AURKA在肺腺癌中的表达及其临床意义的研究

目的 研究AURKA在肺腺癌中的表达及其临床意义。方法 回顾性收集2020年6月-2022年6月期间于湖北民族大学附属荆门市第一人民医院胸外科接受手术治疗的68例肺腺癌患者的手术标本,包括癌组织和癌旁组织。采用生物信息学技术分析,实时荧光定量PCR(qPCR)、Western Blot和免疫组化染色验证相结合的方法,分别检测并比较肺腺癌与癌旁组织、正常支气管粘膜上皮细胞与肺腺癌细胞株AURKA mRNA及其蛋白的表达丰度;分析肺腺癌组织中AURKA表达水平与患者临床特征的关系;并探讨AURKA在肺腺癌发生发展中的作用及其潜在的机制。结果 肺腺癌组织中AURKA的表达量显著高于其癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.01);且AURKA表达量与肺腺癌TNM分期、病理分化程度以及淋巴结转移相关,差异有统计学意义(P<0.05);AURKA通过影响AURKA/PLK1信号轴,调控肺腺癌细胞增殖、侵袭,促进肺腺癌的发生与发展。结论 AURKA在肺腺癌的发生和发展过程中发挥着重要作用,可作为肺腺癌患者预后及复发的预测指标,并可能成为肺腺癌治疗的潜在靶点。

整合生物信息学分析AURKA基因在宫颈癌中的表达及临床意义

目的 筛选宫颈癌组织中差异表达的基因,分析其与宫颈癌预后间的关系,得出其作为宫颈癌预后评估新标志物的可能性。方法 从GEO数据库获取宫颈癌和正常宫颈组织的转录组测序结果的数据。通过在线GEO2R工具分析得到宫颈癌和正常宫颈组织中的差异表达基因。用“仙桃学术”进行GO和KEGG分析。基于String网站和Cytoscape软件构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络并筛选出枢纽基因。通过Kaplan-Meier和Cox单因素回归分析枢纽基因对患者总生存期(OS)和无复发生存期(RFS)的影响及与其临床特征的关联。通过在线数据库GEPIA database,the Human Protein Atlas和临床样本进行枢纽基因表达的验证。采用受试者工作特征(ROC)曲线来评估枢纽基因表达水平对区分宫颈癌组织和正常宫颈组织的可行性。结果 在公共数据集中得到79个差异表达基因,有30个基因表达上调,49个基因表达下调。富集分析显示,AURKA基因主要参与“细胞周期”、“孕酮介导的卵细胞成熟”和“铂耐药性”等通路。蛋白质相互作用网络及枢纽基因生存分析得出AURKA基因的高表达与宫颈癌患者总生存期及无复发生存期较短显著相关(P<0.05)。通过数据库及临床样本进一步验证得出AURKA基因的mRNA和蛋白在宫颈癌中表达显著上调且无种族人群差异。ROC结果显示曲线下面积(AUC)为0.999,表明AURKA基因表达水平对宫颈癌具有较高的预测价值。结论 宫颈癌组织中AURKA mRNA和蛋白表达上调,则宫颈癌患者的总生存期和无复发生存期均缩短,AURKA基因具有作为宫颈癌预后评估标志物及靶点的潜在可能。

阔叶十大功劳作用于AURKA调控铁死亡干预肝癌的作用

探索阔叶十大功劳Mahonia bealei调控铁死亡干预肝癌的机制.从GEO数据库下载肝癌的转录组数据集,从FerrDb数据库下载铁死亡相关基因,使用TCMSP、SymMap、SwissTargetPrediction数据库获取M.bealei的成分与靶点;使用DS BIOVIA Discovery Studio 2016 v16.1软件进行分子对接;运用Cytoscape软件及STRING平台,对药物-疾病-铁死亡交集靶点进行PPI分析;利用GEPIA、TIMER数据库进行差异表达分析;利用UALCAN数据库进行临床相关性分析;利用Kaplan-Meier Plotter数据库进行生存分析;使用THPA数据库进行病理学切片分析;使用Western blot进行体外实验验证;最后,进行转录因子的预测,共筛选出5个M.bealei调控铁死亡干预肝癌的关键基因,通过基因差异表达选取3个核心基因AKR1C3、AKR1C1、AURKA,进一步分析发现AURKA与肝癌生存分析、临床参数、病理学结果均显著相关.Western blot实验证实,与HepG2肝癌细胞组相比,M.bealei含药血清组的AURKA蛋白表达上调(P<0.05).通过以上研究认为M.bealei可通过作用于AURKA调控铁死亡而干预肝癌.

