基于ACE/AngⅡ/AT1R通路探讨补肾降压方对盐敏感性高血压大鼠肾纤维化的作用机制

目的:探讨补肾降压方对盐敏感性高血压DS大鼠肾纤维化及肾素血管紧张素转换酶-血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体(ACE-AngⅡ-AT1R)信号通路的调节作用,探讨其防治高血压肾损害的作用机制。方法:选用盐敏感性高血压大鼠(Dahl salt-sensitve,DS)48只,随机数字表法分为低盐组、高盐组、缬沙坦组和补肾降压组,喂食以不同浓度钠盐饲料造模后,予药物干预8周。于干预前后测量血压。干预后酶联免疫吸附测定(ELISA)血清中血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)及转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))的含量。苏木精-伊红(HE)染色观察肾组织病理学改变情况,Masson染色观察肾纤维化程度。反转录PCR(RT-PCR)及蛋白质印迹法分别检测肾脏血管紧张素转化酶(ACE)及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)mRNA及蛋白表达水平。结果:喂食3周不同浓度盐后,喂食高盐各组收缩压均较低盐组升高(P<0.01)。干预后,与低盐组比较,高盐组收缩压升高,Cr、BUN升高,血清AngⅡ及TGF-β_(1)水平升高,HE及Masson染色显示肾脏纤维化程度加重,肾脏ACE及AT1R蛋白及mRNA表达升高(P<0.01)。与高盐组比较,缬沙坦组及补肾降压组收缩压降低,Cr、BUN降低,血清AngⅡ及TGF-β_(1)水平降低,肾脏纤维化程度减轻,肾脏ACE及AT1R蛋白及mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾降压方有平稳降压,改善肾功能的作用,其作用机制可能与调节ACE/AngⅡ/AT1R轴进而抑制TGF-β_(1)达到延缓肾纤维化相关。

基于三维基质硬度调控力敏感蛋白AT1R的金水缓纤组分方干预IPF机制研究

目的特发性肺纤维化(IPF)是一种严重危害人类健康的疾病,成纤维细胞的表型转化是其重要病理基础。岐黄工程首席科学家李建生教授基于多年临床经验拟定临床疗效显著的金水缓纤方(Jinshui Huanxian Formul,JHF)。由于其成分复杂,故优化了其组分和配伍,形成了疗效相当的金水缓纤组分方Ⅱ(ECC-JHFⅡ),但具体作用机制尚不清晰,尤其缺乏考虑三维微环境对ECC-JHFⅡ药效影响的体外研究。因此,本研究通过构建三维生物力学微环境,研究ECC-JHFⅡ干预肺纤维化的作用机制。方法以原代肺成纤维细胞FLs及人胚肺细胞MRC-5为研究对象,借助3D建模技术、3D打印技术及硬度原位可调的复合水凝胶,构建高通量、模块化肺纤维化微器官芯片,观察不同时间点肌成纤维细胞表型转化标志物的表达,探究基质硬度对成纤维细胞表型转化的影响规律以及ECC-JHFⅡ干预肺纤维化的机制。结果三维基质原位软化能够抑制细胞中α-SMA、COL I及FN的表达,有效促进肌成纤维细胞的表型逆转;ECC-JHFⅡ能够显著抑制α-SMA、COL I、FN的表达,促进肌成纤维细胞的表型逆转,抑制肺纤维化,其主要机制是通过力敏感蛋白AT1R及其下游信号分子YAP进行调控。结论ECC-JHFⅡ能够促进肌成纤维细胞的表型逆转,干预肺纤维化进程,主要机制是通过降低细胞中力敏感蛋白AT1R及其下游信号分子YAP的表达。

