ATRA和雄黄对白血病细胞PML基因及蛋白表达的影响

目的探讨PML基因及蛋白在白血病细胞中的表达和细胞内分布定位。 方法经ATRA、雄黄处理后的NB4、HL - 60、K5 62细胞为研究对象 ,细胞形态学观察采用Wright s染色法及荧光染色法 ;PML蛋白细胞内分布定位采用免疫荧光技术 ;PMLmRNA表达采用RT -PCR法。 结果 1 ATRA处理后 ,NB4和HL - 60细胞形态学上出现分化表现 ,K5 62细胞无变化 ;经雄黄处理后 ,各组细胞形态学上均出现凋亡特征性改变。 2 ATRA处理后 ,NB4细胞内融合蛋白降解 ,PML蛋白恢复定位 ,HL - 60、K5 62细胞内PML蛋白定位分布无变化 ;雄黄处理后NB4细胞内融合蛋白降解 ,PML聚积于POD结构 ,随后降解 ;在HL - 60及K5 62细胞 ,PML发生相似改变。3 ATRA、雄黄处理后各组细胞PMLmRNA表达均无显著影响。 结论在不同诱导剂刺激下 ,PML基因在蛋白水平参与细胞终末分化及诱导白血病细胞凋亡机制 ;PML蛋白在POD中发挥诱导凋亡控制细胞生长的作用。

ATRA对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其机制研究

目的探讨全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对A549人肺腺癌细胞株增殖、细胞周期的影响及其可能的分子机制。方法ATRA处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并运用MTT法检测其生长抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,Western blot检测CDK4、Rb、p-ERK1/2蛋白的表达,荧光定量PCR法检测CyclinD1mRNA水平。结果ATRA具有抑制A549细胞增殖、使细胞周期阻滞于G0/G1期,并下调p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平的作用。结论ATRA可能通过下调A549细胞p-ERK1/2蛋白表达及CyclinD1mRNA水平,使细胞周期阻滞于G0/G1期,从而影响其DNA的合成,抑制其恶性增殖。

ATRA调节人异位子宫内膜间质细胞GJIC Connexin基因、蛋白的作用及意义

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人异位子宫内膜间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)、connexin基因、蛋白的调节作用及意义。方法:取24例子宫内膜异位症患者卵巢处异位内膜标本,分离纯化得到间质细胞,分别用0.1mmol/L、1mmol/L、10mmol/LATRA处理24h、48h、72h、96h、120h,同时设置空白对照组,采用荧光漂白后恢复技术检测异位内膜间质细胞的GJIC功能,并检测与GJIC功能密切相关的Cx43、Cx26、Cx32的基因及蛋白表达。结果:ATRA处理72h内,1mmol/L、10mmol/L组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能明显增强;0.1mmol/LATRA组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能无明显变化。未经ATRA处理的异位内膜间质细胞中无Cx43、Cx26、Cx32的mRNA及蛋白表达;经1mmol/LATRA处理后,异位内膜间质细胞中检测到Cx43mRNA和蛋白表达,但未见Cx26、Cx32的mRNA及蛋白表达。结论:ATRA能选择性地诱导Cx43基因及蛋白表达,从而有效上调异位内膜间质细胞的GJIC功能;ATRA可能是治疗子宫内膜异位症的潜在药物。

ATRA诱导结肠癌细胞株LoVo分化与凋亡

目的 体外研究维甲类化合物的衍生物ATRA对LoVo 结肠癌细胞株的作用。方法 观察ATRA作用下LoVo 细胞的增殖、细胞周期和凋亡。结果 ATRA使细胞增殖抑制,细胞阻滞于G0 /G1 期,高浓度组出现亚“G0/G1 ”峰。ALP比值增高,高浓度组电镜下见凋亡细胞,TDT法测凋亡细胞比例增高,但传6 代后不增加。结论 提示ATRA可诱导LoVo 细胞分化及凋亡,但有一定限度;实验结果为临床应用ATRA

ATRA联合Genistein对A549人肺腺癌细胞株MUC1表达及转移潜能的影响

目的MUC1是一种跨膜粘蛋白,在肿瘤进展过程中起重要作用,MUC1可作为多种肿瘤预后判断的有用标记,本实验探讨了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)联合三羟异黄酮(Genistein)对肺腺癌细胞MUC1蛋白、mRNA的表达及转移潜能的影响。方法ATRA、Genistein及两者联合处理人肺腺癌细胞株A549,免疫组化法检测MUC1蛋白的表达情况,荧光定量PCR法检测MUC1 mRNA的表达,根据细胞穿过铺有Matrigel胶多孔膜的数量检测细胞侵袭力。结果ATRA和Genistein联合处理A549肺癌细胞后,具有协同下调细胞MUC1蛋白、mRNA的表达,抑制A549细胞体外侵袭能力的作用。结论ATRA联合Genistein可能通过协同下调MUC1蛋白及mRNA的表达,从而抑制肺癌A549细胞的转移潜能。

