP-9mRNA表达较模型组减少,差异有统计学意义(P<0.05);但较正常对照组大鼠ASMC中含量增加(P<0.05)。模型组大鼠ASMC中TIMP-1mRNA表达较正常对照组降低;但治疗组大鼠ASMC中TIMP-1mRNA表达较哮喘组增加,但较正常对照组降低(P<0.05)。结论布地奈德通过降低哮喘大鼠ASMC中MMP-9mRNA,增加TIMP-1mRNA表达,从而减轻哮喘大鼠ASMC细胞间质增厚。

组胺对家兔气道平滑肌细胞增生的影响

支气管哮喘是以气道高反应性（ａｉｒｗａｙｈｙｐｅｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓ，ＡＨＲ）和可逆性气道狭窄为表现的气道慢性炎症性疾病，气道平滑肌增厚是产生气道阻塞的重要原因，与气道高反应性的发生密切相关。许多炎症介质如５－羟色胺（５－ｈｙｄｒｏｘｙｔｒｙ...

神经肽-1受体拮抗剂对哮喘大鼠气道平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨神经肽-1受体(NK-1R)拮抗剂WIN62577对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)内钙离子浓度的影响及其调节机制,为哮喘气道反应性的治疗寻找新的途径。方法采用OVA吸入法制作哮喘模型。原代培养大鼠ASMC。细胞内钙离子荧光成像系统检测ASMC内钙离子浓度。Real-time PCR检测各组ASMC中SERCA2mRNA(肌浆网钙ATP酶)及IP3RmRNA(三磷酸肌醇受体)表达,组间采用单因素方差分析比较各组间差异,P<0.05为差异有显著性。结果哮喘组ASMC中钙离子浓度较正常组增高;正常组ASMC内钙离子浓度在P物质干预后迅速升高;哮喘组ASMC内钙离子浓度在WIN62577干预后迅速下降。正常组及NK-1R拮抗剂干预哮喘ASMC组中SERCA2mRNA表达与哮喘组比较,差异均有显著性(P<0.05);哮喘组ASMC中IP3RmRNA表达与正常组ASMC比较差异无显著性(P>0.05);NK-1R拮抗剂干预哮喘ASMC组IP3RmRNA表达较哮喘组比较差异有显著性(P<0.05)。结论哮喘大鼠ASMC中SERCA2表达减少,WIN62577通过提高SERCA2及降低IP3R表达从而降低细胞内钙离子浓度改善哮喘气道高反应性。

香烟烟雾提取物对兔气道平滑肌细胞毒性损伤及对一氧化氮生成的影响

目的探讨吸烟对气道平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）的影响。方法分别以０、５％、１０％和３０％的香烟烟雾提取物（ＣＳＥ）孵育兔ＡＳＭＣ，测定其细胞存活率、丙二醛（ＭＤＡ）含量、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）漏出及一氧化氮（ＮＯ）稳定代谢终产物亚硝酸盐（ＮＯ－２）水平。用ｏｎｅｗａｙＡＮＯＶＡ检验及直线回归作统计学分析。结果在４８ｈＣＳＥ显著增加了ＡＳＭＣ的ＮＯ－２释放（１０％、３０％ＣＳＥ分别较对照组增加７５．７％和１１５．３％，Ｐ＜０．０１）；降低了细胞存活率，增加了细胞ＭＤＡ含量和ＬＤＨ漏出（Ｐ均＜０．０１），毒性损伤指标与ＮＯ－２的释放高度相关（ｒ分别为－０．７２１、０．７０６和０．７７３，Ｐ均＜０．０１）。结论吸烟可能对ＡＳＭＣ具有直接损伤作用，ＣＳＥ可能通过ＮＯ介导气道炎症损伤过程。