AURKA T91A多态性与新疆维、汉民族乳腺癌易感性的关联研究

目的探讨AURKA T91A基因多态性在维、汉民族乳腺癌中的分布的差异与乳腺癌易感性的关系。方法应用PCR-RFLP检测192例维吾尔族女性乳腺癌患者、200例健康者及254例汉族女性乳腺癌患者及200例健康者AURKA T91A位点多态性,分析该位点多态性与新疆维、汉民族乳腺癌易感性之间的关系。结果在病例组及对照组中,不同基因型及等位基因频率在维、汉两民族中分布的差异均具有统计学意义。维吾尔族组中,携带A等位基因的人群较携带T等位基因的人群患乳腺癌的风险减低(OR=0.740,95%CI=0.558-0.982,P=0.037)。汉族乳腺癌组中,AA vs.TT、AA vs.(TT+TA)、TT vs.(TA+AA)3种遗传模型都没有显示出增加患乳腺癌的风险。结论 AURKA T91A位点多态性与新疆维吾尔族乳腺癌易感性相关,T等位基因为易感基因,可作为新疆维吾尔族女性乳腺癌患病风险因子。

干扰AURKA基因表达对人骨肉瘤细胞系U2-OS细胞增殖与细胞周期的影响

目的 :探讨AURKA基因表达下调对骨肉瘤细胞增殖和细胞周期分布的影响。方法:脂质体瞬时转染法介导AURKA小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)处理骨肉瘤U2-OS细胞,采用实时荧光定量PCR及Western blot方法检测转染前后AURKA mRNA和蛋白表达,CCK8实验检测细胞活力变化,流式细胞术检测细胞周期分布变化,Western blot检测周期相关蛋白的表达,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)细胞增殖实验检测细胞增殖情况。结果:AURKA siRNA作用U2-OS细胞后,AURKA mRNA和蛋白的表达水平较正常对照组及阴性对照组显著降低,且差异有统计学意义(P<0.05),两对照组间AURKA表达无明显差异;下调AURKA表达后,细胞活力降低,且作用72 h后抑制率最高,约为(36.63±2.38)%;细胞周期中S期细胞比例下降,G2/M期细胞比例增加,与正常对照组及阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),提示存在G2/M期阻滞,S期细胞增殖率下降(P<0.05),周期相关蛋白D1(Cyclin D1)表达水平下降(P<0.05),周期相关蛋白B1(Cyclin B1)表达水平明显增加(P<0.05)。结论:下调AURKA表达可抑制骨肉瘤细胞U2-OS的增殖,同时导致细胞阻滞于G2/M期。

miR-124通过靶向调控AURKA抑制胶质瘤细胞的增殖

目的:探索miR-124及AURKA对胶质瘤细胞增殖能力的影响并探索其机制。方法:通过PCR测定胶质瘤组织及非肿瘤组织中miR-124、AURKA的表达水平;将携带miR-124的脂质体miR-124 mimic、空载体miR-124转染入胶质瘤细胞系LN-229和T98G中,吸光度观察miR-124对胶质瘤细胞系LN-229和T98G增殖的影响;通过Targetscan软件预测miR-124靶基因,Luciferase报告检测miR-124与AURKA的结合位点,通过实时定量PCR方法检测转染miR-124后AURKA基因的变化。结果:与非胶质瘤组织比较,miR-124在胶质瘤组织中表达下降,MTT实验提示miR-124高表达组胶质瘤细胞增殖能力减弱;miR-124低表达组胶质瘤细胞增殖增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。Targetscan软件提示AURKA可能为miR-124靶基因,Western blot及荧光素酶实验提示与阴性对照组相比,miR-124高表达组内AURKA表达下降,相反miR-124低表达组内AURKA表达增加。结论:miR-124在胶质瘤细胞及组织中表达下调,并且可能通过调控AURKA影响胶质瘤细胞增殖及侵袭能力。

