Two New Norditerpenoid Alkaloids from Aconitum spicatum Stapf

Two new norditerpenoid alkaloids, spicatine A (1) and spicatine B (2) were isolated from the root of Aconitum spicatum. The new compounds were deduced on the basis of their spectral data (IR, HREIMS, EIMS, 1D, 2D-NMR). This is the first whole report on the isolation of diterpenoid alkaloids from the A.spicatum Stapf.

基于网络毒理学与分子对接技术初步探究准噶尔乌头炮制减毒的作用机制

目的采用网络毒理学与分子对接技术初步探究准噶尔乌头炮制减毒的作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)、毒理学数据库(TOXNET)、反向药效团匹配数据库(Pharmmapper)和文献筛选准噶尔乌头的毒性成分和潜在靶点,乌头碱和准噶尔乌头碱为准噶尔乌头炮制前的主要成分,经炮制后乌头碱主要水解生成苯甲酰乌头原碱,准噶尔乌头碱结构稳定,未发生变化。比较毒理基因组学数据库(CTD)、疾病靶点筛选数据库(TTD)、疾病基因数据库(DisGeNET)、基因名片数据库(GeneCards)挖掘心脏毒性靶点。通过韦恩平台(Venny)获取准噶尔乌头心脏毒性的关键靶点,再从关键靶点中获取乌头碱、准噶尔乌头碱和苯甲酰乌头原碱的交集靶点。采用R软件对关键基因功能注释分析,运用Cytocape 3.7.2绘制准噶尔乌头-作用靶点关系网络图。辅以分子对接技术和心肌细胞H9c2对炮制前后主成分-准噶尔乌头碱、乌头碱和苯甲酰乌头原碱的心脏毒性进行验证。结果共得到准噶尔乌头毒性成分18个,关键靶点22个。草乌甲素、3-脱氧乌头碱、准噶尔乌头碱、乌头碱为准噶尔乌头的主要毒性成分,通过作用于丝裂原激活蛋白激酶1(MAPK1)、丝裂原激活蛋白激酶14(MAPK14)、血清白蛋白(ALB)等靶点,介导有丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、白细胞介素17(IL-17)信号通路、叉头框蛋白O(FoxO)信号通路等途径,诱发心脏毒性作用。分子对接验证了准噶尔乌头的主要毒性成分草乌甲素、乌拉尔宁、准噶尔乌头碱等,与ALB、MAPK1、胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)等靶点的结合潜能较好。心肌细胞实验结果显示乌头碱、准噶尔乌头碱和苯甲酰乌头原碱的IC_(50)分别为0.357、0.617、1.070 mg/mL,乳酸脱氢酶(LDH)释放量和细胞凋亡率均随药物浓度增加而升高(乌头碱>准噶尔乌头碱>苯甲酰乌头原碱),乌头碱的心脏毒性最大,大约是其水解产物苯甲酰乌头原碱的3倍。结论准噶尔乌头炮制品通过多成分多靶点多通路介导心脏毒性发生。准噶尔乌头经炮制后心脏毒性降低,减毒机制可能与调控纤溶酶原(PLG)靶点有关。

药用植物准噶尔乌头的研究

对准噶尔乌头的生物学特性，有效成分的鉴别、分高等方面进行了研究报道；从准噶尔乌头中首次分得12－表－欧马碱及12－表－脱氢欧乌碱，且准噶尔乌头碱、新乌碱含量较高，为准噶尔乌头药用资源的开发利用提供了依据。