基于AngII/AT1R通路探究活血通脉颗粒治疗高血压肾损害的作用机制

目的探讨基于血管紧张素II(Ang II)/血管紧张素Ⅱ型受体(AT1R)通路,活血通脉颗粒对高血压肾损害所发挥的促进作用。方法选取12只正常大鼠纳入正常对照组(A组),将48只的高血压肾损害大鼠分为模型对照组(B组)、中药组(C组)、贝那普利组(D组)及中药+贝那普利组(E组),C组、D组及E组分别予以活血通脉颗粒剂、贝那普利混悬液及中药+贝那普利灌胃饲养,比较各组大鼠血压及肾功能指标改善情况。结果与A组对比,其他4组大鼠SBP、DBP、尿m-ALB、尿NAG及血Scr、血BUN水平均更高(P<0.05),与B组比较,C组、D组及E组大鼠SBP、DBP、尿m-ALB、尿NAG及血Scr、血BUN水平均更低(P<0.05),与D组比较,C组及E组SBP、DBP、尿m-ALB、尿NAG及血Scr、血BUN水平均更低(P<0.05),与D组比较,E组SBP、DBP、尿m-ALB、尿NAG及血Scr、血BUN水平均更低(P<0.05)。与A组对比,其他各组大鼠24hPro、Ald、AngII、AT1R、ACE水平均更高(P<0.05),与B组比较,C组、D组及E组大鼠24hPro、Ald、AngII、AT1R、ACE水平均更低(P<0.05),与D组比较,C组及E组24hPro、Ald、AngII、AT1R、ACE水平均更低(P<0.05),与D组比较,E组24hPro、Ald、AngII、AT1R、ACE水平均更低(P<0.05)。结论活血通脉颗粒可有效改善高血压肾损害,联合贝那普利能够取得更加理想的病情改善效果。

活血潜阳方对SHR心肌间质重构及AngⅡ、AT1、AT2的影响

目的探讨活血潜阳方对自发性高血压大鼠(SHR)心肌间质重构的影响及其可能机制。方法10周龄雄性SHR随机分为4组:SHR对照组、中药组、西药组、中西合用组(活血潜阳方+缬沙坦),同龄WKY大鼠为正常对照组。于治疗7周及14周后酶免法及放免法测血清及心肌组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量,FQ-PCR法测心肌AT1、AT2mRNA表达,光镜观察心肌细胞及间质胶原变化和胶原容积分数(CVF),并进行各项指标间的相关分析。结果与WKY大鼠比较,SHR血清及心肌AngⅡ含量显著增高、心肌AT1、AT2mRNA表达显著上调、CVF显著增加(P<0.01)。活血潜阳方治疗7周即可显著降低组织AngⅡ含量、下调AT1mRNA表达、减少CVF(P<0.01);治疗14周可使血清AngⅡ含量降低(P<0.05)。结论活血潜阳方可改善SHR心肌间质重构,其机理可能与降低循环及心肌组织AngⅡ含量、下调心肌组织AT1mRNA表达有关。

益气活血利水不同配伍对慢性心衰大鼠AT1、ERK2影响的实验研究

目的:通过研究血管紧张素1型受体(AT1)及心肌细胞外信号调节激酶(ERK2)信号通路在慢性心衰中的作用,从分子生物学角度探讨中药对慢性心衰心室重构的影响,并进一步阐明其作用机理。方法:以冠脉结扎法配合力竭式游泳、减食等方法造成大鼠慢性心衰动物模型,对造模成功大鼠分为模型组、西药组、益气中药组、活血中药组、益气活血中药组和益气活血利水中药组,没有进行左冠脉结扎手术的假手术大鼠为正常组。利用实时荧光定量PCR技术及SABC免疫组化法检测慢性心衰大鼠AT1、ERK2的变化情况。结果:慢性心衰动物模型组大鼠心肌AT1、ERK2表达明显升高,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01);经过治疗,各用药组大鼠心肌组织AT1、ERK2表达明显降低,其中益气活血组、益气活血利水组中药与西药组比较,差异无统计学意义(P>0.05),且益气活血利水组疗效明显优于益气活血组(P<0.01)。结论:证明益气、活血、利水中药复方可通过抑制心肌组织中AT1、ERK2的表达,抑制或逆转心室重构的过程,从而达到治疗慢性心衰的目的。

