羧甲基壳聚糖微球固定化AS1.398中性蛋白酶的制备和性质研究

以戊二醛为交联剂,制备羧甲基壳聚糖微球固定AS1．398中性蛋白酶。研究了羧甲基壳聚糖固定化酶微球的制备条件、固定化酶的适宜温度、pH、米氏常数和储存稳定性等性质。结果表明。在pH=7．0的中性环境下；交联剂与羧甲基壳聚糖摩尔比为0．4：1；干酶与羧甲基壳聚糖的质量比为0．125：1；在室温下交联至少4h。便可得到活力相对较高的固定化酶。自由酶和固定化酶的最适宜温度分别为40℃和65℃。在70℃下，固定化酶的热稳定性比自由酶要好。自由酶和固定化酶的最佳pH分别为7．0和6．0，固定化酶具有较宽的酸碱稳定性，在pH6～8都保持较高活力。固定化酶在5℃和35℃下储存1周后酶相对活力分别为97．6％和85．1％，而没有被固定的自由酶在5℃下储存1周酶相对活力仅为61．3％。自由酶和固定化酶的Km分别为5．66g／L和1．04g／L。

应用响应面法优化AS1.398中性蛋白酶的双水相萃取条件

选择PEG-柠檬酸钠双水相体系对AS1.398中性蛋白酶粗酶液进行萃取纯化研究,考察粗酶质量浓度、pH值、相比、离子强度等因素对酶分配的影响,并进一步采用响应面分析优化实验条件.结果表明:采用响应面方法可以有效地对系统进行选择和设计,大大方便了研究工作.选择PEG1000-柠檬酸钠体系,在粗酶质量浓度5.2 g/L、相比2、pH=7.1条件下,AS1.398中性蛋白酶的纯化倍数达3.6以上.

用酶组合技术制备水解明胶的研究

本文研究了ASI.398中性蛋白酶和菠萝蛋白酶法制备水解明胶,初步探讨了用酶的组合技术制备小分子量及窄分布水解明胶的可能性。结果表明,酶的不同组合方式是调节产物分子量及分布的极有效手段,菠萝蛋白酶和AS1.398中性蛋白酶组合的先后次序,可以调节产物的分子量,两者以混合方式组合,则可以调节产物的分子量分布。

大豆肽优化设计制备条件

用As1.398中性蛋白酶水解大豆分离蛋白,在单因素分析的基础上采用四因素五水平的中心组合设计和响应面方法优化大豆分离蛋白酶水解制备大豆肽的条件,应用SAS分析软件对实验数据进行处理,得到最佳酶条件为:温度41.4℃;pH7.0;酶与底物浓度比0.84%;底物浓度8.43%,水解时间3h。在此条件下大豆蛋白的水解度的预测值为11.09%,实际测定的水解度值为11.08%。