人AURKA基因RNA干扰慢病毒载体的构建及其对A549细胞增殖的影响

目的:针对AURKA基因构建RNA干扰重组慢病毒质粒并进行慢病毒包装,初步探讨AURKA基因的功能。方法:应用p GCLV-GFP慢病毒载体构建针对AURKA的shRNA载体,转染包装293T细胞,收集病毒上清液,转染肺腺癌细胞株A549。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况确定转染效率,应用Western blot技术检测AURKA基因在蛋白水平表达的变化,以明确RNAi的抑制率。应用Brd U法分析干扰AURKA前后A549细胞增殖情况的变化,运用克隆形成实验检测干扰AURKA后A549细胞株对长春新碱敏感性的变化。结果:针对AURKA基因的RNAi慢病毒表达载体构建成功,PCR和DNA测序鉴定实验表明插入位点与干扰片断的碱基序列完全正确。在293T细胞中进行慢病毒包装,获得高滴度病毒上清液。通过重组慢病毒载体将AURKA shRNA转导入A549细胞中,转染效率为100%。Western blot检测证实LV-AURKA慢病毒显著抑制AURKA的表达,Brd U检测显示AURKA基因表达下调抑制了A549细胞的增殖。克隆形成实验表明AURKA基因表达增强A549细胞对长春新碱的敏感性。结论:慢病毒载体介导的靶向AURKA的RNA干扰可有效抑制AURKA表达,降低肺腺癌A549细胞的增殖能力,并且增强A549细胞对长春新碱的敏感性。

AURKA蛋白激酶在三阴乳腺癌干细胞形成血管拟态中的实验研究

目的:探讨AURKA蛋白激酶在三阴乳腺癌干细胞形成血管拟态中的作用。方法:用无血清悬浮培养法从三阴乳腺癌细胞MDA-MB-231分离获得干细胞,RT-PCR检测干细胞转录因子c-myc、sox-2的表达状态;三维培养观察干细胞形成血管能力;Western blot检测AURKA蛋白激酶在干细胞和常规培养细胞的表达;利用干细胞进行三维培养并加入AURKA蛋白激酶抑制剂观察对成血管能力的影响。结果:(1)利用干细胞无血清悬浮培养可获得MDA-MB-231干细胞,其干细胞转录因子c-myc、sox-2表达高于常规培养细胞。(2)AURKA蛋白激酶在乳腺癌干细胞球中较常规培养细胞表达升高。(3)干细胞三维培养可形成血管管道,加入AURKA蛋白激酶抑制剂后成血管能力减弱。结论:AURKA蛋白激酶可促进三阴乳腺癌干细胞形成血管拟态,抑制其表达能减弱形成血管拟态能力。

Relationship between expression of Aurka and clinicopathological characteristics in gastric cancer patients

The aim of the study was to clarify the role of Aurka in the process of formation and development of gastric cancer. The expression of Aurka in gastric cancer and corresponding non-cancerous gastric tissues of 52 gastric cancer patients was assessed with the real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) and immunohistochemistry. We also analyzed the relationship between the expression level and clinicopathological characteristics. Aurka gene and protein expression in gastric cancer tissues in both cases were significantly higher than in corresponding non-cancerous gastric tissues (both P < 0.01), but no significant relationship was found with clinicopathological parameters including tumor location, depth of invasion, differentiation, lymph node metastasis, stage, gender, age and carcinoembryonic antigen (CEA), and carbohydrate antigen 19-9 (CA19-9) level in peripheral blood preoperation of patients (P > 0.05, respectively). Furthermore, Aurka gene expression was markedly higher in gastric cancer tissues of Helicobacter pylori (HP)-positive patients than negative ones (P < 0.05). The result of the study showed that Aurka might play a significant role in the process of formation and development of gastric cancer as an oncogene. Its effect might be strengthened by HP infection.

AURKA基因在口腔鳞癌中的表达及意义

目的检测极光激酶A(AURKA)基因在口腔鳞癌中的表达及意义。方法收集20例口腔正常组织及42例口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织,采用Real-Time PCR检测AURKA基因在不同口腔组织中的表达。结果 AURKA mRNA在OSCC中高表达,且不同分化程度,不同临床分期,组间差异有统计学意义。不同年龄,不同性别,组间差异无统计学意义。结论 AURKA在OSCC中高表达,AURKA作为激酶可能直接或间接地激活多种致癌蛋白或使多种抑癌蛋白失活,从而推动肿瘤的发生发展。