动脉粥样硬化性脑梗塞患者ACE基因与AT1R基因多态性分析

目的探讨在动脉粥样硬化性脑梗塞（ＡＣＩ）发生中血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）基因与血管紧张素Ⅱ受体１型（ＡＴ１Ｒ）基因多态性的关系。方法采用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性技术分别检测８１例ＡＣＩ患者和１０２例健康对照的ＡＣＥ和ＡＴ１Ｒ基因型。结果ＡＣＥ基因ＤＤ型与ＡＣＩ的发生显著相关（Ｐ＜０．０５）。在携带有ＡＣＥ基因ＤＤ型的群体中，ＡＴ１Ｒ基因型ＡＡ的个体患ＡＣＩ的比数比为１．３９，ＡＴ１Ｒ基因型ＡＣ患ＡＣＩ的比数比为３．６６，ＡＴ１Ｒ基因型ＣＣ患ＡＣＩ的比数比为５．８４。结论在ＡＣＩ发生中ＡＣＥ基因和ＡＴ１Ｒ基因多态性具有协同作用。

AT1原子时算法的研究

原子时算法的选用将对原子时标的准确度和稳定度有着很大的影响。本文从AT1实时原子时算法的基本原理出发,结合中国计量科学研究院守时钟房中原子钟的实际情况,对AT1实时原子时算法进行了系统的研究,给出了其算法流程,特别是,对一些关键量进行了分析和数据验证,给出了期望钟组的计算方法,最后得到了期望的钟组计算结果。该结果表明,钟组时间的频率稳定度大大优于每台单个钟的频率稳定度,满足技术要求。

强心安神汤对慢性心衰大鼠AngⅡ及AT1mRNA表达的影响

目的研究强心安神汤对Wistar慢性心衰模型大鼠AngⅡ含量及AT1 m RNA表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法除空白组外,将Wistar大鼠造模后分为模型组、西药组、强心安神汤高剂量组及强心安神汤低剂量组,干预4周后,抽静脉血以免疫组化法测定大鼠血清中AngⅡ的含量;处死大鼠,提取心肌组织,以RT-PCR法检测心肌组织AT1 m RNA的表达。结果强心安神汤组大鼠血清AngⅡ含量及AT1 m RNA表达与模型组及西药组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论强心安神汤治疗心衰的机制可能与其抑制AngⅡ引起的AT1 m RNA表达上调有关。

黄杞总黄酮对慢性心力衰竭大鼠AT1/CARP信号通路及心肌自噬的影响

目的探讨黄杞总黄酮对慢性心力衰竭(心衰)大鼠血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)/心肌锚定重复蛋白(CARP)信号通路及心肌自噬的影响。方法SD大鼠随机分成5组:对照组、模型组、缬沙坦组(50 mg/kg)、黄杞总黄酮低、高剂量组(250、500 mg/kg),每组16只。模型组、缬沙坦组、黄杞总黄酮低、高剂量组大鼠建立慢性心衰模型,建模成功后,缬沙坦组、黄杞总黄酮低、高剂量组给予相应药物灌胃,对照组及模型组给予等体积的生理盐水,持续4 w。试验结束后,超声检查测定心功能指标,细胞自噬检测试剂盒检测心肌自噬指数,苏木素-伊红(HE)染色观察心肌病理结构变化,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western印迹测定心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平。结果与对照组比较,模型组大鼠左心室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs)、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显升高,左心室短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)明显降低(P<0.05)。与模型组比较,缬沙坦组、黄杞总黄酮低剂量组、黄杞总黄酮高剂量组LVIDd、LVIDs、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显降低,FS、EF明显升高(P<0.05);且黄杞总黄酮高剂量组LVIDd、LVIDs、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显低于黄杞总黄酮低剂量组,FS、EF明显高于黄杞总黄酮低剂量组(P<0.05)。与缬沙坦组比较,黄杞总黄酮低剂量组LVIDd、LVIDs、自噬指数、心肌组织AT1、CARP mRNA和蛋白水平明显升高,FS、EF明显降低(P<0.05)。对照组心肌结构正常;模型组心肌横纹紊乱,心肌细胞明显肿胀,出现空泡情况,肌纤维溶解明显,有明显炎症细胞浸润;缬沙坦组及黄杞总黄酮高剂量组心肌炎症细胞浸润减少,心肌纤维排列整齐;黄杞总黄酮低剂量组心肌仍有明显病理变化。结论黄杞总黄酮对慢性心衰大鼠心功能及心脏病理改变有明显保护作用,能明显降低心肌细胞自噬水平;其机制可能与黄杞总黄酮可抑制心肌AT1、CARP mRNA和蛋白水平,进而抑制AT1/CARP信号通路的激活有关。

