新型维甲酸衍生物ATPR体外诱导消化系统肿瘤细胞分化的研究

目的观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)对胃癌细胞株SGC-7901、肝癌细胞株BEL-7402、结肠癌细胞株HT-29的生长和分化的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,检测细胞的生长抑制率;分光光度法检测胃癌细胞分化标志酶碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)活性和肝癌细胞分化标志酶LDH、谷酰转肽酶(γ-GT)活性;酶联免疫法检测肝癌细胞标志物甲胎蛋白(AFP)和结肠癌细胞标志物癌胚抗原(CEA)水平;流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果 ATPR呈浓度依赖性抑制肿瘤细胞增殖;并使SGC-7901中ALP、LDH活性下降,BEL-7402中AFP、LDH、γ-GT水平下降,HT-29中CEA水平升高;G0/G1期细胞表达量增加,细胞周期进程受影响,细胞阻滞在G0/G1期。结论 ATPR对上述三种实体瘤细胞株具有诱导分化的作用。

新型维甲酸衍生物ATPR对肿瘤细胞株SKOV3增殖及分化的影响

目的:探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluorometh-yl-phenyl retinate,ATPR)对卵巢癌SKOV3细胞的增殖及分化作用。方法:ATPR作用于细胞株SKOV3后,MTT法检测细胞的增殖;吉姆萨染色法在倒置相差显微镜下观察加药处理前后细胞形态学变化;ELISA法检测卵巢癌标志物糖链抗原125(CA125);流式细胞术检测细胞周期的变化情况。结果:ATPR呈浓度依赖性抑制SK-OV3细胞增殖,明显抑制作用出现在药物作用48h,但在72h后则更显著;倒置显微镜下观察发现细胞形态学趋于成熟分化;SKOV3中CA125水平下降;流式细胞仪测定G0/G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,细胞周期进程受影响,细胞阻滞在G0/G1期。结论:ATPR对SKOV3细胞具有抑制增殖和一定的诱导分化作用。

ATPR对ECA-109、PANC-1、HeLa细胞增殖及分化的影响

背景与目的:由于全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)存在一些不良反应,使得其进一步的临床应用受到了限制。目前,寻找具有更好疗效的维甲酸衍生物已成为研究热点。该研究旨在观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对食管癌细胞株ECA-109、胰腺癌细胞株PANC-1、宫颈癌细胞株HeLa生长和分化的影响。方法:采用MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪测定细胞周期的变化;酶联免疫吸符实验(ELISA)检测食管癌细胞分化指标鳞状上皮癌相关抗原SCC-Ag活性、胰腺癌细胞标志物CA199和宫颈癌细胞标志物CA125水平。结果:ATPR能够抑制肿瘤细胞增殖;并使G0/G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,细胞阻滞在G0/G1期;ECA-109中SCC-Ag活性下降,PANC-1中CA199和HeLa中CA125水平下降。结论:ATPR对上述3种实体瘤细胞株具有不同程度的诱导分化作用。

基于转录组测序的ATPR诱导NB4细胞分化过程中lncRNA的初步鉴定与分析

目的为了探究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)诱导人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞分化的潜在作用机制。方法分别用ATPR和全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化,然后用基因芯片技术对处理后的细胞进行长链非编码RNA(lncRNA)和mRNA表达谱分析。结果与ATRA组比较,有775个lncRNA和904个mRNA在ATPR组被筛选出,且顺式调控基因分析了一些关键lncRNA的染色体定位。反式分析结果表明相关转录因子能调节lncRNA的表达。结论lncRNA在ATPR诱导NB4细胞分化过程中起到重要的调节作用。

