人AWP1重组腺病毒的构建及其在人血管内皮细胞中的表达和定位

目的构建人flag-AWP1(associated with protein kinase C related kinase1)基因的重组腺病毒载体作为AWP1的转基因工具,研究AWP1在人血管内皮细胞ECV304中的表达与定位。方法将flag-AWP1基因亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV,经酶切鉴定正确后PmeⅠ线性化,转化至带有骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183中进行重组;经PacⅠ酶切鉴定和PCR鉴定、线性化后,用Lipofectamine转染293细胞进行包装、反复感染以获取高滴度重组病毒上清。再用获得的重组腺病毒Ad-flag-AWP1感染ECV304细胞,激光扫描共焦显微镜下观察AWP1在ECV304细胞中的表达与定位。结果包装病毒颗粒的PCR分析显示,成功获得了重组腺病毒Ad-flag-AWP1,该重组腺病毒能够高效感染ECV304细胞,并在激光扫描共焦显微镜下观察到AWP1在细胞内成功表达,且定位于细胞膜内侧。结论成功构建了flag-AWP1的重组腺病毒基因转染载体,AWP1在ECV304细胞中的表达与定位提示AWP1可能具有细胞信号转导因子的潜能,尚需进一步研究。

RFP-AWP1原核表达载体的构建及表达特性研究

目的:建立红RFP-AWP1融合基因的原核表达载体,研究其表达蛋白特性。方法:将克隆的人AWP1(associated with protein kinase Crelated kinase 1,AWP1)和水母的红色荧光蛋白(redfluorescence protein,RFP)的cD-NA插入到原核表达载体pET-17b的多克隆位点(mutiple clone sites,MCS)中,经AWP1 cDNA的PCR鉴定和E.coli DE3中的表达鉴定后,E.coli DE3表达AWP1-RFP融合蛋白,荧光显微镜观察其表达特性及与GST-beads的pull-down实验。结果:成功构建了载体pET-AWP1-DsRed1,在大肠杆菌中获得了高效表达的AWP1-RFP融合蛋白,其活菌液在荧光显微镜下呈火山熔岩状的亮红色,干固的细菌呈斑片状红色荧光;AWP1-RFP融合蛋白可与GST-beads结合,并在激发波长为508nm的条件下呈红色荧光,而在波长为488 nm激发光条件下可见橙黄色荧光。结论:在体外验证了AWP1-RFP融合蛋白具有可视性表达的特点,同时发现其能与GST-beads结合,为pull-down AWP1及其相关蛋白提供了一条新途径,为研究AWP1-RFP融合蛋白在真核细胞中的表达、定位及蛋白-蛋白相互作用等具有指导意义。

重组腺病毒介导的人AWP1基因转移对人源肝癌细胞增殖的影响

目的以重组腺病毒作为AWP1(associated with PRK1)的转基因载体,研究AWP1对人肝癌细胞增殖的影响,为进一步研究AWP1基因功能提供依据。方法重组腺病毒质粒pAd-flag-AWP1转染293细胞进行重组腺病毒的包装和扩增,并进行PCR鉴定。用空病毒Ad-Null和重组腺病毒Ad-flag-AWP1分别感染人源肝癌细胞SMMC-7721,并于感染后24 h、72 h、第5天和第7天收集细胞计数,绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间。结果重组腺病毒Ad-flag-AWP1能够感染SMMC-7721细胞;依据细胞生长曲线计算的SMMC-7721细胞倍增时间分别为:SMMC-7721细胞约为5 d;而Ad-Null感染后其生长被抑制,倍增时间约为6 d;Ad-flag-AWP1感染后,其倍增时间约为3 d。结论重组flag-AWP1腺病毒转染SMMC-7721细胞过表达的AWP1蛋白可能具有促进人肝癌细胞生长的作用。

AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录活性

AWP1含有A20样锌指蛋白结构域。在人乳腺文库中克隆了AWP1 cDNA序列。双荧光报告基因检测系统证明过表达AWP1抑制TNFα诱导的NF-κB转录激活,并且AWP1与TNFα受体复合物中的TRAF2、IKKγ存在外源相互作用,为AWP1抑制TNFα信号通路的机制研究提供线索。

12%苯醚甲·井冈AWP防治水稻纹枯病的效果试验

纹枯病是水稻生产中的常发性病害,目前常用药剂井冈霉素的防效呈下降趋势,笔者采用12%苯醚甲·井冈AWP进行了防效试验,结果表明,12%苯醚甲·井冈AWP可湿性粉剂30～40g/667m2在水稻纹枯病发病高峰期连续喷用3次,防效可达90%左右,较井冈霉素单剂持效期长。

