猪氨基酸转运载体b^(0,＋)AT-2的分子克隆及其序列分析

本研究克隆了b0,+AT-2的全长cDNA序列。基于NCBI发布的人和鼠b0,+AT序列,应用生物学软件进行序列比对后在同源区设计引物,获取cDNA片段;再利用RACE技术克隆了其全长cDNA序列。生物信息学分析显示:猪b0,+AT-2的全长1 488 bp,包括90 bp的3′非翻译区(UTR)和126 bp的5′UTR;编码区(CDS)编码423个氨基酸残基,分别和人、鼠b0,+AT以及猪b0,+AT-1有75.1%、71.9%和86.6%的同源性。

AT-2灭活HIV-1病毒及纯化回收鉴定

目的制备具备完整空间构型且纯度在90%以上的灭活HIV-1病毒,用于HIV疫苗研究。方法应用化学制剂2,2’-dithiodipyridine(aldrithiol-2;AT-2)灭活HIV-1病毒,对灭活的病毒超速离心浓缩并洗涤去除灭活用的化学制剂AT-2。采用分子筛技术去除灭活病毒中残存的杂质蛋白质。结果 250μmol/L AT-2与HIV-137℃作用1 h可以彻底灭活病毒的感染性,同时保留病毒的免疫原性。灭活的病毒纯化后检测不到AT-2的残留,检测牛血清蛋白残余量低于50 ng/mL。结论灭活的HIV-1病毒经过纯化后纯度达到95.6%,可以满足作为HIV疫苗研究的免疫刺激剂的使用要求。

2,6-二羟基-3-氰基-5-氟吡啶的催化氯化研究

采用催化氯化方法改进2，6-二氯-3-氰基-5-氟吡啶的合成，实验结果表明：在N，N-二甲基苯胺催化下，用PCl3作氯化剂和溶剂，可使2，6-二羟基-3-氰基-5-氟吡啶的氯化反应收率达54％，催化氯化方法可方便投料操作。

高效液相色谱化学发光测定中药制剂中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷

研究了2 ,3,5 ,4′四羟基二苯乙烯2 O βD 葡萄糖苷在硝酸介质中与高锰酸钾的发光行为和光谱现象,甲醛的存在可使化学发光强度大大增强。由于中药制剂成分复杂,干扰大,文章首次采用反相高效液相色谱化学发光技术,建立了一种测定中药制剂中2 ,3,5 ,4′四羟基二苯乙烯2 O βD 葡萄糖苷含量的新方法。对于不同中药制剂样品中2 ,3,5 ,4′四羟基二苯乙烯2 O βD 葡萄糖苷测定的回收率为10 2 %～10 8%。方法的检出限为11 83μg·mL- 1 ,线性范围为15 75～136 5 μg·mL- 1 ,相对标准偏差为3 4 5 % (Cs=2 1 0 μg·mL- 1 ,n =3)。此法简便、快速,重复性好,结果令人满意。

广义逆A_(T,S)^(2)的表示与逼近

给出了广义逆AT,S(2)的一个新的表示式．由此建立了基于两个特殊的Hermite插值多项式的广义逆迭代计算格式,数值例子说明方法是可行的．

“形神共养”对大鼠认知功能、突触素、微管相关蛋白-2及锥体细胞的影响

目的:探讨"形神共养"的丰富生存环境对正常大鼠认知功能、突触素(SYN)、微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达及大脑m PFC区锥体细胞的影响。方法:健康雄性SD大鼠48只,随机分为"形养"组(EE1),"神养"组(EE2),"形神共养"组(EE3)和标准养组(SE),每组12只,分别进行形养、神养、形神共养的丰富生存环境训练及标准养。训练结束后进行水迷宫实验,水迷宫结束后用免疫组织化学方法检测海马区SYN、MAP-2的表达;用Golgi-Cox染色观察大脑内侧前额叶区锥体细胞树突的变化。结果:水迷宫测试的第5天,EE3组大鼠的潜伏期明显短于SE组(P<0.05);4组大鼠在目标象限停留的时间无明显差异(P>0.05)。SE组的SYN表达最低,而EE1组和EE3组之间的表达无明显差异且均高于EE2组。SE组的MAP-2表达最低,而EE3组的表达高于EE1组和EE2组。m PFC区锥体细胞树突交点总数4组组间比较差异无显著性意义(P>0.05)。棘密度EE3组最大,其次是EE1组,SE组与EE2组之间无区别且较EE1和EE3组低。结论:"形神共养"的丰富生存环境可提高正常大鼠的认知功能,并促进SYN及MAP-2免疫表达及锥体细胞树突生长。