ACE基因I/D和AT1R基因A1166C多态性与氢氯噻嗪降压疗效的相关性研究

目的探讨血管紧张素转换酶(ACE)基因I/D与血管紧张素Ⅱ-1型受体(AT1R)基因A1166C多态性与氢氯噻嗪(HCTZ)降压疗效的关系。方法原发性高血压患者服用HCTZ6周后,按不同ACE基因型和AT1R基因型分组,比较不同基因型组合患者的血压下降值。结果ACE基因DD、ID、Ⅱ基因型患者收缩压均下降,DD基因型患者收缩压下降值显著大于ID、II型患者(P<0.05);AT1R基因AC(CC)和AA基因型患者收缩压下降值组间比较无显著差异(P>0.05);DD+AC(CC)基因型组合患者收缩压亦下降,与其他基因型组合患者比较无显著差异(P>0.05)。多因素分析结果表明,治疗前醛固酮浓度和DD基因型是影响患者收缩压下降的主要因素。结论ACE基因的DD基因型与HCTZ的降压疗效相关;AT1R基因AC(CC)、DD+AC(CC)型组合患者对HCTZ的降压反应可能优于其他基因型组合患者。

AT1R、ACE基因多态性与东乡族原发性高血压的关系及其对降压药疗效的影响

目的:探讨血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)I型受体(AT1R)基因多态性与甘肃东乡族原发性高血压(EH)的关系。对不同基因型患者使用AT1R拮抗剂治疗,观察其疗效。方法:应用聚和酶链反应(PCR)方法检测汉族健康131例、东乡族健康102例、汉族EH198例、东乡族EH115例的AT1RA/C、ACEI/D基因多态性。随机选取60名EH患者,按其基因型分成AA和AC(AA、AC为基因型)两组,使用缬沙坦治疗8周,比较治疗前后血压变化。结果:ACE基因II型在汉族EH组明显高于东乡族EH组(P<0.05),ID基因型在东乡族EH组明显高于汉族EH组(P<0.01);AT1R基因AC型汉族EH组明显高于东乡族EH组(P<0.05);AA型在东乡族EH组明显高于汉族EH组(P<0.05)。使用缬沙坦治疗8周,各基因型在治疗后患者血压均下降显著(P<0.05)。不同基因型之间治疗后比较,降压效果无差异。结论:AT1R基因AA型和ACE基因ID型与东乡族EH有关;ACE基因II型和AT1R基因AC型与汉族EH有关,C和D等位基因与汉族和东乡族EH无关。使用缬沙坦对不同基因型患者进行药物治疗,降压疗效相同,说明降压疗效与基因型无关。