旭化成AWP水洗版使印刷更具可持续性和高效性

旭化成是柔性感光印版研发的领军者,在柔性版领域有着很长的创新历史。旭化成最近与意大利Uteco集团一起,在其先进的印刷技术中心UtecoConverdome进行了印刷试验。试验目的是展示与常规溶剂版相比,使用旭化成AWP水洗版可以实现怎样的效率和环境效益。20多年来,

POV学技巧之在沙漠上玩转AwP

在中国CS界,狙击手有两个英文解释,一个是Sniper,另一个是AWPer。前者是正统的英文单词,后者是国内玩家对枪械的爱称。如果是咬文嚼字的话,笔者认为两者还是有区别的:后者像是由AWP而生,前者生来就是统治AWP的。看到后者更多联想到的是枪,而前者则易联想到人。这只是个充满圈套的绕口开头而已,不想让大家觉得每一个Sniper的局面都是那么稳重且沉闷。由于枪械的特质,决定了Sniper的攻击力和被攻击力同样超出一般步枪,这样就势必导致一个优秀的必需兼顾两种能力:防守与进攻。他们擅长待上几秒甚至几十秒,给予整张地图最大跨度地穿越控制;他们同样擅长稳健且精细地移动,用疯狂的瞄准镜搜索每一个即将毙命的敌人。

月光下的AWP

玩过CS的朋友想必都知道狙击手在整个战斗中的重要性。狙击手真正体现了现代战争稳、准、狠的特点(当然你要称职啊:)。如果队伍中有一个好的狙击手,那可真是一夫当关,万夫莫开。成为一名狙击手,枪法不够好的话是不行的,不光是用狙击枪的时候要沉着冷静,用手枪也要有3枪爆头的精准射击,否则你不可能在瞬息万变的战场上存活下来,还有就是不能成为一个“死狙”,也就是只会守在一个固定的点上狙击,这不是真正的高手所为。灵活地移动才能确保你有足够的机会射杀别人。狙击手的战斗意识如果想要充分的利用AWP的精准射击和强大的火力,必须要站在部队的中部或是前部才行,想要在这个位置站稳脚跟可是不容易,甩枪是一定要掌握的(具体的练习方法别处已有详细的介绍),还有就是狙击手最重要的素质,也就是战斗中的意识。 CS中两队交火正像两个足球队交锋,要想成为一个好的足球队员光有好的技巧是不够的,意识也是非常重要的一环,有了良好的意识才能正确地判断队友们的行动,才能打出绝妙的配合,这在CS的火拼中更是如此。

反恐精英AWP使用技巧

这回我们讨论的话题还是CS中著名的武器AWP(B46)，以前我们已经讨论过AWP的用法，这次就AWP在使用上的一些小技巧，或是一些你不知道的小窍门来做个大讨论。因此．就算你是AWP的使用高手．也不要错过我们的这次大讨论．它将使你更加全面地了解你手中这把CS中攻击力最强大的武器。

从POV学技巧之 dust2的AWP基本选位

本场给我们做AWP演示的是北美新一代的技术派领袖,coL战队的fRod,对于他的光辉历史我们无需多言,相信读者对他的熟悉不在我们之下。本期带来的POV来自于北美CEVO线上联赛,对阵双方分别是北美新兴势力coL,另一方是名气远大于实力的United5,United5一度实力被捧得很高,却在大型赛事中连连败北,而coL却通过良好的运营和不断升值的明星走到了北美CS俱乐部的前列。

人His-AWP1融合蛋白表达载体的构建及其在原核生物的表达

目的 获取人His-AWP1融合蛋白,为下阶段深入研究AWP1的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础 方法 应用逆转录聚合酶链反府(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞系中克隆AWP1 cDNA,并将其重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒DET-14b中。经酶节、序列鉴定,选择正确重组克隆,将其质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用Ni2+-NTA His柱纯化和SDS-PAGE分离蛋门。结果克隆到一个627 bp的AWP1 cDNA片段.重组质粒目的DNA测序正确.纯化出了一个分子量约为38 kD的融合蛋白。结论用基因工程方法在原核细胞表达并成功纯化出His-AWP融合蛋白。

