酵母双杂交筛选TEB4相互作用蛋白

目的酵母双杂交筛选与TEB4(MARCH-Ⅵ)有相互作用的蛋白,构建该蛋白基因序列的重组载体。方法以人TEB4为诱饵质粒,利用酵母双杂交技术筛选人淋巴瘤cDNA文库。在SD/-4培养基上共获得150多个阳性克隆,将酵母菌扩增后抽提质粒,转化大肠杆菌,进行序列分析,并经过回复杂交验证,发现了一个与TEB4相互作用的蛋白:ATP synthase F0 subunit6(ATP-C6)。PCR法扩增ATP-C6,亚克隆到质粒pCMV-HA中,获得重组质粒pCMV-HA-ATP-C6,酶切和测序进行鉴定。结果从人淋巴瘤cDNA文库筛选到一个与TEB4有相互作用的蛋白ATP-C6,并成功构建重组质粒pCMV-HA-ATP-C6。结论应用酵母双杂交系统从人淋巴瘤cDNA文库中筛选并初步验证了与TEB4有相互作用的蛋白,为TEB4蛋白功能的进一步研究奠定了基础。

不同速率生长的胶质瘤细胞的葡萄糖代谢状态研究

目的 观察不同速率生长的胶质瘤细胞的葡萄糖代谢状态。方法 用C6细胞克隆培养得到不同细胞形态、不同生长速率的细胞株。分别检测生长最快的C64细胞和最慢的C61细胞的胞内葡萄糖、ATP浓度 ,同时检测两种细胞的己糖激酶蛋白和它们的胞质 /线粒体己糖激酶活性。结果 C64细胞内检测不到葡萄糖 ,C61细胞内葡萄糖浓度为 (0 .17± 0 .0 5 ) μmol/g蛋白 ;C64细胞、C61细胞内ATP浓度分别为 (10 .16± 1.5 1) μmol/g蛋白和 (7.5 7± 0 .3 2 ) μmol/g蛋白。条带的吸光度分析显示C64细胞的己糖激酶Ⅰ稍高于C61细胞 ;C64细胞线粒体己糖激酶活性约为C61细胞的 3倍 ,但其胞质己糖激酶活性仅为C61细胞的一半。结论 葡萄糖转运系统与肿瘤细胞的葡萄糖摄取、葡萄糖代谢状态及生长速度等密切相关。