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对K562细胞分化和细胞周期的影响

目的本研究探讨新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对K562细胞株的抑制增殖和诱导分化活性并对其机制进行研究。方法ATPR作用于K562细胞3d后,通过MTT法检测细胞的增殖,NBT还原实验法分析细胞的分化指标,瑞氏染色法在油镜下观察加药前后细胞形态学变化,FCM检测分析细胞周期,RT-PCR法检测cyclinE、cyclinD1、CDK2、CDK4、CDK6、p21cip1、p27kip1、p57kip2和PCNA mRNA的变化情况。Western blot法检测cyclin D1和CDK4蛋白表达的改变。结果ATPR呈浓度依赖性抑制K562细胞增殖的作用。ATPR诱导分化活性表现为NBT阳性细胞率增加,油镜下观察K562细胞有分化成熟的改变,G0/G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,呈G1期阻滞。RT-PCR检测发现cyclin E、cyclin D1、CDK2、CDK4、CDK6表达减少,PC-NA、P21cip1、P27kip1改变不明显,P57kip2表达增加。Western blot检测cyclin D1和CDK4蛋白表达减少。结论ATPR有较强的抑制K562细胞增殖并诱导其分化的活性,并通过上调P57kip2的表达,抑制Cyclin-CDK激酶复合物,发挥细胞周期阻滞的作用。

HPLC法测定4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯原料药含量及有关物质

目的采用高效液相色谱法建立4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（ATPR）原料药质量控制的方法。方法色谱柱为大连伊利特Hypersil ODS 2柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-水（92：8）,检测波长为367 nm,柱温为30℃,流速约为1.0 ml·min-1。结果主峰能与相邻杂质峰较好地分离,ATPR浓度在0.5~20 mg·L-1范围内线性关系良好（r=0.999 9,n=6）。结论该法简便、准确、专属性好,可以用于ATPR原料药的含量及有关物质的测定。

两亲性氨基酸嵌段共聚物的合成、表征和载药性能

采用N-羧酸-α-氨基酸-环内酸酐开环聚合的方法合成两亲性氨基酸嵌段共聚物(苯丙氨酸-天冬氨酸共聚物,PPA-PAA),并以难溶性药物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)为模型药考察该聚合物的载药性能。采用FT-IR与1H NMR对合成的PPA-PAA结构进行表征,计算聚合度,采用芘荧光探针法测定两亲性氨基酸嵌段共聚物临界胶束浓度(CMC),动态光闪射法测定胶束粒径。结果 PPA-PAA的CMC为95 mg/L,形成胶束的粒径为235 nm,载药量和包封率分别为27.1%和74.1%。PPA-PAA有望成为难溶性药物的给药载体。

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人胃癌SGC-7901细胞的磷酸化蛋白质组学研究

目的研究观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)作用于胃癌SGC-7901细胞后蛋白质的磷酸化情况来了解ATPR诱导分化作用的可能机制和作用靶点。方法 ATPR作用于胃癌SGC7901细胞48 h后,收集并提取总蛋白,通过胰蛋白酶酶解,Ti O2磁珠法富集磷酸肽,高分辨率液质联用仪器检测磷酸肽,使用Proteome Discoverer1.2软件寻找差异的蛋白质和磷酸化位点,利用生物信息学网站和DAVID、KEGG、IPA软件,分析这些磷酸化蛋白质的功能及亚细胞定位等信息。结果最终鉴定出109个蛋白质,其中45个磷酸化蛋白质,共有121个磷酸化位点,差异蛋白中有15个仅出现在ATPR组,20个仅出现在正常组。DAVID分析结果显示差异磷酸化的蛋白质参与调控细胞进程、生物进程、基因表达、细胞的代谢过程等;KEGG分析结果显示差异磷酸化蛋白质主要有参与ERBB信号通路、RNA的转运、内质网蛋白加工过程、p53信号通路等。IPA软件分析一些差异蛋白质之间的关联蛋白是泛素连接酶(UBC)。结论 ATPR对胃癌细胞SGC-7901细胞诱导分化的机制可能是通过作用于多种蛋白质或基因,如肝癌衍生生长因子(HDGF)、钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)、ATP结合盒G亚族蛋白4(ABCG4)和腺苷酸环化酶关联蛋白1(CAP1)而发挥作用,并通过影响这些蛋白质的磷酸化从而实现ATPR对胃癌细胞的诱导分化作用。