AURKA调控肿瘤顺铂耐药机制

顺铂作为一线化疗药物广泛应用于多种肿瘤中,其耐药性的出现为临床诊疗带来极大的困扰,亟需探索新的机制改善耐药从而提高疗效。近年的研究表明,极光激酶A(aurora kinase A,AURKA)与肿瘤恶性行为密切相关,并可调控顺铂的耐药机制。AURKA不仅通过抑制细胞凋亡,还通过诱导自噬、上皮-间质转化、调节细胞糖代谢等多方面诱导顺铂耐药抗性产生,靶向调控AURKA有潜在逆转顺铂耐药的作用。本文通过更全面的阐述AURKA调节顺铂耐药的机制,希望为靶向AURKA逆转顺铂耐药提供更加可靠的理论依据。

Aurka在胃癌组织中的表达及其与临床病理学特征关系的研究

目的研究胃癌和癌旁组织中Aurka mRNA及其蛋白的表达,并分析胃癌组织中Aurka mRNA表达水平与患者临床病理学特征的关系。方法回顾性收集2011年4月至2013年9月期间于川北医学院附属医院胃肠外科接受手术的198例胃癌患者的手术标本,包括癌组织和癌旁组织。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学染色法分别检测胃癌和癌旁组织中Aurka mRNA及其蛋白的表达,并进行比较;同时探讨胃癌组织中Aurka mRNA表达水平与患者临床病理学特征的关系。结果 RT-PCR结果显示,胃癌组织与癌旁组织中Aurka mRNA的表达水平分别为16.62±1.85和7.10±1.59,癌组织较高,差异有统计学意义(t=-38.58,P<0.05);免疫组织化学染色结果显示,胃癌组织中Aurka蛋白的表达阳性率高于癌旁组织〔93.9%(186/198)比16.2%(32/198),P<0.01〕。胃癌组织中Aurka mRNA的表达水平与性别、年龄、肿瘤位置、术前癌胚抗原(CEA)和CA19-9表达均无关(P>0.05),而与肿瘤TNM分期、T分期、N分期及分化程度均有关(P<0.05)。幽门螺杆菌(HP)阳性患者胃癌组织中Aurka mRNA的表达水平为15.38±1.73,高于HP阴性患者(7.20±1.86),差异有统计学意义(t=-3.74,P<0.01)。结论 Aurka基因及其蛋白在胃癌组织中的表达水平均高于癌旁组织,提示其作为一种致癌基因,在胃癌的发生和发展过程中扮演着重要角色,可作为胃癌患者预后及复发的预测指标。

恶性黑色素瘤组织AURKA表达对细胞增殖和迁移的影响

目的探讨极光激酶A(AURKA)在恶性黑色素瘤组织中的表达以及对黑色素瘤细胞增殖、凋亡以及迁移的影响。方法收集2018-01-01-2021-01-01在宁夏医科大学总医院病理科储存的30例原位及转移性黑色素瘤组织,免疫组织化学法检测AURKA在正常皮肤组织、原位以及转移性黑色素瘤组织中的表达水平。分别选用来源于同一患者的原位黑色素瘤细胞WM115及转移性黑色素瘤细胞WM266-4,通过小干扰RNA(siRNA)干扰AURKA表达,将细胞分为阴性对照组(si-NC)和AURKA干扰组(si-AURKA#1、si-AURKA#2和si-AURKA#3)。进一步应用CCK8、划痕以及侵袭实验检测AURKA敲低后对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,同时流式细胞术检测其对2种细胞凋亡和周期的影响。采用单因素方差分析法比较各组间差异,2组间比较采用t检验。结果AURKA在皮肤恶性黑色素瘤组织中呈现高表达。转染si-AURKA后WM115细胞si-NC、si-AURKA#1、si-AURKA#2、si-AURKA#3各组AURKA蛋白相对表达量分别为0.911±0.031、0.515±0.117、0.575±0.095和0.512±0.059,差异有统计学意义,F=16.09,P<0.01;WM266-4细胞si-NC、si-AURKA#1、si-AURKA#2、si-AURKA#3各组AURKA蛋白相对表达量分别为0.912±0.071、0.481±0.077、0.494±0.077和0.456±0.097,差异有统计学意义,F=31.19,P<0.01;其中转染si-AURKA#3组WM115以及WM266-4细胞AURKA的表达较si-NC组均降低,差异有统计学意义,均P<0.01。CCK8结果表明,敲低AURKA基因明显抑制了原位与转移性黑色素瘤细胞的增殖,差异有统计学意义,F_(WM115)=24.88,P_(WM115)<0.05;F_(WM266-4)=83.12,P_(WM266-4)<0.01。划痕实验表明,si-AURKA组划痕愈合率小于si-NC和Control组,差异有统计学意义,F_(WM115)=37.99,P_(WM115)<0.001;F_(WM266-4)=26.24,P_(WM266-4)<0.05。侵袭实验表明,si-AURKA处理后(WM115)、WM266-4细胞侵袭数明显少于si-NC和Control组,差异有统计学意义,F_(WM115)=16.20,P_(WM115)<0.01;F_(WM266-4)=6.97,P_(WM266-4)<0.05。细胞凋亡结果表明,WM115以及WM266-4细胞凋亡率si-AURKA组较Control和si-NC组明显增多,差异有统计学意义,F_(WM115)=117.30,F_(WM266-4)=37.77,均P<0.01。细胞周期实验检测表明,si-AURKA处理之后WM115、WM266-4细胞G_(2)/M期的细胞百分比较Control和si-NC组增多,差异有统计学意义,F_(WM115)=718.60,F_(WM266-4)=19.78,均P<0.01。结论AURKA在恶性黑色素瘤组织中高表达,敲低AURKA表达明显抑制原位以及转移性黑色素瘤细胞的增殖和迁移并阻滞细胞周期,提示其可能作为潜在评估指标,参与黑色素瘤的发生发展和转移。

