人大肠癌组织中ABCG2 mRNA的表达

目的:检测人大肠癌组织中耐药基因ABCG2mRNA的表达并探讨其与临床病理特征的关系。方法:采用RT-PCR方法检测102例大肠癌组织(男60例,女42例;≥60岁63例,<60岁39例;乳头状腺癌21例,管状腺癌48例,黏液腺癌13例,腺鳞癌20例;肿瘤直径≥5cm者58例,<5cm者44例;高分化23例,中分化49例,低分化30例;有淋巴结转移72例,无淋巴转移30例;Duke's分期:A期14例,B期20例,C期42例,D期26例)及15例正常大肠黏膜组织中ABCG2mRNA的表达。结果:大肠癌和正常黏膜组织中ABCG2mRNA的阳性表达率分别为58.8%和0(P<0.05)。大肠癌组织中ABCG2mRNA的阳性表达率与患者的性别、年龄、肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移情况、Duke's分期等均无关(P均>0.05),与分化程度有关(P<0.05)。结论:ABCG2的表达可以作为判断大肠癌分化程度及预测化疗效果的指标之一。

ABCG2在人绒毛膜癌耐药细胞株中的表达研究

目的:研究多药耐药基因ABCG2在人绒毛膜癌亲本细胞株(JEG-3)及耐药细胞株(JEG-3/VP16)中的表达情况,探讨ABCG2在绒毛膜癌耐药性中所起的作用。方法:用逆转录聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)检测ABCG2的mRNA表达,用蛋白质印迹法(Western blot)检测ABCG2的蛋白质水平的表达,并采用流式细胞技术测试出两种细胞株中ABCG2阳性细胞的比例。结果:RT-PCR和Western blot结果显示:在JEG-3细胞及JEG-3/VP16细胞中均可检测到ABCG2 mRNA和蛋白的表达,但JEG-3/VP16细胞中ABCG2 mRNA的表达(1.74±0.07)和蛋白的表达(1.13±0.09)水平要明显高于JEG-3细胞(0.86±0.06和0.64±0.05),差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞检测结果示:ABCG2在JEG-3/VP16细胞中的阳性表达率(50.66±3.82)%要明显高于在JEG-3细胞中的阳性表达率(14.78±1.02)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:ABCG2在耐药性人绒毛膜癌细胞株JEG-3/VP16中高表达,提示ABCG2可能参与了绒毛膜癌的耐药机制。

ABCG2在乳腺癌及癌旁组织中的表达及临床相关性研究

目的研究ATP结合盒转运体基因2(ABCG2)在乳腺癌及癌旁组织中的表达并探讨其与临床病理特征的相关性。方法收集经手术治疗并有明确病理诊断的初治乳腺浸润性导管癌患者的石蜡标本共112例,进行免疫组织化学检测ABCG2的表达情况,分析其与临床病理特征的相关性。结果 ABCG2在乳腺癌组织的表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05),在乳腺癌组中的表达率为51.8%,其表达情况与腋淋巴结转移、临床分期有关(P<0.05),与月经状况、年龄、脉管癌栓、肿瘤大小、雌激素受体、孕激素受体及HER2-2表达等无关(P>0.05)。结论 ABCG2在乳腺癌组织的表达高于癌旁组织,ABCG2+与乳腺癌细胞的生长、转移有关。

ATP结合盒转运体A1基因多态性与2型糖尿病及肥胖的相关性

目的研究上海地区汉族人群中,ATP结合盒转运体A1(ABCA1)基因位点rs2020927的单核苷酸多态性与2型糖尿病(T2DM)及肥胖发病的相关性。方法选取上海地区无亲缘关系的T2DM患者440例,根据体质量指数(BM I)分为肥胖组(n=252,BM I>25 kg/m2)和正常体质量组(n=188,BM I<25 kg/m2);另选取正常对照者315例。采用等位基因特异的实时PCR,对ABCA1基因位点rs2020927进行基因分型,并通过相关和Logistic回归分析,研究该位点与T2DM及肥胖的相关性。结果ABCA1基因rs2020927位点基因型频率在不同组间有显著性差异(P=0.001),其中AA、AG、GG基因型频率在对照组人群中分别为43.8%、35.9%和20.3%;在正常体质量的T2DM组中分别为33%、53.2%和13.8%;在肥胖的T2DM组中分别为40.9%、47.2%和11.9%。基因型GG在T2DM肥胖组和对照组中有显著性差异(P=0.009),而T2DM正常体质量组和对照组之间无显著性差异(P>0.05)。结论中国上海汉族人群中,ABCA1基因多态性位点rs2020927可能与T2DM及肥胖的发病相关。