RARβ沉默对4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯抗SGC-7901细胞增殖作用的影响

目的制备并筛选有效沉默SGC-7901细胞维甲酸受体β(RARβ)基因的最佳siRNA序列,观察RARβ靶向沉默对4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)抑制SGC-7901细胞增殖作用的影响。方法针对人RARβ全序列设计合成3条siRNA,以lipofectamine 2000(Lipo)为载体转染至SGC-7901细胞。转染后24、48 h应用RT-PCR和Western blot技术分别检测SGC-7901细胞内RARβ的mRNA和蛋白表达。选用最佳siRNA序列靶向沉默SGC-7901细胞RARβ后6 h加入AT-PR(终浓度为10-5mol.L-1),72 h后MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期动力学,分光光度法检测细胞裂解液中碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)活力的变化。结果靶向沉默SGC-7901细胞中RARβ基因的最佳序列为siRNA-RARβ-homo-466且在浓度为100 pm.L-1、与Lipo的比例为1∶0.05时沉默效果最佳。与未沉默的ATPR给药组比较,RARβ-homo-466序列转染沉默后ATPR(10-5mol.L-1)给药组SGC-7901细胞增殖活性升高,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多(P<0.01),ALP和LDH活力显著增强(P<0.05)。结论 siRNA-RARβ-homo-466可有效沉默RARβ基因的表达;RARβ沉默后,对ATPR敏感的SGC-7901细胞表现出ATPR抗性,提示RARβ可能是介导ATPR作用于SGC-7901细胞的主要环节。

移动对象数据库预测范围聚集查询技术研究

针对预测范围聚集查询处理技术,提出了一种面向移动对象的聚集TPR树索引。聚集TPR树索引在TPR树中间节点中加入移动对象聚集信息以减少预测范围聚集查询所需要的节点访问代价。并增加了一个建于移动对象标识上的哈希辅助索引结构以支持自底向上的删除搜索算法,具有很好的动态更新性能和并发性。提出了一种EPRA查询算法,采用更精确的剪枝搜索准则,大大减少了查询所需要访问的磁盘节点,具有良好的查询性能。

全反式维甲酸及其衍生物对乳腺癌细胞株MDA-MB-231凋亡的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)及其衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(ATPR)对人乳腺癌细胞MDAMB-231体外凋亡的影响。方法不同浓度ATRA及其衍生物ATPR分别处理MDA-MB-231细胞48 h后,Hoechst染色及流式细胞术检测细胞凋亡的变化,RT-PCR检测凋亡蛋白Caspase-3 mRNA水平的变化,Western blot法检测相关凋亡蛋白表达水平的变化。结果与ATRA相比,相同浓度的ATPR能明显促进MDA-MB-231细胞的凋亡,随着浓度的增加,凋亡作用越加显著(P<0.05)。RT-PCR显示ATPR作用后Caspase-3 mRNA水平显著上调(P<0.05)。Western blot法显示ATPR能下调抗凋亡蛋白Bcl-2、NF-κB、survivin的表达(P<0.05),上调促凋亡蛋白Bax、Grim-19、Caspase-3的表达(P<0.05)。结论 ATPR比ATRA更明显地促进人乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡。

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231诱导分化作用及可能的机制研究

目的观察4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-anino-2-trifluoromethyl-phenyl retimate,ATPR)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231抑制增殖诱导分化作用,探讨其可能的作用机制。方法体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,MTT检测细胞增殖,绘制细胞生长曲线,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态变化,酶联免疫法检测粘蛋白MUC-1活性,流式细胞术检测细胞周期,实时荧光定量PCR法和Western blot法检测维甲酸受体(retinoic acid receptors,RAR)RARα、RARβ、RARγ和维甲类受体(retinoid X receptors,RXR)RXRα、RXRβ、RXRγ基因和蛋白的表达。结果 ATPR能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,具有浓度-时间依赖性,染色后镜下观察MDA-MB-231细胞生长密度降低,形态趋于正常。ELISA结果显示,ATPR作用后明显降低MDA-MB-231细胞培养上清中MUC-1的浓度;流式细胞术结果显示,MDA-MB-231细胞中G0/G1期表达量增加,S期表达量减少,细胞阻滞在G0/G1期比例增加。q-RT-PCR和Western blot结果显示,ATPR作用后,RARγ的mRNA和蛋白表达水平降低,RXRs mRNA和蛋白水平无明显变化。结论 ATPR可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖并诱导其分化,其机制可能与RARγ的表达有关。