数据库分析和验证AURKA为乳腺癌的主要生物标志物

筛选并分析乳腺癌的潜在的枢纽基因。方法 GEO数据库下载 5个乳腺癌基因表达数据集,筛选乳腺癌中的差异表达基因,绘制韦恩图;构建蛋白互作网络PPI,筛选TOP10枢纽基因;GO和KEGG通路分析枢纽基因的功能和通路。分子对接评估10个枢纽基因与刺芒柄花素的结合作用。QPCR检测AURKA在不同乳腺癌细胞株中的表达水平。QPCR检测刺芒柄花素处理后乳腺癌MDA-MB-231细胞中AURKA的表达水平。结果 筛选得到了157个差异基因,确定TOP10的枢纽基因;GO和KEGG通路分析结果显示,TOP10枢纽基因与细胞周期和有丝分裂密切相关,并且主要富集在AMPK信号通路上。分子对接结果显示AURKA结果最优。QPCR结果显示,以正常乳腺细胞MCF-10A为对照,AURKA在乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7、HCC-1937的表达水平明显上调。QPCR检测刺芒柄花素处理后MDA-MB-231细胞AURKA的表达显著降低。结论 生物信息学方法筛选可能参与乳腺癌发生发展的枢纽基因,AURKA可能是乳腺癌的主要生物标志物,刺芒柄花素可以下调乳腺癌细胞中AURKA的表达水平。

AURKA对肿瘤免疫影响的研究进展

AURKA是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,在细胞有丝分裂过程中发挥重要调控作用。AURKA的上调在人类恶性肿瘤中普遍存在。大量研究已经证实,AURKA作为一种癌基因,影响了众多肿瘤生物学过程,如增殖、基因组不稳定、非整倍体核型的产生和侵袭转移等。近年来,一些研究发现AURKA与肿瘤免疫之间也存在密切关联。人们对AURKA影响免疫反应的最初认识来源于其在免疫治疗中的应用。AURKA的抗原决定簇可以启动抗AURKA免疫反应,借以杀伤高表达AURKA的肿瘤细胞。另外,有研究发现抑制AURKA可以通过诱导细胞转化、T细胞活化和免疫细胞浸润而直接干预免疫反应。文章对AURKA参与免疫调控的相关发现进行了回顾和总结。

华蟾毒配基联合索拉非尼通过AURKA/Ras/Raf/ERK信号通路对肝癌Huh7细胞增殖与凋亡的影响

目的研究华蟾毒配基联合索拉非尼对肝癌Huh7细胞增殖与凋亡的影响及作用机制。方法 MTT法检测Huh7细胞增殖;Hoechst33342/PI荧光双染法检测Huh7细胞凋亡形态变化;流式细胞仪检测细胞周期;免疫细胞化学法检测Ki67蛋白表达;Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase-8、极光激酶A(AURKA)、Ras、Raf、细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p-ERK蛋白的表达变化。结果华蟾毒配基、索拉非尼及联合用药对Huh7细胞的增殖均有抑制作用,联合用药组的增殖抑制作用更明显,具有协同效应;荧光染色可见细胞凋亡形态变化;索拉非尼引起Huh7细胞周期S期阻滞,华蟾毒配基和联合用药引起Huh7细胞周期G2/M期阻滞,联合用药组G2/M期阻滞较单药组更明显;华蟾毒配基和索拉非尼均能减弱Ki67表达,联合用药组的作用更为显著;华蟾毒配基、索拉非尼及联合用药上调Bax和Caspase-8蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax/Bcl-2比例,对ERK蛋白表达无明显影响,显著下调AURKA、Ras、Raf和p-ERK蛋白表达,联合用药组的作用更为显著(P<0.05)。结论华蟾毒配基联合索拉非尼通过AURKA/Ras/Raf/ERK信号通路抑制肝癌Huh7细胞增殖,诱导其凋亡。