ATRA联合Genistein对肺癌细胞凋亡及ICAM-1表达的影响

目的探讨ATRA联合Genistein对A549细胞凋亡及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法采用ATRA、Genistein单药及两者联合处理人肺腺癌细胞株A549,观察A549细胞生长情况并采用MTT法检测A549细胞的增殖抑制率,运用TUNEL法检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞表面ICAM-1的表达。结果A549肺癌细胞经ATRA、Genistein及两者联合处理后,细胞增殖明显受抑制,凋亡指数明显提高,ICAM-1表达明显下调;其中以两者联合用药最为显著。结论ATRA联合Genistein能协同抑制A549细胞的增殖、促进细胞的凋亡,并可能下调ICAM-1的表达,进而降低肺癌细胞转移的潜能。

抗癌药5-FU联合α-IFN与ATRA对SACC-83细胞株作用的研究

目的:探讨诱导分化剂联合抗代谢药物对人涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞的作用效能，寻找治疗SACC的新途径。方法：应用全反式维甲酸(ATRA)、α-干扰素(α-IFN)和5-氟尿嘧啶(5-FU)，分别以单用、双用和联用对涎腺腺样囊性癌-83(SACC-83)细胞株作用，用MTT法、软琼脂集落形成、BrdU掺入法和形态学观察的方法观察细胞的形态和功能变化。结果：①随着单用、双用和联用，SACC细胞的抑制率逐渐升高、平板克隆形成率逐渐下降、DNA合成受抑制。②癌细胞异型性逐渐消失，成熟细胞特征逐渐增多。③药物作用后细胞凋亡现象明显，可见大量凋亡小体。结论：3种药物联合使用时可对SACC细胞产生显著的抑制增殖、诱导分化和促凋亡作用。联合抗代谢药物诱导分化对SACC细胞有明显的抗肿瘤作用。

FAM及FAM辅加ATRA方案对胃癌术后患者疗效对比观察

目的对比观察FAM及FAM辅加ATRA方案对胃癌术后患者的疗效。方法将62例胃癌根治性手术(D2、D3)后患者随机分为FAM+ATRA组及FAM组。结果FAM+ATRA组术后第1、2、3年的肿瘤复发转移率分别为16.1%,38.7%和67.7%;FAM组分别为25.8%,54.8%和74.2%。术后FAM+ATRA组1、2、3年生存率分别为93.5%、74.2%和38.7%;FAM组分别为80.7%、61.3%和35.5%。2组术后第1、2年的肿瘤复发转移率和患者1、2年生存率比较均有显著性差异(P<0.05),2组术后第3年肿瘤复发转移率和患者3年生存率比较无显著性差异(P>0.05)。结论FAM辅加ATRA治疗能有效提高胃癌术后患者的近期疗效及1、2年生存率。

比较丹参酮ⅡA、ATRA和As_2O_3对NB_4细胞PML-RARα融合蛋白作用的规律

目的 :比较丹参酮ⅡA、ATRA和As2 O3 对NB4细胞PML -RARα融合蛋白作用的规律 ,探索TanⅡA降低PML -RARα融合蛋白水平的原因。方法 :药物作用 2 4、 72、 12 0h ,用间接免疫荧光方法检测PML -RARα融合蛋白的变化。结果TanⅡA影响NB4细胞PML -RARα荧光染色颗粒的规律与ATRA作用一致 ,与As2 O3 作用不一致。结论 :TanⅡA可能通过激活caspase裂解PML -RARα融合蛋白或通过PML -RARα融合蛋白中RARα的AF - 2部分而降解PML -RARα融合蛋白 ,致PML -RARα融合蛋白水平降低 ,NB4细胞分化。

中药辅助As_2O_3+ATRA双诱导治疗急性早幼粒细胞白血病4周的疗效观察

目的:观察中药辅助As2O3+ATRA双诱导治疗急性早幼粒细胞白血病4周的临床疗效。方法:回顾性分析22例确诊为急性早幼粒细胞白血病患者,其中治疗组12例,对照组10例,对照组行As2O3+ATRA双诱导治疗,治疗组在行双诱导治疗的基础上辅助以中医药治疗,并于治疗前后行血常规、骨髓涂片检查及临床症状评估。结果:经28天治疗后,两组患者的指标均较前改善,指标改善中药参与组更明显;同时考虑患者的症状改善情况,治疗组整体疗效较对照组更为显著,有效率高达91.6%。结论:中药辅助As2O3+ATRA双诱导治疗急性早幼粒细胞白血病4周后,较对照组更能改善患者外周血及骨髓的相关指标,同时改善患者症状,整体疗效满意。