新疆准噶尔乌头及其炮制品的急性毒性和镇痛作用实验研究

目的研究新疆准噶尔乌头生品及其炮制品的急性毒性和镇痛作用。方法对小鼠腹腔注射不同浓度的准噶尔乌头生品和3种炮制品水煎液,采用改进寇氏法获得准噶尔乌头及其炮制品对小鼠的半数致死量(LD50)。采用辐射热刺激法和醋酸致小鼠扭体实验,考察准噶尔乌头及其炮制品高、中、低不同剂量的镇痛活性。结果 (1)新疆准噶尔乌头生品及其炮制品毒性:生品>文献法>药典法>哈族法,新疆准噶尔乌头生品、药典法、文献法、哈族法炮制品的LD50分别为3.079 2、26.219 1、10.587 3、39.870 2g/kg。(2)与对照组相比,药典法、哈族法炮制品的低剂量组痛阈值无明显差异(P>0.05),镇痛效果弱;其余给药组的痛阈值增大(P<0.05～0.01),具有镇痛效果,能明显延长由小鼠辐射热刺激所引起的小鼠甩尾潜伏期。与盐酸曲马多组比较,准噶尔乌头生品及其各炮制品的高剂量组差异无统计学意义。(3)与对照组相比,盐酸曲马多组、生品、药典法炮制品、文献法炮制品的高剂量组与中剂量组以及哈族法炮制品的高剂量组均可以减少小鼠扭体次数(P<0.05～0.01),具有一定的镇痛作用。结论新疆准噶尔乌头生品及其炮制品具有一定的毒性,应引起临床用药的注意;同时,新疆准噶尔乌头生品及其炮制品具有不同程度的镇痛作用。

准噶尔乌头及其炮制品对AA大鼠治疗作用的实验研究

目的:观察准噶尔乌头及其炮制品对佐剂性关节炎(AA)大鼠的作用,并探讨其作用机制。方法:设正常对照组、模型对照组、阳性药对照组(醋酸泼尼松片6 mg/kg)、准噶尔乌头及其炮制品(包括按药典方法、文献方法、哈萨克族方法 3种炮制品)高、中、低剂量组(剂量分别为30.65,15.32,7.66 mg/kg);除正常对照组外,其余各组均采用弗氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠AA模型;各组于造模致炎当天灌胃给药,连续23 d;观察各药对AA大鼠踝关节足肿胀程度和关节炎指数的影响;采用ELISA法检测各组血清中白介素-1β(IL-1β)和皮质醇(Cort)含量。结果:(1)模型组大鼠踝关节足肿胀度高于正常组(P<0.01),与模型组比较,准噶尔乌头及其炮制品各给药组踝关节足肿胀度和关节炎指数均显著降低(P<0.01或P<0.05)。(2)与正常组比较,模型组大鼠血清IL-1β、Cort水平均高于正常组(P<0.01);与模型组比较,阳性组、准噶尔乌头生品高、中、低剂量组及药典法炮制品高、中剂量组和文献法炮制品高剂量组的大鼠血清Cort水平均降低(P<0.01);与模型组比较,阳性组、准噶尔乌头生品和药典法炮制品高、中、低剂量组及文献法炮制品高剂量组、哈萨克族法炮制品中剂量组的IL-1β水平均降低(P<0.01或P<0.05)。结论:准噶尔乌头及其炮制品具有抗炎作用,其机制可能是通过抑制炎症细胞因子IL-1β、Cort治疗佐剂性关节炎大鼠。

准噶尔乌头中4种生物碱在炮制过程中的含量变化

目的通过HPLC法测定准噶尔乌头Aconitum soongaricum Stapf.中4种生物碱的含有量,并研究其随炮制时间的变化。方法准噶尔乌头乙醚提取液的分析采用XBridge TM C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）;以甲醇-水-氯仿-三乙胺（67∶33∶2∶0.1）为流动相,等度洗脱;体积流量0.8 m L/min;检测波长235 nm;柱温40℃。加热水煮法炮制该药材,比较各生物碱含有量随炮制时间（0~255 min）的变化。结果准噶尔乌头碱、12-表-欧乌头碱、乌头碱、脱氧乌头碱平均含有量分别为1.111 3、1.980 2、6.562 6、0.270 9 mg/g。随着炮制时间增加,乌头碱相对峰高变化最显著,脱氧乌头碱逐渐消失,准噶尔乌头碱以和12-表-欧乌头碱较稳定。在18 min和25 min出现了新色谱峰,无明显变化规律。结论准噶尔乌头中上述4种生物碱经过加热水煮炮制后均发生了水解,可达到减毒效果。