糖尿病合并难治性高血压抗AT1受体自身抗体阳性患者缬沙坦靶向治疗疗效研究

目的观察糖尿病合并难治性高血压抗AT1受体自身抗体阳性患者缬沙坦靶向治疗的降压疗效。方法以合成的AT1受体多肽片段为抗原,应用ELISA技术,检测糖尿病合并2级以上高血压患者169例,正常对照组60例。糖尿病合并难治性高血压患者抗AT1受体自身抗体阳性者为治疗组,阴性者为对照组,两组均给予尼群地平、氢氯噻嗪、肠溶阿司匹林、缬沙坦。结果(1)糖尿病合并难治性高血压98例(抗AT1受体自身抗体阳性者61例,占62.2%),糖尿病合并非难治性高血压71例(抗AT1受体自身抗体阳性者11例,占15.5%),两组比较具有显著性统计学意义。糖尿病合并难治性高血压抗AT1受体自身抗体阳性组(61例,治疗组)缬沙坦降压疗效明显优于抗AT1受体自身抗体阴性组(37例,对照组),两组有统计学差异。(2)临床降压效果评定,治疗组总有效率为95.1%,对照组为32.4%,差异具有极显著性意义(P<0.001)。结论检测糖尿病合并难治性高血压患者的抗AT1受体自身抗体,有针对性地选择降压药物缬沙坦,降压效果好,且较安全。

三种治法对SHR血管AT1和TGF-β1表达影响的比较研究

目的:对比研究平肝潜阳法、化湿利水泄浊法及二者的合法平肝化湿法对自发性高血压大鼠(SHR)血管重构(VR)的影响。方法:45只12周龄SHR随机分为平肝组、化湿组、合方组、依那普利组和模型组,另选WKY大鼠作为正常对照(WKY组)。间接测压法测量清醒状态下尾动脉收缩压,采用放免法检测血浆血管紧张素II(AngII)水平及免疫组织化学法检测SHR AngII1型受体(AT1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达。结果:SHR组存在AngII及AT1、TGF-β1表达上调,各治疗组可有效降低AngII、TGF-β1,仅合方组、依那普利组有下调AT1表达的作用。结论:平肝、化湿及其合法降压、改善VR的作用可能与其降低AngII、TGF-β1、AT1(仅合法)水平有关,尤以合法疗效突出,可能与合方后的多靶点、多途径干预有关。

自发性高血压大鼠大、中动脉壁AT1和AT2受体表达的增龄性变化

目的以自发性高血压大鼠(SHR)为研究对象,探讨动脉血管壁胶原成分、血管紧张素Ⅱ受体(ATR)AT1和AT2亚型蛋白表达的增龄性改变。方法幼年组(7周)、成年组(26周)、老年组(51周)雄性SHR各20只,正常饮食饲养1周后,测定鼠尾动脉收缩压;胸主动脉及肠系膜上动脉(SMA)取材后,石蜡切片,Mallory染色观察壁纤维化程度,免疫组化SABC法测定ATR蛋白表达。结果 3个年龄组SHR大鼠的血压随增龄呈现明显升高[(151±26)mmHg vs.(166±9.0)mmHg vs.(180±13)mmHg,P<0.05];胸主动脉和SMA壁Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维沉积亦随增龄增多(IA值:主动脉416±43 vs.483±74 vs.553±83,SMA 387±46 vs.425±67 vs.468±81,P均<0.05);胸主动脉和SMA壁AT1和AT2表达均随年龄增长呈增高趋势(灰度值:胸主动脉AT1 159±7.0 vs.150±8.7 vs.139±8.9,AT2 187±6.9 vs.181±9.5 vs.169±10;SMA AT1 163±11 vs.112±11 vs.128±18,AT2 188±11 vs.171±15 vs.171±13;P均<0.05),AT1/AT2比值仅在老龄组增高(幼龄及老龄组胸主动脉0.86±0.01 vs.0.78±0.08;SMA 0.85±0.07 vs.0.71±0.08,P均<0.05)。结论增龄可导致SHR成纤维细胞生长、胶原纤维沉积,血管壁局部AT1、AT2表达及二者比例改变,同时AT1由单纯的介导血管收缩作用转变为介导血管壁重塑,可能是SHR大鼠血压增龄性改变的机制之一。

塔河油田AT1井区油气藏类型研究

塔河油田AT1井区中三叠统阿克库勒组油气藏为低幅度构造与断层控制的底水油气藏,储集层流体性质较为复杂。开发初期,根据PVT资料,认为AT1井区为凝析气藏。随着开发的深入,大部分气井均出现气油比大幅下降的现象,同时在见水初期出现产油量增加、产气量明显下降的油侵特征,开发效果明显变差。应用油气藏高压物性、流体性质、石油天然气组分分析、生产特征分析、储量系数等资料,判断AT1井区油气藏类型为带凝析气顶的油藏,分析了AT1井区的开发效果,提出了高含水期的开发对策,对同类油气藏的类型判定与开发具有一定的借鉴意义。