家蚕新的卵色相关基因Bmwh2的克隆及组织表达与功能研究

腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter,ABC转运蛋白)是古老而庞大的家族,广泛分布于从细菌到人类各种生物体中,主要利用ATP水解释放的能量实现多种底物的跨膜主动转运。通过RT-PCR扩增、克隆测序了家蚕ABC转运子Bmwh2完整的开放阅读框。用生物信息学方法分析发现,Bmwh2有14个外显子和13个内含子,编码689个氨基酸残基,分子质量77.38 kD,等电点8.42;Bmwh2含有1个核苷酸结合结构域和6个α螺旋构成的跨膜结构域,为半转运子,属于家蚕ABC转运子超家族G亚族成员。利用半定量RT-PCR方法分析Bmwh2在家蚕5龄第3天幼虫不同组织的表达水平,以精巢中的相对表达量最高。用合成的siRNA显微注射胚胎发育时期的蚕卵,对Bmwh2进行干涉研究,获得了白卵和嵌合体的干涉表型。根据实验结果,推测Bmwh2可能参与家蚕浆液膜色素前体的转运。

小鼠CD45^-/CD31^+肺侧群细胞诱导分化的研究

目的探讨在体外诱导分化肺侧群细胞(SP)的特性。方法取小鼠肺组织,流式细胞术分选小鼠白细胞分化抗原(CD)45^-/CD31^+肺SP;免疫荧光检测分选肺SP三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺SP中ABCG2、酪氨酸激酶2(Tie2)及血管性血友病因子(vWF)的表达。细胞体外分化诱导14 d后,免疫荧光检测细胞vWF的表达;RT-PCR检测分化诱导前后细胞中ABCG2和vWF的表达。结果流式细胞术成功分选出CD45^-/CD31^+肺SP细胞,免疫荧光检测其表达ABCG2;RT-PCR检测SP表达ABCG2和Tie2,不表达vWF。主群细胞表达vWF;分化诱导前的肺SP表达ABCG2;分化诱导后的肺SP表达vWF。结论 CD45^-/CD31^+肺SP是血管内皮细胞的祖细胞,具有干细胞分化特性。在体外培养可分化为血管内皮细胞。

ABCA1基因R219K多态性与2型糖尿病合并冠心病患者脂代谢特性的关系

目的研究血脂组分及其比值与2型糖尿病(T2DM)合并冠心病(CHD)发病风险的关系,及其与ATP结合盒转运体-A1(ABCA1)基因R219K多态性的关联,探讨T2DM合并CHD的风险因子。方法用PCR-RFLP方法分析正常人群(Con组)、T2DM患者(T2DM组)和T2DM合并CHD患者(T2DM+CHD组)ABCA1基因R219K多态性,对比各组血脂组分水平以及不同组分的比值变化,分析ABCA1基因R219K多态性和血脂变化与T2DM合并CHD发病的关系。结果 (1)Con组、T2DM组和T2DM+CHD组的等位基因K频率分别为42.4%、39.7%和31.7%,三组KK基因型频率分别为19.3%、15.4%和5.6%,其中T2DM+CHD组等位基因K和基因型KK频率均显著低于其他两组(P<0.05)。(2)基因型KK者血浆HDL-C水平显著高于RK和RR者(P<0.05),而TG水平显著低于RK和RR者(P<0.05)。(3)T2DM+CHD组LDL-C/HDL-C比值显著升高(P<0.05),但T2DM组与Con组间无统计学差异。结论血脂组分比值可真实地反映T2DM合并CHD的风险。三种基因型中,KK纯合子能有效降低LDL-C/HDL-C比值,从而降低T2DM合并CHD的风险。