HPLC法测定新疆准噶尔乌头中双酯型生物碱

目的采用高效液相色谱法测定新疆准噶尔乌头中双酯型生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱)。方法采用X Bridge C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水-三氯甲烷(浓氨水调节pH为10.62)(70∶30∶2)为流动相,体积流量为1.0 mL/min,进样量10μL,检测波长为235nm。结果准噶尔乌头中含有乌头碱、新乌头碱和次乌头碱,相对于已有法定药材标准的川乌药材而言,准噶尔乌头中乌头碱质量分数较高,新乌头碱和次乌头碱质量分数较低。结论准噶尔乌头中乌头碱质量分数较高,具有抗炎镇痛等药用价值,值得进一步深入研究。

准噶尔乌头二萜生物碱成分的研究

从准噶尔乌头（ＡｃｏｎｉｔｕｍｓｏｏｎｇａｒｉｃｕｍＳｔａｐｆ）的根中分离得到４个二萜生物碱成分，由各种光谱数据鉴定了它们的结构，分别是１２表欧乌碱（１２ｅｐｉｎａｐｅｌｉｎｅ，Ⅰ）、１２表脱氢欧乌碱（１２ｅｐｉｄｅｈｙｄｒｏｎａｐｅｌｉｎｅ，Ⅱ）、准噶尔乌头碱（ｓｏｎｇｏｒｉｎｅ，Ⅲ）和新乌碱（ｎｅｏｌｉｎｅ，Ⅳ）．其中，碱Ⅰ和碱Ⅱ系首次从该植物中得到．

HPLC和TLC法测定准噶尔乌头中的生物碱成分

采用高效液相色谱和薄层色谱对准噶尔乌头中生物碱进行分析,建立了HPLC法测定其中各生物碱含量的方法。结果确定准噶尔乌头中主要含有12-表-欧乌碱、宋果灵、尼奥灵、准噶尔碱和欧乌碱,其中准噶尔碱和欧乌碱为首次在该植物中发现;其疗效与川乌和草乌相近但化学成分差异较大。色谱条件为:Inertsil NH2柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相正己烷∶乙醇(92∶8),流速1.0 mL/min,检测波长270 nm,进样量10μL。本方法操作简便,结果可靠,重现性好,为准噶尔乌头的质量标准研究提供了实验依据。

甘青乌头总黄酮提取精制工艺研究

目的:优选甘青乌头总黄酮的提取精制工艺。方法:以总黄酮含量为检测指标,采用正交设计考察乙醇浓度、乙醇加入量、提取时间和提取次数对总黄酮提取率的影响,优选甘青乌头总黄酮的提取工艺;以总黄酮吸附量(mg/g)和解析率(%)为检测指标,考察D101、AB-8、X-5和XAD-16四种大孔吸附树脂对甘青乌头总黄酮的富集能力,优选树脂类型,并确定上样液浓度、上样流速、上样量、洗脱溶媒和洗脱流速等工艺参数。结果:甘青乌头总黄酮最佳提取精制工艺为:10倍量70%乙醇回流提取3次,每次提取1 h;优选XAD-16树脂精制甘青乌头总黄酮,最佳上样液浓度为8 mg/mL,上样量为112 mg/g干树脂,上样液pH值为5,上样流速为3 mL/min,最佳洗脱溶媒为70%乙醇,洗脱流速为5 mL/min;在最佳吸附解析条件下,甘青乌头总黄酮质量分数从4.39%提高到46.19%。结论:甘青乌头总黄酮提取精制工艺操作简单,结果可靠,可用于工业化生产。

准噶尔乌头中一株农作物致病菌拮抗菌的分离及鉴定

目的:从准噶尔乌头(Aconitum soongaricum Stapf)中分离具有抗农作物致病菌的内生菌,并对其进行系统鉴定。方法:采用研磨法从准噶尔乌头的根和叶等组织中分离内生菌;再通过琼脂扩散法筛选具有抗农作物致病菌活性的内生菌;利用传统的形态学观察、生理生化特征和16S rDNA序列分析对拮抗菌进行鉴定,并对其代谢产物做了生物碱和多糖的检测。结果:从准噶尔乌头中分离到菌株XJAS-ZB-36具有较好拮抗作用,分别对玉米大斑病菌、玉米小斑病菌、苹果斑点落叶病菌西瓜枯萎病、葡萄白腐病具有拮抗作用,经形态学观察和分子分类学分析鉴定与枯草芽孢杆菌(Bcillus subtilis)指标一致,与Bacillus subtilissub sp.subtilis NBRC137197(AB271744)处在同一分支,相似性为100%,G+Cmol%为33.4%。该菌株代谢产物中含有生物碱和胞外多糖。结论:从准噶尔乌头中分离到的内生细菌XJAS-ZB-36,可作为生物农药生产的候选菌株。