ROZ与ATRA联合应用对MCF-7细胞诱导作用

研究PPARγ激动剂罗格列酮(ROZ)与全反式维甲酸(ATRA)联合应用诱导MCF-7细胞发生分化和凋亡的作用,阐述PPARγ激活后的抗肿瘤作用和机制.采用克隆原形成实验测定两化合物对MCF-7细胞存活率的影响;采用诱导分化实验测定两化合物对MCF-7细胞分化的影响;并进一步应用RT-PCR分析两化合物对MCF-7细胞相关基因表达的影响.集落形成实验显示,两化合物联合应用后,能明显抑制MCF-7细胞的生长.诱导分化实验表明,ROZ在低剂量时促进MCF-7细胞的分化,而随着剂量的增加,分化作用减弱,与ATRA联合应用后,同样在低剂量时促进MCF-7细胞分化,并且出现脂滴的细胞数增加,脂滴增大,在高剂量时,分化作用亦有所减弱.RT-PCR结果表明,在两化合物的作用下,MCF-7细胞中PPARγ的表达升高,并使MCF-7细胞中与凋亡相关基因的表达发生变化.ROZ与ATRA联合应用具有协同作用,激活PPARγ,抑制MCF-7细胞增殖,诱导MCF-7细胞发生分化.

HSP90β在ATRA诱导的白血病细胞株HL60耐药中的作用研究

目的:通过检测HSP90β基因在白血病细胞株HL60及其耐药株HL60/ATRA中的表达差异,探讨HSP90β基因在ATRA相关多药耐药性发生中的作用。方法:采用ATRA浓度递增及间歇诱导法建立HL60/ATRA耐药细胞株;用MTT法和流式细胞检测技术(Flow cytometry,FCM),分别检测HL60和HL60/ATRA细胞的增殖及细胞周期;RT-PCR、Western blot法检测HSP90β基因在HL60及HL60/ATRA细胞中的表达;通过MTT法检测HL60和HL60/ATRA细胞对常用化疗药物(VCR、CTX、VP-16、ADM)敏感性。结果:成功构建了白血病细胞耐药株HL60/ATRA;在mRNA和蛋白两个水平,均检测到HSP90β在耐药株HL60/ATRA中的表达较HL60明显增高(P<0.01);药敏结果显示HL60/ATRA细胞对VCR、CTX、ADM、VP-16的耐药倍数分别为10.74、5.51、4.01、3.24。结论:ATRA能够诱导HL60细胞中HSP90β高表达,经ATRA诱导后的HL60/ATRA细胞对抗癌药物的敏感性显著降低、耐药性增高,这提示HSP90β可能在ATRA相关多药耐药性的发生过程中发挥着重要作用。

ATRA对新城疫疫苗的体液免疫增强作用的研究

为了研究全反式维甲酸(ATRA)对新城疫疫苗的体液免疫增强效果,本试验选取1日龄AA肉鸡作为研究对象,低剂量组和高剂量组分别灌服1μmol/kg体重和5μmol/kg体重ATRA,在7日龄和28日龄时对药物对照组、低剂量组、高剂量组通过滴鼻、点眼的方法免疫新城疫疫苗。在7、14、21、28、35、42日龄和49日龄,每组随机取7只鸡,称重,采集胸腺、脾脏、腔上囊和血清,计算胸腺、脾脏和腔上囊免疫器官指数,利用血凝抑制(HI)试验检测血清中新城疫抗体效价。结果表明,ATRA可以促进雏鸡免疫器官生长,提高雏鸡免疫器官指数和新城疫抗体效价,表明ATRA可以增强雏鸡的体液免疫应答,且5μg/kg体重剂量ATRA对新城疫疫苗的体液免疫增强效果更显著。

ATO与ATRA联合小剂量HHT治疗急性早幼粒细胞白血病的临床疗效

目的探讨亚砷酸(ATO)、全反式维甲酸(ATRA)联合小剂量高三尖杉酯碱(HHT)治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)的临床疗效。方法按入院先后顺序,将48例APL患者随机分为观察组与对照组各24例。观察组先予ATRA+ATO+小剂量HHT诱导治疗,再以HA方案巩固治疗2个疗程;对照组先予ATRA+ATO+柔红霉素(DNR)诱导治疗,再以DA方案巩固治疗2个疗程。比较两组的完全缓解率(CR)、达CR时间、骨髓PML/RARa融合基因转阴率、不良反应、成分输血及住院费用等情况。结果观察组的CR、达CR时间及PML/RARa融合基因转阴率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组诱导期间败血症发生率低于对照组,输血小板量和平均住院费用少于对照组,组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 ATRA、ATO联合小剂量HHT治疗初诊APL效果确切,并发症发生率低,治疗费用少,具有重要临床应用价值。