生物信息学鉴定前列腺癌枢纽基因

目的通过生物信息学手段识别前列腺癌(PC)驱动基因,鉴定具有诊断和预后价值的靶标。方法从GEO数据库下载PC表达芯片数据集,通过limma R包筛选差异表达基因(DEGs)。Metascape和GeneCards网站进行差异基因本体论(GO)生物学功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;STRING及CytoHubba构建DEGs蛋白互作(PPI)网络并筛选枢纽(Hub)基因。下载TCGA_GTEx-PRAD数据集,验证Hub基因表达差异及与临床变量的相关性。GEPIA网站纳入TCGA数据集进行生存分析及基因间相关性分析,构建受试者工作特征(ROC)曲线评估hub基因预测患者5年无病存活状态的效能。结果共鉴定出4个与诊断及预后相关的核心基因。其中TOP2A,AURKA和RRM2在癌组织中显著高表达,而COL4A6在癌组织中显著低表达(P<0.001),TOP2A,AURKA和RRM2高表达与PC患者较高Gleason评分、前列腺特异性抗原(PSA)水平、淋巴结转移率及较差的无病生存期(DFS)相关(P<0.05);COL4A6低表达与PC患者较低Gleason评分、PSA水平、淋巴结转移率及较差的DFS相关(P<0.05)。这些基因预测PC患者5年是否疾病特异性存活有一定的准确性。相关性分析表明TOP2A、AURKA和RRM2之间存在显著的正相关。GO和KEGG富集显示Hub基因主要参与细胞周期及有丝分裂通路。结论运用生物信息学方法识别出了4个具有临床意义的基因TOP2A、AURKA、RRM2和COL4A6,可能为预测前列腺癌患者生存预后及探究内在分子机制提供了重要理论依据。

AURKA对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡及药物敏感性的影响及其机制

目的探讨AURKA对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖、凋亡、周期改变及对药物敏感性的影响,并分析内在机制。方法人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266分别转染smart silencer NC(ssi-NC)和smart silencer AURKA(ssi-AURKA),分为ssi-NC组、ssi-AURKA组和空白组,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹实验检测3组细胞AURKA mRNA和AURKA蛋白相对表达量,细胞计数试剂盒8(CCK8)检测其细胞增殖活性,流式细胞术检测ssi-NC组、ssi-AURKA组细胞周期变化和凋亡率,CCK 8法检测其对硼替佐米和地塞米松的药物敏感性,蛋白质印迹实验检测Wnt信号通路相关因子及上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白表达。结果RPMI8226细胞ssi-AURKA组蛋白相对表达量为0.58±0.09,低于空白组(1.00±0.10)和ssi-NC组(1.00±0.09),F=20.84,P<0.001;U266细胞ssi-AURKA组蛋白相对表达量为0.57±0.07,低于空白组(1.00±0.04)和ssi-NC组(1.07±0.08),F=46.19,P<0.001。细胞增殖活性实验结果显示RPMI8226细胞空白组、ssi-NC组、ssi-AURKA组相对活性差异有统计学意义,F_(时间)=3966.12,P_(时间)<0.001;F_(组别)=363.15,P_(组别)<0.001;F_(时间×组别)=48.03,P_(时间×组别)<0.001。U266细胞空白组、ssi-NC组、ssi-AURKA组相对活性差异有统计学意义,F_(时间)=2452.32,P_(时间)<0.001;F_(组别)=236.91,P_(组别)<0.001;F_(时间×组别)=33.47,P_(时间×组别)<0.001。RPMI8226细胞和U266细胞中ssi-AURKA组S期均增加,t值分别为12.28和14.64,均P<0.001;G_(0)/G_(1)期均降低,t值分别为23.33和22.98,均P<0.001。RPMI8226细胞(t=16.23,P<0.001)和U266细胞(t=18.44,P<0.001)中,与ssi-NC组比较,ssi-AURKA组细胞总凋亡率增加。药物敏感性实验结果显示,RPMI8226细胞ssi-NC组、ssi-AURKA组、ssi-NC+B+D组、ssi-AURKA+B+D组细胞活性差异有统计学意义,F_(时间)=618.82,P_(时间)<0.001;F_(组别)=1373.51,P_(组别)<0.001;F_(时间×组别)=228.70,P_(时间×组别)<0.001。U266细胞ssi-NC组、ssi-AURKA组、ssi-NC+B+D组、ssi-AURKA+B+D组细胞活性差异有统计学意义,F_(时间)=617.83,P_(时间)<0.001;F_(组别)=1352.84,P_(组别)<0.001;F_(时间×组别)=155.81,P_(时间×组别)<0.001。蛋白质印迹实验结果显示,RPMI8226细胞中ssi-AURKA组E-cadherin表达升高,t=5.11,P=0.007;Vimentin、β-catenin和Wnt3A表达降低,t值分别为2.86、3.87和7.56,P值分别为0.046、0.018和0.002;U266细胞中ssi-AURKA组E-cadherin表达升高,t=10.02,P<0.001;Vimentin、β-catenin、Wnt3A表达降低,t值分别为3.71、2.82和3.30,P值分别为0.020、0.047和0.030。结论抑制AURKA表达可抑制MM细胞增殖,导致细胞周期的改变,诱导细胞凋亡,增加药物敏感性;AURKA可能通过Wnt/β-Catenin信号通路影响MM细胞EMT过程进而影响细胞增殖和凋亡。