HPLC法测定新疆准噶尔乌头不同炮制品中单酯型生物碱的含量

目的建立新疆准噶尔乌头中单酯型生物碱的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)含量测定方法。方法采用X Bridge C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以四氢呋喃-乙腈(3∶5)为流动相A,以0.1mol/L醋酸铵溶液(每1 000mL加冰醋酸0.5mL)为流动相B,进行梯度洗脱,检测波长为235nm。结果准噶尔乌头分别按药典法、高压蒸法、加辅料法炮制后双酯型生物碱水解为苯甲酰乌头碱,炮制方法不同,单酯型生物碱的含量也有所不同,准噶尔乌头中苯甲酰乌头原碱的含量约为制川乌的2/5,准噶尔乌头药典法炮制品中苯甲酰乌头原碱的含量与制川乌相似,准噶尔乌头高压蒸法炮制品中苯甲酰乌头原碱的含量约为制川乌的3.4倍,准噶尔乌头加辅料法炮制品中苯甲酰乌头原碱的含量约为制川乌的1/2,3种炮制品中单酯型生物碱含量大小依次为高压蒸法炮制品>药典法炮制品>加辅料法炮制品。结论准噶尔乌头炮制品中单酯型生物碱的HPLC含量测定方法简便、可行,为进一步开发和利用奠定了基础。

宣威草乌根的二萜生物碱

从毛茛科植物宣威草乌(AconitumnagarumStapfvar.lasiandrumW.T.Wang)干燥块根的乙醇提取物中分离得到8个化合物,经理化常数测定和波谱学方法确定它们的化学结构,分别鉴定为β谷甾醇(Ⅰ)和7个去甲二萜生物碱:黄草乌碱甲(Ⅱ)、黄草乌碱乙(Ⅲ)、黄草乌碱丁(Ⅳ)、它拉胺(Ⅴ)、异它拉胺(Ⅵ)、展毛乌头宁(Ⅶ)和滇乌碱(Ⅷ)。以上化合物均为首次从该植物中得到,它们是乌头属化学分类学的特征性化合物。

藏药唐古特乌头中多糖的提取实验研究

采用正交试验考查了不同因素对藏药唐古特乌头中多糖提取量的影响。结果表明,藏药唐古特乌头中多糖的最佳提取工艺为:粉碎度8目,料液比1∶16,60℃回流提取5 h。

超声法提取藏药唐古特乌头中多糖的研究

采用L9(34)正交实验对藏药唐古特乌头中多糖的超声提取工艺进行了优化。以葡萄糖为标准品,用硫酸-苯酚法测定藏药唐古特乌头水提物中可溶性多糖的含量。得到了用超声法提取唐古特乌头中多糖的最佳工艺条件为:药材粒度8目、料液比(质量比)1∶16、提取时间2 h,此条件下提取液中多糖含量可达4.03%。研究结果表明该工艺稳定可行。

准噶尔乌头中一株苹果斑点落叶病菌拮抗菌的分离及鉴定

从准噶尔乌头(Aconitum soongaricum Stapf)的根茎中分离出1株对苹果斑点落叶病菌(Alternaria mali)有拮抗作用的内生菌XJAS-ZB-14,其主要生理生化指标与短小芽孢杆菌相符。利用16SrDNA通用引物对其基因组DNA进行扩增,并测序得到XJAS-ZB-14的部分16SrDNA序列,GenBank注册号为FJ237280。经Blastn比对,用软件MEGA4.0按照Neighbor-Joining方法构建16SrDNA系统发育树。与菌株XJAS-ZB-14同源性最高的菌株为Bacillus pumilus DSM27T(AY456263),相似性为100%,(G+C)mol%为53.41%,最终鉴定为短小芽孢杆菌Bacilluspumilus,并对其生长条件作了研究。