蟾蜍灵联合ATRA诱导HL-60细胞分化并上调Syk表达

目的:观察低剂量蟾蜍灵、全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)单药或联合应用对HL-60细胞增殖及分化的影响,同时检测上游通路Syk表达的变化。方法:流式细胞仪技术检测CD11b表达;West-ern Blot检测Syk和Tubulin表达。结果:与对照组相比,低剂量蟾蜍灵、ATRA或联合用药不同程度地抑制HL-60细胞增殖,同时蟾蜍灵联合ATRA以时间依赖性的方式诱导HL-60细胞分化,并伴有Syk表达上调,但是Syk的酪氨酸磷酸化并未受影响。结论:Syk表达上调可能参与调节低剂量蟾蜍灵联合ATRA对HL-60细胞的分化诱导作用。

甲胎蛋白抑制PTEN活性导致肝癌细胞耐受ATRA诱导的凋亡的研究

目的研究分析甲胎蛋白对PTEN活性产生抑制引起肝癌细胞耐受ATRA发生凋亡。方法选取2012年11月一2013年11月期间本院诊治36例肝癌患者，将患者术后肝癌细胞制成标本。结果人体肝癌HepG2与Bel7402细胞均存在PTEN表达，经160μmol／L的ATRA处理24h后可加强这些细胞的PTEN的表达。Co—IP技术实验得知甲胎蛋白可与PTEN相结合，最终对ATRA产生影响。结论肝癌细胞中表达的甲胎蛋白可与PTEN相结合，最终发现AFP为肝癌细胞耐受ATRA的重要因子。

ATRA抑制血管成形术后血管平滑肌细胞增殖机制的研究进展

损伤血管平滑肌细胞的过度增殖是经皮腔内冠状动脉成形术及支架置入术后再狭窄的主要病理机制之一 ,近年来研究发现全反式维甲酸对离体培养及在体损伤的血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用 ,为血管成形术后再狭窄的防治提供了一种可能的方法。

ATRA、bFGF对成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的作用

目的 :体外探讨ATRA和bFGF对成人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞作用。方法 :采用Ficoll paque(1 0 77g/ml)分离液从骨髓分离出人骨髓间充质干细胞 ,体外扩增 ,以bFGF/ATRA为诱导剂 ,再加入BME、BHA、DMSO ,诱导期间观察细胞形态、数目的变化 ,并通过免疫细胞化学鉴定神经元烯醇化酶、神经丝蛋白、胶质纤维酸性蛋白的表达情况。结果 :免疫细胞化学显示在此诱导条件下 80 %的细胞表达NSE ,86 %的细胞表达NF M。结论 :ATRA和bFGF能诱导MSCs分化为神经元样细胞 。

ATRA诱导神经母细胞瘤细胞分化及TrkB表达的研究

通过对神经母细胞瘤 (ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ,ＮＢ)细胞系ＳＭＳ ＫＣＮＲ的体外实验 ,探讨全反式维甲酸 (ＡＴＲＡ)对ＮＢ细胞增殖抑制的可能分子机制及ＢＤＮＦ(脑源性神经营养因子 ) ＴｒｋＢ信号转导途径在ＮＢ细胞分化中的作用。通过台盼蓝拒染计数活细胞 ;用倒置相差显微镜观察加药处理前后细胞形态学变化 ;通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交来分析ＴｒｋＢ基因表达情况的改变。结果 :5μＭＡＴＲＡ抑制ＮＢ细胞系ＳＭＳ ＫＣＮＲ细胞增殖 ,而 5ｎＭＡＴＲＡ无此作用 ;ＡＴＲＡ可诱导ＳＭＳ ＫＣＮＲ细胞分化成熟 ;细胞分化过程中伴随ＴｒｋＢ基因表达水平增高。结果显示 :5μＭＡＴＲＡ对人ＮＢ细胞系ＭＳＭ ＫＣＮＲ细胞的体外增殖有抑制作用 ;ＡＴＲＡ能诱导人ＮＢ细胞系ＳＭＳ ＫＣＮＲ细胞分化成熟 ;ＴｒｋＢ基因表达水平的增高可能是ＡＴＲＡ体外诱导ＮＢ细胞分化逆转的分子生物学机制之一。