全反式视黄酸衍生物逆转高水平胰岛素对胃癌细胞BGC-823迁移的作用研究

目的探讨高水平胰岛素条件下全反式视黄酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基-苯基-维甲酸酯(ATPR)对人胃癌细胞BGC-823迁移能力的影响及其潜在的分子机制。方法首先采用不同浓度胰岛素刺激BGC-823细胞,CCK-8法检测胰岛素对细胞增殖能力的影响;然后采用等同人高胰岛素血症水平(≥0.5 ng/ml)而对BGC-823增殖能力没有影响的胰岛素剂量(<10.0 ng/ml),联合ATPR处理BGC-823细胞后,通过细胞划痕实验和Transwell实验明确BGC-823细胞迁移能力的改变;Western blot检测与细胞迁移能力相关蛋白的表达水平。结果CCK-8结果显示,与对照组比较,0.5、5.0 ng/ml胰岛素作用48 h后对BGC-823细胞的增殖无影响,而10.0 ng/ml胰岛素能够促进BGC-823细胞增殖;细胞划痕和Transwell实验显示,5.0 ng/ml胰岛素明显促进BGC-823细胞的迁移能力;但是,联合ATPR后能够抑制胰岛素对BGC-823迁移的促进作用,作用与肌球蛋白轻链激酶(MLCK)抑制剂ML-7类似;Western blot结果显示胰岛素促进MLCK蛋白表达且下调胃特异性紧密连接蛋白Claudin 18的表达,而ATPR联合处理后能抑制MLCK并促进Claudin 18蛋白的表达。结论ATPR可逆转高水平胰岛素对胃癌细胞BGC-823迁移的促进作用,可能与其抑制胰岛素对MLCK和Claudin 18的调控密切相关。

不同反应条件对星形聚苯乙烯制备的影响

采用原子转移自由基聚合(ATRP)法,以三羟甲基丙烷为核制备引发剂,以苯乙烯为单体合成三臂聚苯乙烯星形聚合物。通过红外光谱仪、核磁共振氢谱仪对聚合物的结构进行了表征。结果表明,已成功地合成出三臂聚苯乙烯星形聚合物。同时,聚合物的相对分子质量随反应时间的延长和单体浓度的增大而不断增长,呈现出"活性-可控"聚合特征。

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯对人白血病K562细胞的蛋白质组学研究

目的研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)诱导人白血病K562细胞分化作用的蛋白质组学机制。方法1×10-6mol·L-1的ATPR及ATRA分别作用于人白血病K562细胞48 h后,收集细胞并提取总蛋白,纯化之后使用胰蛋白酶酶解,固相萃取法脱盐,高分辨率液相色谱质谱联用仪检测肽段,使用Proteome Discoverer 1.2软件寻找出差异表达的蛋白质,利用生物信息学DAVID数据库、KEGG数据库、STRING数据库,分析鉴定出的差异蛋白质所具有的分子功能、所参与的生物学过程等信息。结果 ATPR组特异性的蛋白质鉴定出120个,ATRA组特异性蛋白质有143个,两者共有蛋白422个。DAVID分析显示ATPR特异性蛋白质主要参与39个生物学过程,包括蛋白质和大分子的代谢、蛋白质转运和定位等。KEGG分析发现,ATPR组特异性蛋白质主要参与新陈代谢过程、PI3K-Akt信号通路、TGF-β信号通路等其他癌症相关信号通路。STRING蛋白相互作用网络分析显示ATPR特异性蛋白质,如EIF3A、EIF6、RPL3、RPL8、RPL13、RPL7A、RPL21、RPS3、RPS14、NACA、BTF3、NHP2L1、PPP2CA蛋白与其他≥10个相关蛋白存在直接相互作用关系。结论 ATPR组特异性中心蛋白质均参与对细胞生长增殖、诱导细胞分化和凋亡等过程的调控,这些蛋白质间的相互作用网络及特异性中心蛋白质是ATPR诱导K562细胞分化作用的可能机制。

金属卟啉光敏剂对染料亚甲基橙的光降解的研究

卟啉是一种具有良好光敏性的特殊大环共轭芳香化合物。文章利用活性自由基聚合的方法,以不对称羟基金属卟啉为原料,合成出具有温度响应性聚合物修饰的金属卟啉光敏剂,并通过核磁谱图分析证实了目标产物的结构。又以其作为光催化降解光敏剂,降解有机污染物亚甲基橙。考察不同光降解反应条件下,卟啉聚合物在氧化剂H_2O_2存在下,可见光照射下降解率最佳。同时也考察了不同温度、分子量、pH对光催化降解的影响。