鳖甲煎口服液对肝纤维化大鼠ACE-AngⅡ-AT1R轴的影响

[目的]研究鳖甲煎口服液(Biejiajian oral liquid,BOL)对酒精性肝纤维化大鼠肝组织中血管紧张素转换酶-血管紧张素Ⅱ-血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin converting enzyme-angiotensinⅡ-angiotensinⅡtype 1 receptor,ACE-AngⅡ-AT1R)轴的影响。[方法]将65只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、马来酸依那普利(enalapril malecate,Ena)组、BOL低、中、高剂量组,其中模型组15只,其余每组10只。除正常组外其余各组大鼠制备酒精性肝纤维化模型,造模结束后各组给予相应药物治疗4周。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察各组大鼠的肝纤维化状况,酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测肝组织中的AngⅡ的水平,以实时定量PCR(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测肝组织中ACE、AT1R的mRNA表达。[结果]BOL各剂量组和Ena组的肝纤维化程度减轻,模型组肝组织中的AngⅡ含量和ACE、AT1R mRNA表达高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05);BOL各剂量组和Ena组可以显著降低肝组织中的AngⅡ含量和ACE、AT1R mRNA的表达。[结论]AngⅡ含量和ACE、AT1R mRNA表达升高可能是大鼠酒精性肝纤维化发生机制之一,而BOL可以通过下调三者的表达对大鼠酒精性肝纤维化的发展起到抑制作用。

拟南芥Nodulin MtN21家族At1 g0938基因功能的初步研究

拟南芥Nodulin MtN21蛋白家族含有1-2个DUF6结构域,具有内在膜蛋白的特性。推测该家族基因在小分子跨膜运输、信号转导和抗逆性等方面发挥作用。At1 g09380是拟南芥Nodulin MtN21基因家族成员。本研究通过PCR筛选获得At1 g09380对应的T-DNA插入纯合子,并经RT-PCR鉴定该突变体为无效突变体。对突变体萌发和萌发后阶段进行盐胁迫和干旱胁迫分析,结果表明,At1 g09380突变体萌发后对NaCl和干旱胁迫敏感,证明该基因参与拟南芥的盐和干旱胁迫响应过程。同时还发现在长日照条件下突变体植株比野生型植株早开花7d左右。本文研究结果为进一步分析该基因的生物学功能打下基础。

原发性高血压人群中抗AT1受体自身抗体与AGTR1基因多态性及单倍型分析

目的:研究原发性高血压患者血清中抗AT1受体自身抗体(AT1-AAs)产生与AT1受体基因AGTR1多态性及单倍型间的关联性。方法:随机抽取394例原发性高血压住院患者血样标本,采用ELISA法对血清进行AT1-AAs检测并将其分为抗体阳性和阴性两组;同时,用试剂盒提取血细胞基因组DNA。运用连接酶检测反应检测基因AGTR1中rs1492078、rs12721226、rs1064533、rs5186及rs3804005个位点的单核苷酸多态性,并进行基因表型频率统计和单倍型分析。结果:经校正协调变量后,比较抗体阴性和阳性组中上述各点的基因型频率,差异无统计学意义;而经单倍型分析后发现含htSNP的单倍型[A-A-T]和[G-C-T]其发生频率在两组间具有明显差异,其P值分别是0.032和0.014。结论:AT1受体基因AGTR1多态性与原发性高血压患者血清中AT1-AAs的产生存在一定的关联性。

