慢病毒介导磷酸二酯酶7A基因沉默细胞株的构建及三磷酸腺苷结合盒转运体A1的表达变化

目的利用慢病毒介导构建磷酸二酯酶7A(PDE7A)基因沉默人单核巨噬细胞(THP-1)株,并分析沉默细胞株的三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达变化。方法以PDE7A基因为靶点,设计合成3段sh RNA片段,与慢病毒载体Pmi Rzip连接,构建重组质粒。测序鉴定后进行病毒包装,感染THP-1细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)进行分析,确定最佳干扰片段。嘌呤霉素筛选得到PDE7A基因沉默稳转细胞株。q PCR和Western blot检测鉴定所构建的细胞株,将其诱导成为泡沫细胞后鉴定ABCA1基因的表达。结果转染sh RNA1、sh RNA2、sh RNA3细胞的PDE7A相对表达量分别为(0.480±0.028)、(0.561±0.016)和(0.377±0.013),故选择sh RNA3作为干扰PDE7A基因的最佳片段。采用1.4 g/L嘌呤霉素成功筛选出PDE7A沉默细胞株,q PCR和Western blot检测PDE7A基因的干扰效率,其抑制效率>70%。将其诱导成巨噬泡沫细胞后,Western blot检测显示,ABCA1的表达量增加40%。结论成功构建PDE7A sh RNA慢病毒干扰载体,并筛选出PDE7A基因沉默的THP-1细胞株,且ABCA1的表达量增加。

小麦SLC25A4-7A基因克隆及其生物信息学分析

为了研究小麦腺嘌呤转移酶基因SLC25A4在小麦生长发育中的生物学功能,本研究借助RT-PCR从‘贵紫麦1号’中获取SLC25A4-7A基因的cDNA序列全长,并对其编码的蛋白进行生物信息学分析。结果表明,SLC25A4-7A基因的开放阅读框为1137 bp,编码378个氨基酸,其编码的蛋白是一个亲水的稳定蛋白。SLC25A4-7A定位于线粒体膜,该蛋白的保守结构域与在ADP/ATP转运中起重要作用的PTZ00169序列相似。蛋白三级预测结果进一步表明该蛋白具有线粒体ADP/ATP转运载体的功能。多重序列比对和系统进化树分析的结果表明,SLC25A4-7A与拟南芥AAC3在生物学功能上更为接近。本研究为进一步探究该基因的生物学功能提供了理论依据。

机体内铜转运系统的研究进展

微量元素铜是一种营养元素,它在动物机体内具有多种生物学功能,它是金属酶的组成成分,作为电子受体或供体参与机体内多种重要的生理、生化反应。因此,保持机体内铜代谢平衡,维持机体内环境铜含量的稳定非常重要。机体对铜的摄取、吸收、转运和排泄是一个非常复杂的系统,近年来国内外研究学者对动物体内铜转运系统的研究越来越重视,文章对铜在动物体内转运过程进行了综述,这对了解高铜的促生长机制有重要意义。