家兔线粒体ATPase6,8基因的遗传分析

测定了4个地方品种、7个培育品系和10个引进品种共124只家兔的线粒体ATPase6,8基因801bp序列。结果表明:124只家兔ATPase6,8基因的A、G、T、C4种碱基的含量分别为30.46%、10.74%、29.34%和29.46%,A+T含量(59.8%)明显高于G+C(40.2%);发现了9个变异位点,其中转换7个,颠换2个,没有发现缺失或插入,变异多发生在密码子的第3位,核苷酸多样度为0.0004,说明家兔线粒体DNA遗传差异较小;确定了5种单倍型,单倍型多样度为0.121,单倍型H5为所有品种的共享单倍型,大多数个体属此单倍型,这可能与家兔的连续定向选育有关,用邻接法构建的家兔分子系统发育树表明我国家兔起源于2个母系。

ATPase6,8在纳米氧化锌诱导HL-7702细胞线粒体能量代谢障碍中作用

目的分析ATPase6,8在纳米氧化锌(ZnO NP)诱导正常人肝细胞(HL-7702)线粒体氧化磷酸化能量代谢障碍中的作用,为ZnO NP疾病防控提供基础数据。方法透射电镜和马尔文粒径分析仪测定ZnO NP颗粒表征;ZnO NP染毒24 h后,3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二甲苯溴化四唑(MTT)法检测细胞活性及剂量选择;激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位改变;高效液相色谱法测定细胞内三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)的含量;紫外分光光度计检测线粒体呼吸链复合体Ⅴ(MRCCⅤ)活性;qRT-PCR检测ATPase6及ATPase8 mRNA表达量。结果 ZnO NP(2.5、5、10、20、40、80、160和320μg/mL)染毒24 h后,随着ZnO NP剂量增加,细胞存活率逐渐降低(r=-0.859,P<0.05),80、160、320μg/mL剂量组细胞存活率显著低于对照组(P<0.05),根据细胞存活率>70%,最终选择染毒剂量为0、2.5、10、40μg/mL;与对照组相比,10和40μg/mL剂量组红/绿色荧光比值明显减少(P<0.05),说明细胞线粒体膜电位(MMP)下降;同样40μg/mL剂量组细胞ATP、总腺普酸含量(TAN)、能荷值(EC)水平均明显下降,10~40μg/mL剂量组细胞AMP水平和2.5~40μg/mL剂量组细胞ATP/ADP水平也均明显下降(P<0.01);与对照组相比,2.5~40μg/mL剂量组细胞MRCCⅤ活性明显降低而ATPase6和ATPase8 mRNA表达水平均显著上升(P<0.01)。结论 ZnO NP能诱导HL-7702线粒体能量代谢障碍,可能是通过影响细胞线粒体ATPase6,8 mRNA的表达水平,进而引起MRCCⅤ活性降低及线粒体MMP下降,氧化磷酸化无法正常进行,ATP生成过程受到抑制,最终导致线粒体能量代谢障碍。

三磷酸腺苷合成酶6、8与早产新生大鼠高氧肺损伤的相关性

目的探讨线粒体呼吸链三磷酸腺苷合成酶6、8(ATPase6、8)与早产新生大鼠高氧肺损伤的关系。方法早产新生SD大鼠生后1 d随机分为空气组、高氧组。高氧组持续暴露于常压氧舱中,氧体积分数>850 mL/L;空气组置于同一室常压空气中。二组分别于实验后1、4、7、10和14 d提取其肺组织RNA,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ATPase6、8 mRNA表达。结果1.与空气组比较,高氧暴露1 d ATPase6 mRNA表达显著增强(P<0.05);4、7、10 d时无显著性差异(Pa>0.05);14 d又显著增强(P<0.01)。2.高氧组与空气组比较,ATPase8 mRNA表达于1、4、10 d时无显著改变(Pa>0.05);7、14 d时明显增强(Pa<0.05)。结论高体积分数氧暴露诱导线粒体呼吸链中ATPase6、8异常表达,这种变化可能参与早产新生大鼠高氧肺损伤的发病过程。