一氧化氮诱导体外人气管平滑肌细胞凋亡

目的 观察一氧化氮 (NO)是否在体外诱导人气管平滑肌细胞 (airwaysmoothmusclecells,ASMCs)凋亡。方法 人ASMCs用SNAP或SNP或 8 溴 环磷酸鸟苷 (8 Br cGMP)处理。通过四甲基偶氮唑盐 (dimethythiazol zyl7 2 ,5diphenylte trazdium ,MTT)法在 6 ,12 ,18,2 4 ,36h检测SNAP或SNP或 8 Br cGMP对细胞生长的作用。电镜、琼脂糖电泳、原位末端标记和免疫组化链霉菌抗生素蛋白 过氧化酶 (streptavidin peroxidase,SP)法技术用于检测凋亡。 结果 ①SNAP组和SNP组ASMCs存活的数量降低 ,而对照组和cGMP组无变化 (P <0 .0 1)。②SNAP组和SNP组电镜显示核皱缩 ,染色体浓聚和凋亡小体形成。③用SNAP或SNP处理 ,ASMCs的凋亡指数显著升高 (P <0 .0 1) ,但对照组或 8 Br cGMP组没有不同。④在SNAP或SNP组 ,琼脂糖电泳代表了核苷酸DNA长度整倍数的特征性的DNA梯状条带 (大约 180～ 2 0 0bp)。⑤SNAP或SNP组P5 3或Bax基因表达显著高于对照组或 8 Br cGMP组 ,但Bcl 2基因表达是低于对照组或 8 Br cGMP组。结论 ①NO在体外以时间和剂量依赖的方式诱导人ASMCs凋亡。②NO这些作用通过的通路不涉及到鸟苷酸环化酶和cGMP依赖的蛋白激酶。③对人ASMCs的这种负性调节机制也许与治疗哮喘的气道重建有关。

ERK信号通路在组胺诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖中的调控作用

目的探讨细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在组胺(Hist)诱导的大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的调控作用。方法以体外分离、培养的ASMCs为研究对象,加入不同浓度Hist和PD98059对其进行处理,采用MTT法检测Hist及ERK信号通路对ASMCs增殖的影响,Western blot检测ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达,采用ELISA法测定ASMCs核内核因子-κB(NF-κB)水平,并对各组进行比较。结果低浓度和高浓度的Hist均能不同程度刺激ASMCs增殖,100μmol/L时细胞存活率达201.3%;Hist组ASMCs增殖反应与对照组相比显著增加,而Hist+PD980059组ASMCs的增殖反应显著低于Hist组;Hist组ASMCs中的p-ERK1/2蛋白表达较正常对照组明显增强,在加入PD980059后Hist诱导的活化ERK1/2相对于Hist组表达显著下降;Hist处理组NF-κB吸光度值显著高于对照组,Hist+PD98059组NF-κB吸光度值较Hist处理组显著降低。结论 Hist可显著诱导ASMCs增殖,ERK信号通道在此调控中起重要作用,而且还可能参与ASMCs中Hist诱导的NF-κB活化。

乙酰胆碱对平滑肌细胞离子通道的作用及其信号转导机制

乙酰胆碱作用于气管平滑肌细胞上的毒蕈碱受体引起离子通道的改变,通过第二信使的调节引起生理作用。本文总结了近几年来有关Ach对AMSC的K+、Ca2+、Cl-通道的作用,以及第二信使的调节过程。

基于输入成形的太阳能帆板自适应滑模控制

为提高太阳能帆板驱动系统(SADS)的角位置控制性能和抑制太阳能帆板的柔性振动,提出了一种自适应滑模控制(ASMC)与输入成形技术相结合的控制策略。该控制策略通过自适应滑模控制保证了系统在不确定性影响下的一致有界性和渐进一致有界性,从而提高了太阳能帆板驱动系统的角位置控制性能。同时,通过基于参考模型的输入成形器(IS)规划了指令轨迹,进而抑制了太阳能帆板的柔性振动。仿真结果表明了控制策略的有效性。

哮喘气道平滑肌细胞表型转化调控的研究进展

气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells，ASMCs）表型转化是ASMCs的一个重要特征，决定着ASMCs的作用特点和影响方向。现已发现，哮喘发病过程中ASMCs异常表型转化是导致哮喘气道炎症加重、气道高反应性、气道重塑发生的关键环节，其调控机制已成为哮喘研究的热点。现综述如下。