三阴性乳腺癌组织CaSR和ABCG2表达临床意义研究

目的钙敏感受体(calcium sensing receptor,CaSR)和三磷酸腺苷结合盒转运体基因2(ATP binding cassette transporter gene 2,ABCG2)与多种恶性肿瘤的发生、发展及预后密切相关,但关于两者与三阴性乳腺癌(thriple-negative breast cancer,TNBC)的关系少见报道。本研究旨在探讨CaSR和ABCG2在TNBC组织中的表达,分析评价其在TNBC高度恶性生物行为及临床预后的判断价值。方法收集2009-02-10-2011-12-30韶关学院医学院附属医院普通外科(67例)和韶关市第一人民医院乳腺外科(199例)收治的经病理确诊的乳腺癌患者266例为研究对象,其中62例(23.3%)TNBC患者为研究组,204例(76.7%)非三阴性乳腺癌(non-TNBC)患者为对照组,应用免疫组化SP法检测两组患者癌组织中CaSR、ABCG2阳性表达率。结果研究组CaSR、ABCG2阳性表达率(80.6%,71.0%)明显高于对照组(63.7%,52.5%),χ~2值分别为6.222和6.623,P值分别为0.013和0.010;研究组中CaSR、ABCG2阳性表达与患者的年龄、月经状态、肿瘤大小、病理分级及脉管癌栓等无明显关系,而与淋巴结转移、病理类型及TNM分期密切相关,P<0.05。Kaplan-Meier生存分析显示,在TNBC患者癌组织中CaSR、ABCG2阳性表达者中位生存期和累计生存率均低于阴性表达者,差异有统计学意义,Log-rank=28.881,P<0.001;Log-rank=41.657,P<0.001。结论 CaSR和ABCG2表达与TMBC的侵袭、恶性程度及淋巴结转移相关;CaSR和ABCG2可能成为TNBC患者预后判断的预测指标。

癫痫患者ABCC2基因多态性与丙戊酸钠血药浓度、疗效的相关性分析

目的:探究癫痫患者ATP结合盒式家族C成员2(ABCC2)基因多态性与丙戊酸钠血药浓度、药效的关系,为癫痫临床治疗提供参考。方法:收集佳木斯大学附属第一医院137例癫痫患者血液样本,高效液相色谱(HPLC)法检测丙戊酸钠血药浓度,限制性片段长度多态性-聚合酶链式反应检测ABCC2基因位点rs717620、rs3740066基因型,对比位点不同基因分型患者标准化血药浓度以及临床疗效差异。结果:rs717620、rs3740066存在单核苷酸多态性,均为野生型纯合子CC型、突变杂合子CT型、突变纯合子TT型。rs717620、rs3740066基因多态性基因型频率分布符合Hardy-weinberg定律。rs717620基因型CC型患者标准化血药浓度、血药剂量、临床有效率高于基因型CT、TT型以及CT+TT型(P <0. 05)。rs3740066基因型CC型患者标准化血药浓度、血药剂量、临床有效率高于基因型CT、TT型以及CT+TT型(P <0. 05)。结论:ABCC2基因rs717620、rs3740066位点基因多态性与丙戊酸钠血药浓度、临床疗效有关,此两处位点发生突变可能导致血药浓度降低、疗效下降。

安氏隐孢子虫ABC2基因的克隆表达与营养物质转运

为探究安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni)ATP结合盒转运蛋白基因(CaABC2)对营养物质的转运功能,以安氏隐孢子虫基因组作为模板,设计合成CaABC2基因特异性引物,进行PCR扩增,获得CaABC2基因。将克隆的重组质粒CaABC2基因与真核表达质粒pEGFP-C1双酶切后再连接,构建重组真核质粒载体pEGFP-C1-CaABC2;再采用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-C1-CaABC2转入小鼠肠上皮细胞(Intestinal epithelial cells,IEC),检测不同组IEC细胞对总胆固醇、还原型谷胱甘肽、葡萄糖和碱性磷酸酶的转运效果。结果表明:扩增出778bp的CaABC2基因,测序分析与预期片段大小一致;重组真核质粒载体pEGFP-C1-CaABC2转染小鼠IEC细胞后,观察到转染后的对照组和转染组IEC有绿色荧光;检测到在细胞内液中,转染组、对照组和空白组的总胆固醇浓度分别为15.99±0.12、11.80±0.35和12.43±0.16 mmol/L;还原型谷胱甘肽浓度分别为15.24±0.44、10.48±0.35和11.04±0.75mmol/L;在细胞外液中,转染组、对照组和空白组的总胆固醇浓度分别10.67±0.17、14.82±0.06和15.84±0.17 mmol/L;还原型谷胱甘肽浓度分别为10.20±0.79、14.60±0.45和15.60±2.50mmol/L。转染组总胆固醇、还原型谷胱甘肽浓度均显著大于空白组和对照组(P<0.05),而在细胞外液中,转染组总胆固醇、还原型谷胱甘肽的浓度均显著小于空白组和对照组(P<0.05)。在细胞内液和外液中,空白组与对照组总胆固醇、还原型谷胱甘肽的浓度之间均未见显著性差异(P>0.05);转染组、对照组和空白组之间的葡萄糖和碱性磷酸酶浓度均没有统计学差异(P>0.05)。CaABC2基因具有协助转运总胆固醇、还原型谷胱甘肽、葡萄糖和碱性磷酸酶的作用,其中转运总胆固醇效果最为明显。