白细胞介素-2改变心肌细胞钙瞬态的频率依赖性

目的 :观察白细胞介素 - 2 (IL - 2 )对大鼠心肌细胞内钙处理能力的影响。方法 :采用细胞内双波长钙荧光系统检测稳定状态及不同电刺激频率下单个心肌细胞钙瞬态的变化。结果 :在稳定状态 (0 2Hz)下 ,2× 10 5U/LIL - 2抑制心肌细胞钙瞬态的幅度和峰值 ,使舒张末钙水平升高 ,钙瞬态下降相时间常数延长。细胞外钙浓度为 1 2 5mmol/L时 ,心肌细胞舒张末钙水平、钙瞬态的幅度均随刺激频率 (0 2 - 1 0Hz)的增高而增高。IL - 2抑制了这种正性的频率依赖关系 ,当将外钙浓度增加至 2 5mmol/L时并不能改变其抑制作用。咖啡因诱导的内贮钙释放也呈现正性的频率依赖关系 ,2× 10 5U/LIL - 2抑制其频率依赖关系。在细胞外钙浓度为 1 2 5mmol/L时 ,两组间的钙瞬态机械恢复特性无差异 ,当外钙为 2 5mmol/L时 ,IL - 2组的恢复率减慢。结论 :IL - 2通过抑制肌浆网内贮钙的释放而抑制了细胞内钙瞬态的正性频率依赖关系。

高分辨率熔解曲线分析技术检测MASP-2基因点突变方法的建立及评价

目的建立高分辨率熔解曲线(HRM)分析技术检测人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)基因g.21370(G>T)位点单核苷酸多态性(SNP)的方法并进行评价。方法通过测序获得MASP-2基因g.21370(G>T)位点3种不同基因型对照品,并用其建立HRM技术检测MASP-2基因点突变方法。利用60份待测DNA样品对建立的HRM方法的准确性、重复性及稳定性进行评价。结果建立的MASP-2基因HRM分析方法扩增反应正常,G/G、G/T、T/T 3种基因型区分明显,扩增产物Melt曲线良好,无非特异性产物出现;与基因序列测定结果对比显示准确性良好;对野生型和突变型标本3次重复检测结果显示,Tm值变异系数为0.017和0.023;χ~2检验结果表明,本研究选取的随机体检人群MASP-2基因g.21370(G>T)位点基因型频率分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡。结论建立的MASP-2基因g.21370(G>T)位点HRM检测方法准确性高、重复性及稳定性良好,为下一步临床分析MASP-2基因SNP提供一定的技术支持。

利拉鲁肽对2型糖尿病非酒精性脂肪肝病小鼠的作用研究

目的探讨利拉鲁肽对2型糖尿病非酒精性脂肪肝病的保护作用及机制。方法选取50只小鼠,随机分为正常对照组(15只)和高糖高脂饲料组(35只),采用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素的方法,建立2型糖尿病非酒精性脂肪肝病的小鼠模型,经处理分为正常对照组、模型对照组、利拉鲁肽组,每组10只。利拉鲁肽皮下注射8周,观察各组空腹血糖(FBG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及肝指数等指标;检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)的水平;采用HE染色及油红"O"染色观察肝组织病理改变;采用免疫组织化学法检测肝组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BaX)的表达。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠的FBG、FINS、HOMA-IR增高,血清TG、TC、ALT、AST含量升高,肝指数增高,肝组织中SOD活性降低、MDA含量升高、TNF-α及IL-8水平上升,HE染色、油红"O"染色肝组织中脂肪性变明显,Bcl-2蛋白表达明显减少,BaX蛋白表达明显增加(P<0.01,P<0.05)。与模型对照组比较,利拉鲁肽组的FBG、TG、TC、ALT、AST含量降低,HOMA-IR及肝指数下降;肝组织中SOD活性升高,MDA含量及TNF-α、IL-8水平下降(P<0.01);HE染色、油红"O"染色肝组织中脂肪性变明显减轻,Bcl-2蛋白表达明显增加,BaX蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论利拉鲁肽对2型糖尿病非酒精性脂肪肝病的小鼠肝脏具有保护作用,其机制可能与其抗氧化作用、减少炎症因子的表达及调节凋亡相关蛋白Bcl-2、BaX的表达有关。

重组腺相关病毒2型转导人外周血单核细胞来源树突状细胞的研究

树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前发现的功能最强的专职抗原递呈细胞(antigen presenting cell,APC)，能捕获、加工和提呈抗原,参与淋巴细胞的生长分化,并产生原发性CTL反应的细胞,在激活T细胞介导的免疫反应中起关键性作用[1].

1-羟乙基-2-苯并咪唑氨基甲酸甲酯和1-乙基(2’一丙烯酸酯-1’-基)-2-苯并咪唑氨基甲酸甲酯的合成及用薄层一紫外分光光度法测定其含量

１－乙基（２’－丙烯酸酯－１’－基）－２－苯并咪唑氨基甲酸甲酯是合成多菌灵高 分子化学型缓释剂的重要单体。本文报道了１－乙基（２’－丙烯酸酯－１’－基）－２－苯并 咪唑氨基甲酸甲酯及其制备过程中的中间体－１－羟乙基－２－苯并咪唑氨基甲酸甲酯的 合成和分析方法。

草苁蓉中2个单萜苷类化合物的NMR研究

从草苁蓉75%乙醇提取物中分离得到了2个单萜苷类化合物,结合其理化性质,并通过1DNMR(1 H NMR,13 C NMR)及1 H-1 H COSY、HSQC、HMBC、NOESY等多种波谱学方法进行结构鉴定,鉴定2个化合物分别为β-D-glucopyranose 1-(3,7-dimethyl-2-trans-6-octa-dienoate)(化合物1)和6,7-dihydrofoliamenthoic acid diglucoside(化合物2),其中化合物1为新化合物,化合物2为第1次从列当科植物中获得.