人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒的快速构建及其鉴定

目的构建人的AWP1与红色荧光蛋白(RFP)融合基因的重组腺病毒载体,为研究AWP1的生物功能提供工具。方法将克隆的AWP1cDNA插入高效表达RFP的载体pDsRed1-N1的多克隆位点,与RFP序列形成AWP1-RFP融合基因,将该融合基因亚克隆到穿梭载体pAdTrack-CMV和pAdShuttle-CMV中;经酶切鉴定正确后PmeI线形化,与骨架质粒pAdEasy-1共转染大肠杆菌BJ5183以同源重组;用lipofectAMINE将PacI线形化的同源重组腺病毒载体转染293细胞以包装腺病毒;通过同源重组病毒载体和病毒颗粒基因组的DNA测序及PCR扩增和在293细胞中的表达鉴定重组腺病毒。结果同源重组载体和病毒颗粒的DNA测序和PCR分析显示AWP1cDNA序列正确,感染293细胞获得了AWP1-RFP融合蛋白的高效表达。结论成功构建和包装了人AWP1-RFP融合基因重组腺病毒。

视频处理芯片SAA7111AWP在高速视频采样系统中的应用

文章介绍了高速视频输入处理芯片SAA7111AWP功能及特点,同时较为详细地分析了基于IIC总线的SAA7111AWP与高速视频处理系统中的硬件和软件通信接口。

CS AWP使用小技巧

给大家介绍一个CS小技巧。很多朋友喜欢用AWP，因为它伴随着那一声巨响的一枪毙命实在是够Cool，但那蛤对手的远处时，若对手已经在眼前了，怎么办？掏手枪？掏枪也要时间，

CS AWP使用技巧与练习

当你手持AWP中距离面对手持M54A1或AK-47的敌人时你是否会紧张呢？这时再开镜瞄准肯定是来不及了．换手枪火力又不够……难到只有等死吗？不还有—条生路——盲狙！

波控CO_2焊短路过渡过程的计算机仿真及试验

提高CO2 焊工艺性能、减少飞溅的有效方法之一就是通过改进焊接电源设备 ,对电弧及熔滴过渡行为加以控制。本文在确定了短路过渡的合理的瞬时电流特征的基础上 ,提出了CO2 焊短路过渡过程的AWP (Adaptingweldingphysicsprocess)波形控制思想 ,利用MATLAB的仿真工具建立了数字仿真模型 ,并得出仿真波形。建立了试验系统 ,将仿真结果与试验结果相比较 ,两者的一致性很好 。

电渣熔铸空心环形件的热电场分析

借助ANSYS-SOLID69热电耦合单元,建立等同功率空心环形件在常规工况和大电流工况下电渣熔铸时金属熔池及铸锭区域、体系的热电场物理模型。以综合分解法对其进行热电场有限元模拟,以分析其金属熔池及电流电压的关系。结果表明:金属熔池最高温在渣金界面且都比渣池最高温低约200 K,为预防深金属熔池导致的缩松缺陷应避免在大电流工况下熔铸;电流集肤效应都很显著且通常在大电流工况下电流密度大,电流密度最大区域都在自耗电极端头或底水箱附近;电位线都在渣池内密集分布且伴有方向变化;空心环形件的金属熔池形状、体系电流与等电位线均呈现非对称分布,可增加内结晶器冷却强度以弱化金属熔池内倾斜倾向。

基于结构纹理分解的改进图像压缩算法

用等级树集合分区(set partitioning in hierarchical trees,SPIHT)压缩结构分量所产生的误差一般情况下能体现高振荡的特性,比较符合纹理特点,所以将这部分误差信号叠加在纹理分量中形成一个新的纹理源,利用小波包变换进行压缩,提出了一种改进的基于结构-纹理分解的图像压缩处理算法.理论分析表明这是分层压缩问题中一种普适的有效策略.从实验结果可以看出,这种处理方式相对于现有的结构纹理分解压缩的方式而言,始终具有一定的信噪比增益,相对于目前的JPEG2000压缩标准及单一的SPIHT、快速小波包变换(FWP)等算法具有一定的优越性.

卷积算子交换子的一个加权估计

利用Fourier变换估计，建立卷积算子交换子的一个加权L2有界性结果，并给出此结果的一些应用．

基于声传播算子的声源定位实验模拟方法研究

声传播算子是一种高效的时域声场计算方法,它能够很方便地计算出给定系统参数下任意时刻任意位置的声场变化情况,本文采用这种方法计算所得的二维房间声场信息进行传声器阵列的声源定位仿真实验。计算结果表明,用该方法获取的阵列数据能有效地应用于阵列信号处理算法中,准确地估计出初始高斯脉冲声源的方向。声传播算子声场计算方法能为传声器阵列声源定位的实验提供方便,使得传声器阵列声源定位算法在不同混响时间的鲁棒性实验研究变得更加简捷。