藏药唐古特乌头总生物碱的急性毒性及抗炎镇痛作用

目的:研究藏药唐古特乌头总生物碱(TAA)的急性毒性及抗炎镇痛作用。方法:采用灌胃和腹腔注射两种给药途径研究TAA的急性毒性;采用二甲苯致小鼠耳肿胀、琼脂肉芽肿两种炎症模型,考察TAA的抗炎作用;采用冰醋酸致小鼠扭体和热板致痛两种疼痛模型,观察TAA的镇痛作用。结果:TAA具有一定急性毒性,对二甲苯致小鼠耳肿胀和皮下琼脂肉芽肿两种炎症模型以及冰醋酸致小鼠扭体和热板致痛两种疼痛模型均有一定的抑制作用。结论:藏药唐古特乌头总生物碱具有抗炎镇痛作用,也具有一定的急性毒性。

毛果甘青乌头中生物碱成分的提取和鉴定

目的:分离纯化鉴定毛果甘青乌头中的生物碱成分。方法:药材室温下自然烘干后,粉粹,用酸提碱沉法提取总生物碱,然后用硅胶柱层析法分离得到单体生物碱,利用化学法和光谱法鉴定其结构。结果:分离鉴定得到了10个化合物的结构,其中有六个内酯型C19二萜生物碱、四个C20二萜生物碱。结论:得到了10个纯的单体生物碱。

基于特征图谱及主要成分含量比例特征鉴别制草乌及其伪品

基于特征图谱并根据主要成分含量比例特征,建立一种鉴别制草乌及其伪品的方法。采用Waters XBridge C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-四氢呋喃(体积比为25∶15)和0.1 mol/L乙酸铵水溶液为流动相,检测波长为235 nm,流量为1.0 mL/min,柱温为30℃,用高效液相色谱进行测定生物碱;采用ChemPattern化学计量学软件对采集的数据进行处理分析。制草乌和伪品中3种成分的含量比例显著不同,制草乌中苯甲酰新乌头原碱为含量最高的成分,伪品中苯甲酰乌头原碱含量最高。苯甲酰新乌头原碱与苯甲酰乌头原碱含量比值在正、伪品中差异大,正品约为10,伪品约为3/100;苯甲酰次乌头原碱与苯甲酰乌头原碱含量比值差异大,正品约为1,伪品约为3/100。该法建立的制草乌特征图谱专属性强,可结合3种主要成分含量的比例特征鉴别正、伪品,为规范制草乌药材的使用提供科学依据。

基于细胞膜色谱法的新疆准噶尔乌头中抗EGFR活性成分筛选

目的:从准噶尔乌头中筛选抗EGFR作用的活性成分,并考察筛选成分对HEK293细胞和EGFR/HEK293高表达细胞株的抑制活性。方法:用高表达表皮生长因子受体细胞膜色谱(EGFR/CMC)通过十通切换阀与高效液相色谱(HPLC)构成二维在线联用色谱系统,将CMC上保留的组分进行接液,用离线MS来鉴定准噶尔乌头中抗EGFR活性成分;利用分子模拟对接实验分析活性成分与受体的相互作用方式;体外用MTT实验证实活性组分对HEK293细胞和EGFR/HEK293高表达细胞株的抑制作用。结果:乌头碱、12-表-欧乌碱、准噶尔乌头碱为作用于EGFR的有效成分,并具有与对照药物吉非替尼类似的色谱保留特性;分子模拟对接实验表明这些成分与EGFR的相互作用方式与阳性药吉非替尼相似;MTT实验证实在浓度为0.4~50μmol·L^(-1)范围内乌头碱,12-表-欧乌碱,准噶尔乌头碱对HEK293细胞增殖与EGFR高表达的体外抑制作用具有剂量依赖性。结论:筛选的结果与生物效应相一致;在线EGFR/CMC-HPLC-MS二维色谱系统在中药复杂体系中快速筛选发现活性物和药物先导物方面具有良好的应用前景,同时充分展现了细胞膜色谱法操作简便,快速,高效灵敏的优势。