水作溶剂合成季戊四醇螺环磷酸2-氯苯酚酯

以季戊四醇、三氯氧磷为原料,探讨了微波作用下季戊四醇双磷酸酯二磷酰氯的制备,用水作溶剂在碱性条件下合成了季戊四醇螺环磷酸2-氯苯酚酯,并确定了适宜的反应条件:温度6～7℃,时间4.5h,产率达56.3%。

2,3-戊二酮的合成

以丙酸甲酯为原料经Claisen缩合、肟化和肟交换反应合成了标题化合物。其结构经MS、1HNMR和13CNMR确定。

米拉贝隆中间体2-氨基噻唑-4-乙酸的合成

以氰胺、硫和氯乙酰乙酸乙酯为原料,一水合对甲苯磺酸(TsOH·H_2O)为催化剂,经成环反应制得2-氨基噻唑-4-乙酸乙酯(2);2经水解反应合成了米拉贝隆中间体2-氨基噻唑-4-乙酸,其结构经~1H NMR,^(13)C NMR,IR和元素分析确证。在最佳反应条件[10.25 mol,TsOH·H_2O 0.01 mol,反应温度为80℃,重结晶溶剂(乙醇/水=1/1,V/V)]下,2收率88.2%。

6-硝基-4-二甲氨基甲基-5-羟基-1-甲基-2-苯硫甲基-1H-吲哚-3-羧酸乙酯的合成

以对苯醌和3-(甲基氨基)-2-丁烯酸乙酯为起始原料,经Nenitzescu反应、乙酰化、硝化、溴代、缩合、Mannich反应得到一个新化合物6-硝基-4-二甲氨基甲基-5-羟基-1-甲基-2-苯硫甲基-1H-吲哚-3-羧酸乙酯,总产率19.3%。反应中间产物和目标产物结构采用1HNMR和质谱确认。

德国应用科技大学(FH)获博士学位授予权之争议

在德国,迄今只有综合性大学及同等机构具有博士学位授予权,而近年来成功发展的应用科技大学(FH)只设有学士和硕士学位,并无博士学位授予资格。这种格局与FH的历史发展背景关系密切。2013年年底,德国联邦州石勒苏益格-荷尔斯泰因拟突破原《高等学校总纲法》,赋予该州的应用科技大学博士学位授予权。这一决定在德国教育界以及德国社会引发大范围的讨论,也成为媒体关注的热点议题。目前,拥有博士学位授予权的综合性大学持强烈反对意见,而德国媒体中则以支持赋予FH博士学位授予权的声音占据压倒性多数。FH争取博士学位授予权的诉求,符合其自身学科发展的需要以及FH学生攻读博士学位的需求,也符合知识生产模式现代转型的趋势。德国FH与高校关于博士学位授予权的争夺,体现了传统知识生产模式与现代知识生产模式之间的并存与竞争关系。

草地早熟禾草坪苗期除草剂使用研究

2-4-D丁脂和2甲4氯钠盐作为典型的选择性除草剂,已被广泛用于草坪杂草防除,但是,在草坪草苗期能否使用或如何使用却没有相关文献记载。以草地早熟禾二叶至三叶期的幼坪为防除对象,各设计3种药剂用量,通过田间试验证明,这两种除草剂在适当的用量范围内,不会对草坪草密度产生显著影响,而对藜的杀灭效果显著。

腺苷A_1受体阻断剂对学习记忆的影响及机制分析

目的 探讨腺苷A1 受体阻断剂对学习记忆的影响及其与胆碱能、氨基酸能神经的关系。方法 采用避暗实验、分光光度法和HPLC法 ,观察腺苷A1 受体特异性阻断剂 8 环戊 1 ,3 二丙基黄嘌呤 (DPCPX)对东莨菪碱(Scop)、2 氨基 5 磷戊酸 (AP5)致小鼠记忆障碍及脑胆碱酯酶 (AChE)活性、氨基酸水平的影响。结果 DPCPX可显著改善Scop致记忆障碍 ,但对AP5致记忆障碍无影响 ;在体内外高剂量DPCPX可显著抑制小鼠脑AChE活性 ;DPCPXicv可显著升高小鼠脑Glu和Asp含量 ,降低GABA含量 ,使脑内Glu GABA比值显著升高。结论 腺苷A1 受体特异性阻断剂DPCPX可显著改善Scop而不能改善AP5致记忆障碍 ,在高剂量时可影响脑AChE活性和脑氨基酸水平、升高脑内Glu GABA比值。