P53对胚胎干细胞分化的影响及作用机制

P53是一种重要的肿瘤抑制基因,研究发现P53对胚胎干细胞(ESCs)的分化也有重要影响。P53与其下游靶点P21结合及ESCs的核仁蛋白缺失可上调P53,促使G1期延长,诱导ESCs走向分化;而高HIF-2α低P53状态及Aurka-P53信号轴可维持细胞干性,抑制分化。

极光激酶A在宫颈鳞状细胞癌患者血清中的表达及其临床意义

目的:应用生物信息学技术分析和筛选影响宫颈癌(CC)预后的关键基因并探讨极光激酶A(AURKA)在宫颈鳞状细胞癌(CSCC)中的表达及其临床意义。方法:从基因表达综合(GEO)数据库下载并分析CC患者的mRNA表达谱及临床数据,利用生物信息学技术筛选出CC组织与正常宫颈组织间的差异表达基因(DEGs)。PPI网络和生存分析结果显示AURKA基因的表达和CC分期及患者预后相关。利用GEPIA2、HPA数据库分别验证AURKA mRNA及蛋白在正常宫颈组织和不同病理分期CC组织中的表达情况。采用Kaplan-Meier法分析CC患者的AURKA基因高、低表达(以中位数为截断值)与生存期是否相关。随后进一步通过实时荧光定量PCR(qPCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)技术分别检测在CSCC、宫颈上皮内瘤变(CIN)和女性健康体检者血清中AURKA mRNA及蛋白的表达。结果:GEPIA2数据库分析结果显示AURKA mRNA在CC组织中高表达(P<0.05),且AURKA mRNA在CC不同阶段的表达水平存在显著差异(P<0.05),随着肿瘤分期的进展AURKA mRNA的表达升高。HPA数据库分析结果显示,与正常宫颈组织相比,AURKA蛋白表达水平在CC组织中亦升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,AURKA基因高表达的CC患者生存时间更短。qPCR和ELISA实验显示,CSCC和CIN患者血清AURKA mRNA的相对表达水平明显高于健康体检者(P<0.05)。CSCC患者血清AURKA蛋白的表达水平明显高于CIN及健康体检者(P<0.05)。AURKA mRNA及蛋白在CC血清中均高表达。ROC曲线及χ^(2)检验分析结果显示AURKA mRNA的诊断价值较高,血清AURKA mRNA高表达组患者FIGO分期、淋巴结转移、肿瘤体积及肌层浸润深度均分别高于AURKA mRNA低表达组(P<0.05)。结论:CSCC患者血清中AURKA mRNA及蛋白的表达水平升高,两者联合检测对CSCC的诊断及预后监测具有潜在应用价值。