海洋监测下半潜式无人艇的自适应滑模艏向控制

海洋是高质量发展的战略要地,海洋监测则是认识海洋、发展海洋的重要支撑技术.随着"一带一路"等海洋强国战略的不断实施,对海洋测量装备提出了更高的要求.为此,利用全球定位系统/北斗卫星导航系统(GPS/BDS)组合系统和电子罗盘提供高精度位置和艏向信息,并搭载监测器件,将新型半潜式无人艇应用于海洋环境监测.针对路线巡航中半潜式无人艇模型参数不确定和环境干扰对艏向监测的可靠性和稳定性的影响,结合滑模控制(SMC)的强鲁棒性与自适应控制的高适应性设计了一种自适应滑模控制(ASMC)方法.理论分析和仿真实验证明,ASMC的可行性和有效性,比传统的比例微分(PD)控制具有更好的适应性和鲁棒性,而且系统瞬态性能和稳定性良好.将设计的ASMC方法应用于实际监测中,试验结果表明:控制效果稳定,测量数据真实可靠,提高了测量效率.

基于自适应滑模控制的大型望远镜低速控制

为了提高永磁同步电机驱动的大型望远镜转台的低速跟踪性能,设计了自适应滑模控制器以实时抑制系统的参数不确定性和外部扰动对系统的影响。为了优化控制器参数和缩短控制系统的调试周期,辨识出了转台控制系统的控制模型,同时建立了系统内部的非线性因素模型,综合上述模型对系统进行了集成仿真。仿真和实验结果证明了所设计的自适应滑模控制器对系统参数不确定性、外部扰动和噪声具有较好的鲁棒性,对望远镜转台的低速控制效果良好。

ERK信号通道调控大鼠气道平滑肌细胞的增殖与凋亡(英文)

为了了解ERK信号通道对正常大鼠气道平滑肌细胞（aimay smooth nilscle cells，ASMCs）增殖与凋亡的调控．通过对正常大鼠ASMCs原代培养，4～7代用于实验，以ERK激动剂表皮生长因子（EGF）和抑制剂PD98059干预ASMCs生长，采用RT-PCR和免疫荧光染色观察ASMCs上ERK mRNA和蛋白的表达，MTT法、^3H-TdR掺入法检测ASMC增殖，Hoechst染色和Annexin-Ⅴ FITC PI双染色法检测细胞凋亡，Western免疫印迹检测ERK1／2、磷酸化ERK1／2和proeaspase-3蛋白的表达。结果发现ASMCs上存在ERK mRNA和蛋白的表达，与空白对照组比较，PD98059干预后ASMCs的A490值和细胞DNA合成量均减少（P〈0．05），细胞凋亡指数、早期凋亡细胞百分率均增高（P〈0．05），ERK1／2、磷酸化ERK1／2表达和ERK活化率均降低，procaspase-3蛋白的表达增高．EGF干预后ASMCs的A490值和细胞DNA合成量均增高（P〈0．05），细胞凋亡指数、早期凋亡细胞百分率均下降（P〈0.05），ERK1／2、磷酸化ERK1／2表达和ERK活化率均增高，procaspase-3蛋白的表达降低．P＋E组无明显差异（P〉0．05）．ERK信号通道参与大鼠ASMCs增殖和凋亡的调控，ERK对大鼠ASMCs凋亡的调控与proeaspase-3蛋白有关，这一发现将有助于对哮喘ASMCs异常增殖调控机制的深入研究．

小青龙汤含药血清对内皮素-1诱导的气道平滑肌细胞增殖作用的影响

目的:观察小青龙汤含药血清对内皮素-1(ET-1)诱导的气道平滑肌细胞(ASMC)增殖作用的影响。方法:实验分6组,正常组(10%正常对照组血清)、模型组(ET-1加10%正常对照组血清)、小青龙汤高剂量组(ET-1加10%小青龙汤高剂量组血清)、小青龙汤中剂量(ET-1加10%小青龙汤中剂量组血清)、小青龙汤低剂量组(ET-1加10%小青龙汤低剂量组血清)、地塞米松组(ET-1加10%地塞米松组血清),每组8孔。采用MTT比色法检测ASMC 24h、48h、72h增殖情况。结果:与模型组比较,小青龙汤低剂量组含药血清各期及中剂量组24h、72h对ASMC增殖均有显著性差异(P<0.05);小青龙汤高剂量组各期、中剂量组48h及地塞米松组各期均有极显著性差异(P<0.01)。结论:小青龙汤药物血清能有效抑制ET-1诱导的ASMC增殖作用,可知抑制哮喘大鼠平滑肌增殖是小青龙汤影响哮喘大鼠气道重建的途径之一。