靶向ATP6L的RNA干扰抑制乳腺癌细胞的体外侵袭能力

目的:通过靶向ATP6L的RNA干扰抑制质子泵的功能,检测MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭情况。方法:采用有效ATP6L干扰片段及干扰对照分别转染MCF-7/ADR细胞,通过荧光分光光度计检测BCECF与细胞分泌上清孵育后在不同激发光激发后发射的荧光量;用实时荧光定量PCR检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达情况;用明胶酶谱方法检测细胞分泌上清中的MMP-2活性;用细胞侵袭实验(Transwell)检测细胞体外侵袭能力。结果:在MCF-7/ADR细胞中,下调ATP6L基因的表达可以使细胞的泌H+能力减弱;细胞中MMP-2表达水平无变化;细胞分泌上清中的MMP-2活性减弱;细胞的体外侵袭能力下降。结论:靶向ATP6L的RNA干扰可抑制质子泵的功能,从而抑制MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭能力。

ATP6L对人肝癌细胞HCCLM3侵袭能力的影响及其机制

目的观察ATP6L表达变化对人肝癌细胞HCCLM3侵袭能力等肿瘤生物学特性的影响，并探讨其作用机制。方法构建ATP6L-RNAi真核表达载体ATP6L-sh与阴性对照载体Con-sh，并分别转染至HCCLM3细胞，建立稳定干扰ATP6L的细胞株和阴性对照细胞株，通过细胞侵袭实验（Transwell）检测人肝癌细胞HCCLM3的体外侵袭能力变化，通过Westernblot实验、明胶酶谱测定、原位荧光酶谱测定等实验技术，检测ATP6L—sh和Con—sh两株细胞ATP6L蛋白表达水平、上清液基质金属蛋白酶（MMP）-2的活性以及胞内组织蛋白酶B（CathepsinB）活性的变化。结果与阴性对照细胞株比较，稳定干扰ATP6L表达的ATP6L-sh细胞株ATP6L蛋白表达水平明显下调，体外侵袭能力明显减弱。ATP6L—sh细胞与对照细胞分泌上清液中MMP-2活性分别为1．81±0．18、18．40±1．26（P〈0．05）；细胞内CathepsinB活性分别为228．6±21．1、471．7±21．4（P〈0．05），活性均明显降低。结论ATP6L在肿瘤侵袭过程中发挥重要作用，抑制ATP6L蛋白表达可有效降低肝癌细胞HCCLM3的侵袭能力，ATP6L蛋白对肿瘤细胞侵袭能力的影响可能与调控MMP-2和CathepsinB活性有关。