AT1R/miR-26a通路在高血压血管重塑中的调控机制

目的阐明AT1R/miR-26a通路在高血压血管重塑中的重要作用及分子机制。方法①将24只8周龄雄性自发性高血压大鼠(SHRs)分为(n=8):氯沙坦干预组[氯沙坦20 mg/(kg·d)灌胃]、哌唑嗪干预组[哌唑嗪5 mg/(kg·d)灌胃]、SHR模型对照组[纯水10 mL/(kg·d)灌胃];雄性WKY大鼠作为正常对照组[纯水10 mL/(kg·d)灌胃](n=6),干预8周;干预前后3~5 d测定鼠尾动脉收缩压(SBP),直至干预期满。②将各组大鼠麻醉取胸主动脉,qPCR检测大鼠胸主动脉miR-26a的表达水平。③剩余组织石蜡包埋行HE、Masson染色,α-actin和PCNA免疫组化染色。④Western blot检测大鼠胸主动脉AT1R、TGFβ1、p-smad3、CTGF表达情况。⑤将培养传至3~9代的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMC)分为AngⅡ处理组(VSMC+AngⅡ,AngⅡ10-7 mol/L,作用24 h处理细胞)和对照组(VSMC+Ctrl)(n=6),qPCR检测miR-26a的表达水平,Western blot检测smad3和p-smad3表达情况。结果①干预期满时,氯沙坦组、哌唑嗪组SBP明显低于模型对照组,但均高于正常对照组(P<0.05),氯沙坦组、哌唑嗪组间SBP差异无统计学意义(P>0.05)。②氯沙坦组、哌唑嗪组胸主动脉miR-26a相对表达高于模型对照组(P<0.05),且氯沙坦组高于哌唑嗪组(P<0.05),但均较正常对照组表达低(P<0.05)。③氯沙坦组、哌唑嗪组中膜厚度/管腔内经(MT/LD)、胶原体积分数(CVF)及平滑肌细胞增值指数均低于模型对照组(P<0.05),且氯沙坦组低于哌唑嗪组;正常对照组血管管壁未见明显增厚,平滑肌分布均匀且动脉内膜完整,无显著的胶原纤维沉积现象,平滑肌细胞排列整齐,胞核形态规则。④氯沙坦组、哌唑嗪组胸主动脉AT1R、p-smad3、TGFβ1、CTGF相对表达低于模型对照组(P<0.05),且氯沙坦组低于哌唑嗪组(P<0.05),但均高于正常对照组(P<0.05)。⑤VSMC+AngⅡ组细胞miR-26a表达显著低于对照组,且p-smad3表达显著高于VSMC+Ctrl组(P<0.05)。结论 miR-26a可阻止血压升高,且在高血压血管重塑进程中具有保护性作用;阻断AT1受体可通过上调miR-26a改善高血压血管重塑。

泽泻汤加味方通过AT1R通路抑制高盐和AngⅡ诱导HBZY-1中NOX4表达的研究

目的探讨泽泻汤加味方通过AT1R通路抑制高盐和AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞(HBZY-1)中NOX4表达并初探其作用机制。方法将HBZY-1细胞随机分为正常组,高盐和AngⅡ诱导模型组,缬沙坦组,泽泻汤加味方中药高、中、低剂量组。造模结束后,缬沙坦组采用缬沙坦(1μmol/L)刺激,中药组分别用泽泻汤加味方中药高(2mg/L)、中(1mg/L)、低(0.5mg/L)剂量组刺激,正常组正常培养。24 h后收集样本,RT-qPCR方法检测细胞中AT1R、NOX4的mRNA表达水平,MTT法测定细胞活性,Western blot方法检测细胞中AT1R、NOX4的蛋白质表达水平,采用AT1R抑制剂验证中药下调NOX4具体作用通路。结果与正常组比较,各给药组细胞生长受到明显抑制,RT-qPCR及Western blot结果显示,AT1R、NOX4的mRNA与蛋白表达水平显著降低(P<0.05),中药组与AT1R抑制剂组NOX4表达均下调。结论泽泻汤加味方可通过下调AT1R、NOX4 mRNA及AT1R、NOX4蛋白水平来保护盐敏感性高血压肾损伤,进而达到延缓肾纤维化的作用,具体作用机制是通过抑制AT1R信号通路进而下调NOX4蛋白表达水平。